KC bunky
Všeobecné informácie
| Popis | KC (Kc167) je embryonálna bunková línia Drosophila melanogaster odvodená zo samčieho embrya vo štádiu dorzálneho uzatvárania, zaregistrovaná v databáze Cellosaurus pod označením CVCL_Z833. Táto línia bola pôvodne založená a široko sa používa v bunkovej biológii Drosophila, genetických skríningoch a funkčnej genomike. Bunky Kc167 boli imortalizované vírusom SV40 a rastú poloadhezívne, pričom tvoria zmiešanú populáciu pripojených a voľne plávajúcich buniek. Patria medzi najlepšie charakterizované bunkové línie Drosophila a sú plne vhodné na génové umlčanie sprostredkované RNAi, čo z nich robí kľúčový model pre celogenómové skríningy RNAi v biológii bezstavovcov. Bunky KC sú použiteľné v bunkovej biológii Drosophila, pri celogenómových skríningoch pomocou RNAi a CRISPR, pri štúdiách signálnych transdukčných dráh (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB), vo výskume vrodenej imunity a v komparatívnych štúdiách evolučne konzervovaných dráh. Úplne sekvenovaný a anotovaný genóm Drosophila v kombinácii s rozsiahlymi verejnými databázami RNAi reagencií (napr. DRSC/TRiP) robí z buniek KC mimoriadne výkonný nástroj pre objektívne funkčné genomické objavy. Vzhľadom na imortalizáciu vírusom SV40 sa na ne vzťahuje klasifikácia BSL-2. KC bunky sa kultivujú v Schneiderovom médiu pre Drosophila doplnenom o 2 mM glutamínu a 10 % FBS. Dôležité je, že bunkové línie Drosophila sa kultivujú pri teplote 25 °C na voľnom vzduchu bez CO₂ (nie pri 37 °C / 5 % CO₂, ako je to v prípade cicavčích buniek). Bunky sa pasážujú jemným resuspendovaním a riedením (poloadherentný rast). Médium sa obnovuje alebo bunky sa riedia každé 2–3 dni. |
|---|---|
| Organizmus | Drosophila melanogaster (ovocná muška) |
| Tkanivo | Embryo |
| Choroba | Normálne |
| Metastatické miesto | Embryo (štádium uzatvárania chrbtovej steny) |
| Aplikácie | Bunka biológia Drosophila; celogenómové skríningy pomocou RNAi; skríningy pomocou CRISPR; signálna transdukcia (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB); vrodená imunita; funkčná genomika bezstavovcov |
| Synonymá | KC, K C |
Charakteristika
| Vek | Fáza uzatvárania chrbtovej časti |
|---|---|
| Pohlavie | Ženy |
| Morfológia | Čiastočne priliehavý, epitelový typ |
| Typ bunky | Embryonálne bunky |
| Rastové vlastnosti | čiastočne priliehavý |
Regulačné údaje
| Citácie | KC (katalógové číslo Cytion 300604) |
|---|---|
| Úroveň biologickej bezpečnosti | 2 |
| NCBI_TaxID | 7227 |
| CellosaurusAccession | CVCL_Z833 |
| Status GMO | GMO-S2: Táto bunková línia Drosophila obsahuje stabilne integrovanú imortalizačnú kazetu SV40. Je potrebné dodržiavať bezpečnostnú úroveň BSL-2. Toto zaradenie platí iba v Nemecku a v iných krajinách sa môže líšiť. |
Biomolekulárne údaje
| Citlivosť na vírusy | SV40 – vírus spôsobujúci nesmrteľnosť |
|---|
Spracovanie
| Kultúrne médium | Schneiderovo médium pre Drosophila + 2 mM glutamín + 10 % fetálneho bovinného séra (FBS). |
|---|---|
| Doplnky | Do živného média pridajte 2 mM glutamínu a 10 % FBS |
| Disociačné činidlo | Nie je potrebné (čiastočne prilnuté; jemne resuspendujte) |
| Zdvojnásobenie času | približne 24 až 48 hodín |
| Subkultivácia | Jemne pipetujte kultúru, aby sa čiastočne adhezívne bunky opäť suspendovali. Preneste primeraný objem do novej fľaše a pridajte čerstvé, vopred zahriate Schneiderovo médium. Zrieďte na hustotu 5 × 10⁵ až 1 × 10⁶ buniek/ml. Inkubujte pri teplote 25 °C na vzduchu bez CO₂. |
| Pomer rozdelenia | 1 až 3 |
| Hustota výsevu | 5 × 10⁵ až 1 × 10⁶ buniek/ml |
| Obnova tekutín | Každé 2 až 3 dni |
| Zmrazovacie médium | Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie regenerácie a zníženie stresu spôsobeného kryo. |
| Rozmrazovanie a kultivácia buniek |
|
| Inkubačná atmosféra | 25 °C, okolité ovzdušie (nie je potrebný CO₂). |
| Podmienky prepravy | Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu. |
| Podmienky skladovania | Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka. |
Kontrola kvality a molekulárna analýza
Dohoda o prenose materiálu
Ak máte v úmysle používať bunkové línie Cytion výlučne na interný výskum v jednom výskumnom zariadení, vyplňte a podpíšte našu Zmluvu o prevode materiálu (MTA) a odošlite ju spolu s objednávkou.
V prípade akéhokoľvek komerčného využitia – vrátane, ale nielen, práce za odmenu, testovania kontroly kvality, uvedenia produktu na trh, diagnostického využitia alebo regulačných štúdií – vyplňte formulár o zamýšľanom využití, aby sme mohli pripraviť zmluvu prispôsobenú vášmu projektu.
Upozornenie: Zmluva MTA sa vzťahuje iba na určité bunkové línie. Ak sa toto upozornenie a dokument MTA nachádzajú na stránke produktu, zmluva je platná. V prípade bunkových línií, na ktoré sa zmluva MTA nevzťahuje, nebude uvedený žiadny odkaz na zmluvu. Zmluva MTA nie je platná pre zákazníkov v Amerike, Číne alebo na Taiwane. Kontaktujte našu americkú pobočku, aby ste získali príslušnú zmluvu.