HROHep03 Celler

Cytions Freeze Medium CM-1 är ett toppmodernt kryopreserveringsmedium som är utformat för att säkerställa högsta möjliga cellviabilitet och funktionalitet efter upptining. Detta mångsidiga medium är lämpligt för ett brett spektrum av celltyper, inklusive både mänskliga och animaliska celler, vilket gör det till ett viktigt verktyg för olika forskningsapplikationer. Freeze Medium CM-1 är formulerat med en noggrant balanserad kombination av kryoskyddsmedel och viktiga näringsämnen och minimerar bildandet av iskristaller och cellulär stress under frysningsprocessen, vilket bevarar cellens integritet.
Viktiga egenskaper hos Freeze Medium CM-1 inkluderar:

Bred kompatibilitet: Effektivt för ett stort antal olika celltyper, inklusive primära celler, stamceller och etablerade cellinjer.
Hög viabilitet: Optimerat för att maximera cellåtervinning och viabilitet efter upptining, vilket säkerställer tillförlitliga experimentella resultat.
Redo att använda: Bekvämt förberedd och steriliserad för omedelbar användning, vilket minskar förberedelsetiden och risken för kontaminering.
Förbättrad stabilitet: Upprätthåller konsekvent prestanda under standardförhållanden för kryokonservering, vilket säkerställer reproducerbara resultat.
Lång hållbarhetstid: CM-1 är ett serumhaltigt kryopreserveringsmedium som är färdigt att använda och kan förvaras i kylskåp i upp till ett år.


Användning av CM-1 för frysning av celler

Följ dessa steg för att använda CM-1 för frysning av både adherenta celler och suspenderade celler

För adherenta celler, tvätta och separera dem från odlingssubstratet. För suspenderade celler, fortsätt direkt till nästa steg.
Räkna cellerna för att säkerställa att de har rätt koncentration.
Centrifugera cellerna för att pelletera dem och resuspendera sedan i CM-1-frysmedium.
Överför de resuspenderade cellerna till kryovialer.
Använd en metod med långsam frysning innan cellerna överförs till långtidsförvaring





Metod
Beskrivning av metoden
Steg för steg





❄️
Manuell frysning

En steg-för-steg-metod som innebär gradvis temperatursänkning för att säkerställa cellernas livskraft

1️⃣ Placera cellerna i frysmedium i en 4°C frys i 40 minuter.
2️⃣ Överför till en frys på -80°C i 24 timmar.
3️⃣ Förvara cellerna i flytande kväve för långtidsförvaring



❄️
Användning av Mr Frosty

En praktisk anordning som möjliggör kontrollerade fryshastigheter utan elektrisk ström

1️⃣ Förbered celler i kryovialer med frysmedium.
2️⃣ Placera kryovialerna i Mr Frosty-behållaren.
3️⃣ Förvara vid -80°C i 24 timmar innan du överför till flytande kväve



❄️
Frys med kontrollerad hastighet

En högprecisionsfrys från Thermo Fisher eller andra tillverkare som är utformad för kontrollerad temperatursänkning

1️⃣ Programmera enheten för att gradvis sänka temperaturen.
2️⃣ Placera de förberedda cellerna i frysen.
3️⃣ Efter fryscykeln, överför cellerna till flytande kväve









Förvara kryovialerna vid temperaturer under -130°C eller i flytande kväve för långtidsförvaring.


Ingredienser

Innehåller FBS, DMSO, glukos, salter
Buffringskapacitet: pH = 7,2 till 7,6


Cytions Freeze Medium CM-1 erbjuder en tillförlitlig lösning för kryokonservering, vilket säkerställer hög cellviabilitet och funktionalitet efter upptining för ett brett spektrum av forskningsapplikationer.

DMEM:Ham's F12 är ett allmänt erkänt och mycket använt basmedium inom cellodling för biologisk forskning. Det fungerar som en grundläggande näringskälla för tillväxten av olika däggdjurscellinjer, särskilt när det kompletteras med fetalt bovint serum (FBS).

Denna unika formulering kombinerar Dulbeccos modifierade Eagle-medium (DMEM) och Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) i ett exakt förhållande på 1:1. Tillsatsen av L-glutamin förbättrar dess sammansättning ytterligare.

DMEM, som härstammar från Eagles Minimal Essential Medium (EMEM), erbjuder en högre koncentration av aminosyror och vitaminer jämfört med sin föregångare. Däremot är Hams F-12 baserat på Hams F-10-medium, vilket tillhandahåller en kompletterande uppsättning av väsentliga komponenter.

För att stödja optimal celltillväxt är det vanligt att komplettera DMEM:Ham's F12 med FBS i en typisk koncentration på 5–10 %. Detta tillskott är nödvändigt eftersom mediet saknar tillväxthormoner, lipider och proteiner som är avgörande för cellutvecklingen.

DMEM:Ham's F12 innehåller ett pH-buffertsystem och kompletteras ofta med fenolrött, en pH-indikator. Odlade celler i DMEM:Ham's F12, eller något annat medium som använder bikarbonatbuffertsystemet, kräver en kontrollerad CO2-miljö på 5–10 % för att upprätthålla lämpliga pH-nivåer. 


Kvalitetskontroll

Sterilfiltrerat


Förvaring och hållbarhet

Förvaras vid +2 °C till +8 °C, skyddat från ljus.
Efter öppnandet ska produkten förvaras vid 4 °C och användas inom 6–8 veckor.


Transportförhållanden

Rumstemperatur


Förvaring

Förvara i kylskåp vid +2 °C till +8 °C i mörker. Undvik frysning och frekvent uppvärmning till +37 °C, eftersom detta försämrar produktens kvalitet.
Värm inte mediet över 37 °C och använd inte okontrollerade värmekällor såsom mikrovågsugnar.
Om endast en del av mediet ska användas, ta ut den nödvändiga mängden och värm den till rumstemperatur före användning.


Sammansättning



Kategori
Beståndsdelar
Koncentration (mg/l)


Aminosyror
Glycin
18,75


L-alanin
4,45


L-arginin-HCl
147,50


L-asparagin H₂O
7,50


L-asparaginsyra
6,65


L-cystein HCl H₂O
17,56


L-cystin 2 HCl
31,29


L-glutaminsyra
7,35


L-glutamin
365,00


L-histidin HCl H₂O
31,48


L-isoleucin
54,47


L-leucin
59,05


L-lysin-HCl
91,25


L-metionin
17,24


L-fenylalanin
35,48


L-prolin
17,25


L-serin
26,25


L-treonin
53,45


L-tryptofan
9,02


L-tyrosin 2 Na 2 H2O
55,79


L-valin
52,85


Vitaminer
D-biotin
0,0035


Kolin klorid
8,98


D-kalciumpantotenat
2,24


Folsyra
2,66


myo-inositol
12,60


Nikotinamid
2,02


Pyridoxin-HCl
0,031


Pyridoxal-HCl
2,00


Riboflavin
0,219


Tiamin-HCl
2,17


Vitamin B12
0,68



Oorganiska salter
CaCl2 2 H2O
154,50


CuSO4 5 H2O
0,0013


Fe(NO3)3 9 H2O
0,05


FeSO4 7 H2O
0,417


KCl
311,80


MgCl2 6 H2O
61,20


MgSO4 7 H2O
100,00


NaCl
6996,00


NaHCO3
1200,00


Na2HPO4
71,02


NaH2PO4 2 H2O
70,87


ZnSO4 7 H2O
0,432



Övriga komponenter
D-glukos
3151,00


Hypoxantin
2,40


HEPES
3574,50


Linolsyra
0,042


Liponsyra
0,105


Fenolrött natriumsalt
8,63


Putrescin-2-HCl
0,081


Natriumpyruvat
55,00


Tymidin
0,365

Accutase cellavskiljningslösning med EDTA och fenolrött – 100 ml

Accutase är en färdig att använda, sterilt filtrerad cellavskiljningslösning som är utformad som ett skonsamt alternativ till trypsin/EDTA för att separera vidhäftande däggdjursceller från standardplastutrustning för vävnadsodling och ytor med vidhäftningsbeläggning. Den kombinerar proteolytisk och kollagenolytisk enzymaktivitet i en balanserad saltlösning för att ge effektiv men kontrollerad separering, vilket bevarar proteiner på cellytan och främjar hög livskraft efter passage samt snabb återvidhäftning.

Accutase-formuleringen är baserad på Dulbeccos fosfatbuffrade saltlösning (DPBS) med EDTA och fenolrött som visuell pH-indikator. Enzymerna är av icke-däggdjurs
- och icke-bakteriellt ursprung, vilket gör Accutase särskilt väl lämpad för stamcellsforskning, vaccinarbetsflöden och alla tillämpningar där föroreningar av animaliskt eller mikrobiellt ursprung måste minimeras. Lösningen autoinhiberas vid 37 °C, så inget neutraliserande reagens eller serumhaltigt medium krävs efter avskiljningen – cellerna kan överföras direkt till färskt medium.

Viktiga egenskaper

Användningsfärdig 1x sterilfiltrerad vätska – ingen utspädning eller rekonstituering krävs
Kombinerad proteolytisk och kollagenolytisk enzymaktivitet för skonsam dissociation
Varje batch standardiserad till en definierad dissociationsaktivitet för konsistens mellan olika partier
Enzymer av icke-mammaliskt och icke-bakteriellt ursprung
Autoinhiberas vid 37 °C – ingen neutraliserande lösning behövs
Formulerad i Dulbeccos PBS med EDTA
Fenolrött ingår som visuell pH-indikator
pH 6,8–7,8


Typiska tillämpningar
Accutase dissocierar skonsamt en mängd olika vidhäftande och känsliga celltyper, inklusive humana embryonala stamceller (hESCs), humana inducerade pluripotenta stamceller (iPSCs), neurala stamceller, primära neuroner och rutinmässigt odlade vidhäftande cellinjer såsom HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 och A549. Typiska användningsområden inkluderar:

Rutinmässig subkultur och passering av vidhäftande däggdjursceller
Skonsam dissociation av enskilda celler från hESCs, iPSCs och andra känsliga cellinjer
Provberedning för flödescytometri och FACS-analys
Analys av cellytmarkörer där epitopintegriteten är viktig
Analyser av cellmigrering, proliferation och apoptos
Quiescensanalyser genom serumdeprivation och studier av onkogen-transfektion
Migrationsanalyser av tumörceller och neurala krestceller
Uppskalning av produktionen i bioreaktorarbetsflöden

För rutinarbete, applicera cirka 10 ml Accutase per 75 cm2 odlingsyta och inkubera i 5–10 minuter vid rumstemperatur. Den optimala inkubationstiden bör bestämmas för varje cellinje och bör inte överstiga en timme. Innan tillsats, skölj cellskiktet med en Ca2+/Mg2+-fri saltlösning, såsom DPBS utan kalcium och magnesium, för att avlägsna kvarvarande serum och tvåvärda katjoner.

Hantering och förvaring
Förvara den oöppnade flaskan fryst vid -15 °C eller lägre. Tina antingen vid rumstemperatur eller över natten vid +2 °C till +8 °C. Tina inte Accutase i ett 37 °C varmt vattenbad, eftersom förhöjda temperaturer minskar enzymaktiviteten. Efter upptining kan lösningen förvaras i upp till 2 månader vid +2 °C till +8 °C; förvara inte vid rumstemperatur. Förvärm inte reagenset till 37 °C före användning – tillsätt det direkt till tvättade celler vid rumstemperatur. För långvarig hållbarhet rekommenderas engångsaliquotering för att undvika upprepade upptiningscykler. Arbeta alltid under aseptiska förhållanden.

Kvalitet
Tillverkat enligt strikta kvalitetsstandarder. Varje batch av Accutase är sterilt filtrerad och testad med avseende på sterilitet, pH, utseende och dissociationsaktivitet för att säkerställa enhetlig, reproducerbar prestanda från batch till batch.

Produktspecifikationer



Specifikation
Detalj



ProdukttypReagens för cellavskiljning/dissociation
FormatSterilfiltrerad vätska, färdig att använda
Volym100 ml
Arbetskoncentration1x (färdig att använda)
EnzymaktivitetKombinerad proteolytisk och kollagenolytisk
Enzymets ursprungIcke-däggdjurs
- och icke-bakteriellt
BuffertsystemDulbeccos PBS med EDTA
pH-indikatorFenolrött
pH-intervall6,8 – 7,8
UtseendeKlar, ljusröd till orange lösning
Förvaringstemperatur-15 °C eller lägre
Hållbarhet efter upptiningUpp till 2 månader vid +2 °C till +8 °C
Rekommenderad användningsvolym~10 ml per 75 cm² odlingsyta
Typisk inkubationstid5–10 minuter vid rumstemperatur
TransportförhållandenFryst på torris
Avsedd användningEndast för forskningsändamål och vidare tillverkning



Formulering (sammansättning per liter)



Komponent
Koncentration (mg/l)




Oorganiska salter

Natriumklorid (NaCl)8000,00
Dinatriumvätefosfat (Na2HPO4)1150,00
Kaliumklorid (KCl)200,00
Kaliumdihydrogenfosfat (KH2PO4)200,00

Övriga komponenter

EDTA · 4Na (tetranatrium-EDTA)220,00
Fenolrött3,00
Patenterad enzymblandning (proteolytisk och kollagenolytisk aktivitet)1x



Accutase är ett registrerat varumärke som tillhör Innovative Cell Technologies, Inc.

Produktöversikt
Volym: 100 ml Förvaring: ≤-15°C Sterilitet: Sterilt filtrerad
Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) är ett sterilt, bruksfärdigt koncentrat som är utformat för att minska riskerna för mikrobiell kontaminering vid cellodling och relaterade laboratorieapplikationer. Denna 100x-lösning innehåller en väletablerad kombination av penicillin, streptomycin och amfotericin B, vilket ger en bredspektrig antimikrobiell aktivitet mot grampositiva och gramnegativa bakterier, jästsvampar och filamentösa svampar. Formuleringen är lämplig för användning i eukaryota cellkulturer, bakteriemedier och andra kontaminationskänsliga system, vilket stöder en ren och konsekvent laboratorieverksamhet.
Tillämpning och fördelar Denna lösning är optimerad för rutinmässiga forskningsprotokoll och används ofta för att upprätthålla aseptiska förhållanden i arbetsflöden för cellodling. Den ger tillförlitlig prestanda i kontamineringskänsliga miljöer och hjälper forskare att minska risken för mikrobiell överväxt utan att äventyra cellernas hälsa eller experimentens reproducerbarhet. Den sterilfiltrerade formuleringen eliminerar behovet av ytterligare solubiliseringssteg, vilket ger en strömlinjeformad medieberedning och minskar variabiliteten i de dagliga laboratorieprocedurerna.
Användning och kompatibilitet För att uppnå standardiserade arbetskoncentrationer, späd lösningen 1:100 i ditt kompletta odlingsmedium. Produkten är kompatibel med ett brett spektrum av mammaliecellinjer och basala medier. Med konsekvent lagertillgänglighet kan forskare dra nytta av pålitlig leveranskontinuitet och förenklad logistikplanering. Lösningen ska förvaras vid ≤ -15 °C och skyddas från upprepade frys
- och upptiningscykler för att bibehålla stabiliteten. Endast för forskningsändamål. Ej för användning i diagnostiska eller terapeutiska procedurer. Ej för användning på människor eller djur.

Fosfatbuffrad saltlösning (PBS)
Fosfatbuffrad saltlösning (PBS) är en buffertlösning som används i stor utsträckning inom biologisk och kemisk forskning. Den spelar en avgörande roll för att upprätthålla pH-balansen och osmolariteten under olika experimentella procedurer, inklusive vävnadsbearbetning och cellodling. Vår PBS-lösning är noggrant formulerad med ingredienser med hög renhet för att säkerställa stabilitet och tillförlitlighet i varje experiment. Osmolariteten och jonkoncentrationerna i vår PBS efterliknar i hög grad de som finns i människokroppen, vilket gör den isotonisk och giftfri för de flesta celler.

Sammansättning av vår PBS-lösning
Vår PBS-lösning är en pH-justerad blandning av fosfatbuffertar och saltlösningar av ultrapur kvalitet. Vid en 1X arbetskoncentration innehåller den:

8000 mg/L natriumklorid (NaCl)
200 mg/L kaliumklorid (KCl)
1150 mg/L Natriumfosfat dibasisk vattenfri (Na2HPO4)
200 mg/L Kaliumfosfat monobasiskt vattenfritt (KH2PO4)

Denna sammansättning säkerställer en optimal pH
- och jonbalans, lämplig för ett brett spektrum av biologiska tillämpningar.

Tillämpningar av vår PBS-lösning
Vår PBS-lösning är idealisk för olika tillämpningar inom biologisk forskning. Dess isotoniska och giftfria egenskaper gör den lämplig för utspädning av substanser och sköljning av cellbehållare. PBS-lösningar som innehåller EDTA är effektiva för att frigöra fastsittande och klumpade celler. Tvåvärda metaller som zink bör dock inte tillsättas i PBS, eftersom det kan orsaka utfällning. I sådana fall rekommenderas Good's buffertar. Dessutom är vår PBS-lösning ett godtagbart alternativ till viralt transportmedium för transport och förvaring av RNA-virus, inklusive SARS-CoV-2.

Kvalitetskontroll

Sterilt filtrerad


Förvaring och hållbarhetstid

Förvaras vid +2°C till +25°C, skyddat från ljus.
Efter öppnandet, förvara vid 2°C till 25°C och använd inom 24 månader.


Förhållanden vid leverans

Omgivande temperatur


Underhåll

Förvaras i kylskåp vid +2°C till +8°C i mörker. Undvik frysning och frekvent uppvärmning till +37°C, eftersom det försämrar produktkvaliteten.
Värm inte upp mediet över 37°C och använd inte okontrollerade värmekällor som t.ex. mikrovågsugnar.
Om endast en del av mediet ska användas, ta ut den mängd som behövs och värm det till rumstemperatur före användning.

Sammansättning



Kategori
Komponenter
Koncentration (mg/L)


Salter
Kaliumklorid
200



Kaliumfosfat monobasiskt vattenfritt
200



Natriumklorid
8000



Natriumfosfat dibasisk vattenfri
1150