U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-celler
800,00 €*
Produkterna levereras frysta på torris i kryorör. Varje kryorör innehåller vanligtvis 3 × 10 6 celler för adherenta cellinjer eller 5 × 106 celler för suspensionscellinjer (se batchens CoA för mer information).
Allmän information
| Beskrivning | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 är en genredigerad human osteosarkomcellinje som härrör från U2OS-celler, där det endogena SEH1L-genet (SEH1) har modifierats med hjälp av CRISPR/Cas9-teknik för att koda för en in-frame SNAPf-tagg. SEH1 är en komponent i Y-komplexet (även känt som NUP107-160-komplexet), en central strukturell modul i kärnporekomplexet (NPC) som bidrar till porstommens sammansättning och stabilitet. Genom att infoga den SNAPf-kodande sekvensen vid den endogena lokusen uttrycks det taggade SEH1-proteinet under naturlig regulatorisk kontroll, vilket bevarar fysiologiska expressionsnivåer och minimerar störningar i kärnporernas sammansättning. SNAPf-taggen är en konstruerad, snabbverkande variant av SNAP-taggen som kovalent binder bensylguaninkonjugerade substrat, vilket möjliggör selektiv och stabil fluorescerande märkning i levande eller fixerade celler. I U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-celler lokaliseras fusionsproteinet till kärnmembranet i ett punktmönster som är karakteristiskt för NPC-distribution. Eftersom märkningen sker på endogena proteinnivåer är detta system väl lämpat för kvantitativ fluorescensmikroskopi, superupplösningsavbildning och enkelpartikelspårningsanalyser som syftar till att dissekera NPC-organisationen och stökiometrin. Den plana morfologin och de stora kärnorna i U2OS-celler underlättar ytterligare högupplöst visualisering av kärnmembranstrukturer. SEH1 deltar i NPC-biogenes och har också kopplats till kinetokorassocierade processer under mitosen. Följaktligen utgör denna cellinje en robust plattform för att undersöka cellcykelberoende NPC-montering och -demontering, den rumsliga organisationen av Y-komplexet inom porstommen och SEH1:s potentiella dubbla roller vid kärnmembranet och mitotiska kinetokorer. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 möjliggör mekanistiska studier av kärnporearkitekturen och dynamiken under fysiologiskt relevanta expressionsförhållanden. |
|---|---|
| Organism | Människan |
| Vävnad | Ben |
| Sjukdom | Osteosarkom |
Egenskaper
| Ålder | 15 år |
|---|---|
| Kön | Kvinna |
| Etnisk tillhörighet | Kaukasisk |
| Morfologi | Epitelliknande |
| Egenskaper för tillväxt | Följsam |
Lagstadgade uppgifter
| Citationstecken | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (Cytion katalognummer 300664) |
|---|---|
| Biosäkerhetsnivå | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| Insättare | Ellenberg-laboratoriet (EMBL) |
| GMO-status | GMO-S1: Denna mänskliga osteosarkomcellinje (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) innehåller en CRISPR-medierad SNAPf-SEH1-fusion som möjliggör selektiv märkning av SEH1-nukleoporinet. Modifieringen är stabilt närvarande. Denna klassificering gäller endast inom Tyskland och kan skilja sig åt på andra håll. |
Biomolekylära data
| Uttryck av protein | SEH1, SNAPf-tagg |
|---|
Hantering
| Kulturmedium | McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glukos, w: stabil Glutamin, w: 2,0 mM Natriumpyruvat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820200a) |
|---|---|
| Kosttillskott | Komplettera med 10% FBS, 3,0 g/L glukos, stabil glutamin, 2,0 mM natriumpyruvat, 2,2 g/L NaHCO3, 1% NEAA |
| Dissociationsreagens | Accutase |
| Subkulturering | Ta bort det gamla mediet från de adherenta cellerna och tvätta dem med PBS som saknar kalcium och magnesium. Använd 3-5 ml PBS för T25-kolvar och 5-10 ml för T75-kolvar. Täck sedan cellerna helt med Accutase, använd 1-2 ml för T25-kolvar och 2,5 ml för T75-kolvar. Låt cellerna inkubera i rumstemperatur i 8-10 minuter så att de lossnar. Efter inkubationen, blanda cellerna försiktigt med 10 ml medium för att resuspendera dem och centrifugera sedan vid 300xg i 3 minuter. Kassera supernatanten, resuspendera cellerna i färskt medium och överför dem till nya kolvar som redan innehåller färskt medium. |
| Frys mediet | Som kryokonserveringsmedium använder vi komplett tillväxtmedium (inklusive FBS) + 10% DMSO för adekvat viabilitet efter upptining, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress. |
| Upptining och odling av celler |
|
| Inkubationsatmosfär | 37°C, 5%CO2, befuktad atmosfär. |
| Ytbeläggning av flaska | För optimal vidhäftning och viabilitet efter upptining rekommenderar vi att kollagenbelagda kolvar eller plattor används. |
| Frysningsprocedur | Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring. |
| Leveransvillkor | Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring. |
| Förvaringsförhållanden | För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve. |
Kvalitetskontroll / Genetisk profil / HLA
| Sterilitet | Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik. För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner. |
|---|