Walker-256 (LLC-WRC 256) Celler

Cytions frysemedium CM-1 er et toppmoderne kryopreserveringsmedium som er utviklet for å sikre det høyeste nivået av cellelevedyktighet og funksjonalitet etter opptining. Dette allsidige mediet er egnet for et bredt spekter av celletyper, inkludert både humane og animalske celler, noe som gjør det til et viktig verktøy for ulike forskningsapplikasjoner. Freeze Medium CM-1 er formulert med en nøye balansert kombinasjon av kryobeskyttende midler og essensielle næringsstoffer, og minimerer dannelsen av iskrystaller og cellestress under fryseprosessen, slik at cellenes integritet bevares.
De viktigste egenskapene til Freeze Medium CM-1 inkluderer

Bred kompatibilitet: Effektivt for et bredt spekter av celletyper, inkludert primærceller, stamceller og etablerte cellelinjer.
Høy levedyktighet: Optimalisert for å maksimere cellegjenvinning og levedyktighet etter opptining, noe som sikrer pålitelige eksperimentelle resultater.
Klar til bruk: Praktisk tilberedt og sterilisert for umiddelbar bruk, noe som reduserer forberedelsestiden og risikoen for kontaminering.
Forbedret stabilitet: Opprettholder konsistent ytelse under standard kryopreserveringsforhold, noe som sikrer reproduserbare resultater.
Lang holdbarhet: CM-1 er et serumholdig kryopreserveringsmedium som er klart til bruk, og som kan oppbevares i kjøleskapet i opptil ett år.


Bruk av CM-1 til nedfrysing av celler

Følg disse trinnene for å bruke CM-1 til nedfrysing av både adherente celler og suspensjonsceller

For adherente celler, vask og dissosier dem fra kultursubstratet. For suspensjonsceller går du direkte til neste trinn.
Tell cellene for å sikre at de har riktig konsentrasjon.
Sentrifuger cellene for å pelleter dem, og resuspender dem deretter i CM-1-frysemedium.
Overfør de resuspenderte cellene til kryovialer.
Bruk en langsom nedfrysingsmetode før du overfører cellene til langtidslagring





Metode
Beskrivelse
Trinn





❄️
Manuell frysing

En trinnvis metode som innebærer gradvis reduksjon av temperaturen for å sikre cellenes levedyktighet

1️⃣ Plasser celler i frysemedium i en fryser på 4 °C i 40 minutter.
2️⃣ Overfør til en fryser på -80 °C i 24 timer.
3️⃣ Oppbevar cellene i flytende nitrogen for langtidsoppbevaring



❄️
Bruk av Mr. Frosty

Et praktisk apparat som gjør det mulig å kontrollere frysehastigheten uten elektrisk strøm

1️⃣ Klargjør celler i kryovialer med frysemedium.
2️⃣ Plasser kryovialene i Mr. Frosty-beholderen.
3️⃣ Oppbevares ved -80 °C i 24 timer før de overføres til flytende nitrogen



❄️
Fryser med kontrollert hastighet

En høypresisjonsfryser fra Thermo Fisher eller andre produsenter som er utviklet for kontrollert temperaturreduksjon

1️⃣ Programmer enheten til å senke temperaturen gradvis.
2️⃣ Plasser de forberedte cellene i fryseren.
3️⃣ Etter frysesyklusen overføres cellene til flytende nitrogen









Oppbevar kryovialene ved temperaturer under -130 °C eller i flytende nitrogen for langtidsoppbevaring.


Ingredienser

Inneholder FBS, DMSO, glukose, salter
Bufferkapasitet: pH = 7,2 til 7,6


Cytions frysemedium CM-1 er en pålitelig løsning for kryopreservering som sikrer høy cellelevedyktighet og funksjonalitet etter opptining for et bredt spekter av forskningsapplikasjoner.

RPMI 1640 Medium, også kjent som RPMI-medium, er et svært allsidig cellekulturmedium som er mye brukt i biologisk forskning for å dyrke ulike pattedyrceller. Dette mediet ble utviklet av George E. Moore, Robert E. Gerner og H. Addison Franklin i 1966 ved det anerkjente Roswell Park Comprehensive Cancer Center, og har fått navnet sitt fra Roswell Park Memorial Institute (RPMI).
RPMI 1640 Medium ble opprinnelig utviklet for å støtte veksten av humane leukemiceller i både suspensjons
- og monolagskulturer, men har gjennom modifikasjoner fra forskere og kommersielle leverandører utviklet seg til å bli egnet for et bredt spekter av pattedyrceller. Det er eksepsjonelt kompatibelt med cellelinjer som HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocytter og karsinomer.
RPMI 1640 Medium skiller seg ut fra andre cellekulturmedier på grunn av sin unike sammensetning. Det inneholder en betydelig mengde fosfat, aminosyrer og vitaminer. Det inneholder blant annet biotin, vitamin B12 og PABA, som ikke finnes i Eagle's Minimal Essential Medium eller Dulbecco's Modified Eagle Medium. RPMI 1640 Medium har dessuten betydelig høyere konsentrasjoner av vitaminene inositol og kolin. Det inneholder imidlertid ikke proteiner, lipider eller vekstfaktorer. Derfor er det ofte nødvendig å tilsette 10 % føtalt bovint serum (FBS) for å skape optimale forhold for cellevekst.
Buffersystemet i RPMI 1640 Medium er basert på natriumbikarbonat og krever et 5-10 % CO2-miljø for å opprettholde en fysiologisk passende pH. Inkluderingen av reduksjonsmidlet glutation skiller dette mediet ytterligere fra andre.
Kvalitetskontroll

Sterilfiltrert


Oppbevaring og holdbarhet

Oppbevares ved +2 °C til +8 °C, beskyttet mot lys.
Etter åpning, oppbevar ved 4 °C og bruk innen 6-8 uker.


Transportforhold

Omgivelsestemperatur


Vedlikehold

Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Unngå frysing og hyppig oppvarming til +37 °C, da det reduserer produktkvaliteten.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerte varmekilder som mikrobølgeovner.
Hvis bare en del av mediet skal brukes, ta ut den nødvendige mengden og varm den opp til romtemperatur før bruk.



Sammensetning




Kategori
Komponenter
Konsentrasjon (mg/L)


Aminosyrer
Glysin
10.00



L-Alanyl-L-glutamin
434.40



L-arginin
200.00



L-asparaginH2O
56.82



L-asparaginsyre
20.00



L-Cystin 2HCl
65.20



L-glutaminsyre
20.00



L-Histidin HClH2O
20.27



L-hydroksy-L-prolin
20.00



L-isoleucin
50.00



L-Leucin
50.00



L-Lysin HCl
40.00



L-metionin
15.00



L-fenylalanin
15.00



L-prolin
20.00



L-Serin
30.00



L-Threonin
20.00



L-Tryptofan
5.00



L-Tyrosin 2Na 2H2O
28.83



L-Valin
20.00


Vitaminer
p-aminobensoesyre
1.00



D-Biotin
0.20



Kolinklorid
3.00



D-kalsiumpantotenat
0.25



Folsyre
1.00



myo-Inositol
35.00



Nikotinamid
1.00



Pyridoksin HCl
1.00



Riboflavin
0.20



Tiamin HCl
1.00



Vitamin B12
0.005


Uorganiske salter
Ca(NO3)2 4H2O
100.00



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
100.00



NaCl
6000.00



NaHCO3
2000.00



Na2HPO4
800.00


Andre komponenter
D-Glukose
2000.00



L-glutation redusert
1.00



Fenolrødt natriumsalt
5.30

Accutase celleavløsningsløsning med EDTA og fenolrød – 100 ml

Accutase er en bruksklar, sterilt filtrert celleavløsningsløsning utviklet som et skånsomt alternativ til trypsin/EDTA for å løsne vedheftende pattedyrceller fra standard plastutstyr for vevskultur og overflater med vedheftbelegg. Den kombinerer proteolytisk og kollagenolytisk enzymaktivitet i en balansert saltløsning for å gi effektiv, men kontrollert løsning, samtidig som proteiner på celleoverflaten bevares og høy levedyktighet etter passering samt rask gjenfesting støttes.

Accutase-formuleringen er basert på Dulbeccos fosfatbufferte saltvann (DPBS) med EDTA og fenolrødt som en visuell pH-indikator. Enzymerne er av ikke-pattedyr
- og ikke-bakteriell opprinnelse, noe som gjør Accutase spesielt godt egnet til stamcelleforskning, vaksinearbeidsflyter og alle anvendelser der forurensninger av animalsk eller mikrobiell opprinnelse må minimeres. Løsningen hemmer seg selv ved 37 °C, så det kreves ikke noe nøytraliserende reagens eller serumholdig medium etter løsrivelse – cellene kan overføres direkte til ferskt medium.

Viktige egenskaper

Klar til bruk 1x sterilt filtrert væske – ingen fortynning eller rekonstituering nødvendig
Kombinert proteolytisk og kollagenolytisk enzymaktivitet for skånsom dissosiasjon
Hver batch er standardisert til en definert dissosiasjonsaktivitet for konsistens fra parti til parti
Enzymer av ikke-pattedyr
- og ikke-bakteriell opprinnelse
Selvhemmer ved 37 °C – ingen nøytraliserende løsning nødvendig
Formulert i Dulbeccos PBS med EDTA
Fenolrødt inkludert som visuell pH-indikator
pH 6,8–7,8


Typiske anvendelser
Accutase dissocierer skånsomt et bredt spekter av vedheftende og følsomme celletyper, inkludert humane embryonale stamceller (hESCs), humane induserte pluripotente stamceller (iPSCs), nevrale stamceller, primære nevroner og rutinemessig dyrkede vedheftende cellelinjer som HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 og A549. Typiske bruksområder inkluderer:

Rutinemessig subkultur og passering av vedheftende pattedyrceller
Skånsom enkeltcelle-dissociasjon av hESC, iPSC og andre følsomme linjer
Prøveforberedelse for strømningscytometri og FACS-analyse
Analyse av celleoverflatemarkører der epitopintegritet er viktig
Assayer for cellemigrasjon, proliferasjon og apoptose
Hvileassays ved serumdeprivasjon og onkogen-transfeksjonsstudier
Migrasjonstester av tumorceller og nevralkamceller
Oppskalering av produksjonen i bioreaktor-arbeidsflyter

For rutinearbeid, påfør ca. 10 ml Accutase per 75 cm2 kulturoverflate og inkuber i 5–10 minutter ved romtemperatur. Den optimale inkubasjonstiden bør bestemmes for hver cellelinje og bør ikke overstige en time. Før tilsetning, skyll cellelaget med en Ca2+/Mg2+-fri saltløsning, for eksempel DPBS uten kalsium og magnesium, for å fjerne rester av serum og toverdige kationer.

Håndtering og oppbevaring
Oppbevar den uåpnede flasken frosset ved -15 °C eller lavere. Tine enten ved romtemperatur eller over natten ved +2 °C til +8 °C. Ikke tine Accutase i et 37 °C vannbad, da høye temperaturer reduserer enzymaktiviteten. Etter tining kan løsningen oppbevares i opptil 2 måneder ved +2 °C til +8 °C; ikke oppbevar ved romtemperatur. Ikke forvarm reagensen til 37 °C før bruk – tilsett den direkte til vasket celler ved romtemperatur. For lang holdbarhet anbefales det å dele opp i engangsdoser for å unngå gjentatte tinesykluser. Arbeid alltid under aseptiske forhold.

Kvalitet
Produsert under strenge kvalitetsstandarder. Hver batch av Accutase er sterilt filtrert og testet for sterilitet, pH, utseende og dissosiasjonsaktivitet for å sikre konsistent, reproduserbar ytelse fra batch til batch.

Produktspesifikasjoner



Spesifikasjon
Detalj



ProdukttypeReagens for celleavløsning/dissosiasjon
FormatSterilfiltrert væske, klar til bruk
Volum100 ml
Arbeidskonsentrasjon1x (klar til bruk)
EnzymaktivitetKombinert proteolytisk og kollagenolytisk
Enzymets opprinnelseIkke-pattedyr og ikke-bakteriell
BuffersystemDulbeccos PBS med EDTA
pH-indikatorFenolrød
pH-område6,8 – 7,8
UtseendeKlar, lysrød til oransje løsning
Oppbevaringstemperatur-15 °C eller lavere
Stabilitet etter tiningOpptil 2 måneder ved +2 °C til +8 °C
Anbefalt bruksvolum~10 ml per 75 cm² kulturoverflate
Typisk inkubasjonstid5–10 minutter ved romtemperatur
FraktbetingelserFrosset på tørris
Tilsiktet brukKun til forskningsbruk og videre produksjon



Formulering (sammensetning per liter)



Komponent
Konsentrasjon (mg/L)




Uorganiske salter

Natriumklorid (NaCl)8000,00
Dinatriumhydrogenfosfat (Na2HPO4)1150,00
Kaliumklorid (KCl)200,00
Kaliumdihydrogenfosfat (KH2PO4)200,00

Andre komponenter

EDTA · 4Na (tetranatrium-EDTA)220,00
Fenolrød3,00
Proprietær enzymblanding (proteolytisk og kollagenolytisk aktivitet)1x



Accutase er et registrert varemerke tilhørende Innovative Cell Technologies, Inc.

Produktoversikt
Volum: 100 ml Oppbevaring: ≤-15 °C Sterilitet: Sterilfiltrert
Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) er et sterilt, bruksklart konsentrat som er utviklet for å redusere risikoen for mikrobiell kontaminering i cellekulturer og relaterte laboratorieapplikasjoner. Denne 100x-løsningen inneholder en veletablert kombinasjon av penicillin, streptomycin og amfotericin B, som gir bredspektret antimikrobiell aktivitet mot grampositive og gramnegative bakterier, gjærsopp og filamentøse sopper. Formuleringen er egnet for bruk i eukaryote cellekulturer, bakteriemedier og andre systemer som er følsomme for kontaminering, og støtter rene og konsekvente laboratorieoperasjoner.
Anvendelse og fordeler Denne løsningen er optimalisert for rutinemessige forskningsprotokoller og brukes i stor utstrekning for å opprettholde aseptiske forhold i arbeidsflyter for cellekulturer. Den gir pålitelig ytelse i kontamineringssensitive miljøer, og hjelper forskere med å redusere risikoen for mikrobiell overvekst uten at det går på bekostning av cellenes helse eller eksperimentell reproduserbarhet. Den sterilfiltrerte formuleringen eliminerer behovet for ytterligere solubiliseringstrinn, noe som bidrar til strømlinjeformet tilberedning av medier og reduserer variabiliteten i daglige laboratorieprosedyrer.
Bruk og kompatibilitet For å oppnå standard arbeidskonsentrasjoner fortynner du løsningen 1:100 i ditt komplette dyrkingsmedium. Produktet er kompatibelt med et bredt spekter av pattedyrcellelinjer og basalmedier. Med konsekvent lagertilgjengelighet kan forskere dra nytte av pålitelig forsyningskontinuitet og forenklet logistikkplanlegging. Løsningen skal oppbevares ved ≤ -15 °C og beskyttes mot gjentatte fryse-tine-sykluser for å opprettholde stabiliteten. Kun til forskningsbruk. Ikke til bruk i diagnostiske eller terapeutiske prosedyrer. Ikke til bruk på mennesker eller dyr.

Fosfatbufret saltvannsløsning (PBS)
Fosfatbufret saltvann (PBS) er en mye brukt bufferløsning i biologisk og kjemisk forskning. Den spiller en avgjørende rolle når det gjelder å opprettholde pH-balansen og osmolariteten under ulike eksperimentelle prosedyrer, inkludert vevsprosessering og cellekultur. Vår PBS-løsning er omhyggelig formulert med ingredienser av høy renhet for å sikre stabilitet og pålitelighet i hvert eneste eksperiment. Osmolariteten og ionekonsentrasjonene i PBS-løsningen vår etterligner i stor grad de som finnes i menneskekroppen, noe som gjør den isotonisk og ugiftig for de fleste celler.

Sammensetningen av vår PBS-løsning
Vår PBS-løsning er en pH-justert blanding av ultrarene fosfatbuffere og saltvannsløsninger. Ved en 1X arbeidskonsentrasjon inneholder den

8000 mg/L natriumklorid (NaCl)
200 mg/L kaliumklorid (KCl)
1150 mg/L vannfritt dibasisk natriumfosfat (Na2HPO4)
200 mg/L Vannfritt kaliumfosfat monobasisk (KH2PO4)

Denne sammensetningen sikrer en optimal pH
- og ionebalanse, og er egnet for et bredt spekter av biologiske anvendelser.

Bruksområder for vår PBS-løsning
Vår PBS-løsning er ideell for ulike bruksområder innen biologisk forskning. De isotone og giftfrie egenskapene gjør den egnet til fortynning av substanser og skylling av cellebeholdere. PBS-løsninger som inneholder EDTA, er effektive for å løsne celler som sitter fast og klumper seg sammen. PBS bør imidlertid ikke tilsettes toverdige metaller som sink, da dette kan føre til utfelling. I slike tilfeller anbefales Good's buffere. I tillegg er vår PBS-løsning et akseptabelt alternativ til viralt transportmedium for transport og lagring av RNA-virus, inkludert SARS-CoV-2.

Kvalitetskontroll

Sterilfiltrert


Oppbevaring og holdbarhet

Oppbevares ved +2 °C til +25 °C, beskyttet mot lys.
Etter åpning, oppbevares ved 2 °C til 25 °C og brukes innen 24 måneder.


Transportforhold

Omgivelsestemperatur


Vedlikehold

Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Unngå frysing og hyppig oppvarming til +37 °C, da det reduserer produktkvaliteten.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerte varmekilder som mikrobølgeovner.
Hvis bare en del av mediet skal brukes, ta ut den nødvendige mengden og varm den opp til romtemperatur før bruk.

Sammensetning



Kategori
Komponenter
Konsentrasjon (mg/L)


Salter
Kaliumklorid
200



Kaliumfosfat, vannfritt, monobasisk
200



Natriumklorid
8000



Natriumfosfat, vannfritt, dibasisk
1150