SiHa-celler – kaster lys over forskningen på livmorhalskreft
SiHa-celler er livmorhalskreftceller som er mye brukt i biomedisinsk forskning. De er utmerkede transfeksjonsverter og egner seg derfor godt til studier av genuttrykk. På grunn av sin menneskelige opprinnelse og relevans for livmorhalskreft brukes disse cellene hovedsakelig i studier innen kreftbiologi, virologi og legemiddelutvikling.
- Vekstmedium
- Eagle's minimum essential medium (EMEM) som inneholder 10 % FBS, 2 mM L-glutamin, 2,2 g/L NaHCO₃ og Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) brukes for optimal vekst av SiHa-celler. Mediet skiftes ut 2 til 3 ganger per uke.
- Fordoblingstid
- Fordoblingstiden for SiHa-celler er omtrent 17 timer.
- Veksttype
- SiHa er en vedheftende cellelinje.
- Biosikkerhetsnivå
- BSL-1
- Tilgjengelig fra
- Cytion — Bestill SiHa
Generelle egenskaper og opprinnelse til SiHa-celler
Det er avgjørende å forstå en cellelinjes opprinnelse og generelle egenskaper, da dette påvirker bruken av den i din forskning. I denne delen av artikkelen vil du lære om SiHa-cellelinjens opprinnelse, særegne egenskaper og mye mer: Hva er SiHa-kreftcellelinjen? Hva er SiHa-celler og HPV? Hva er opprinnelsen til SiHa-cellelinjen? Hva er morfologien til SiHa?
- SiHa, celleinjen for livmorhalskreft, ble utvunnet fra fragmenter av en primær livmorbiopsi fra en asiatisk kvinne (55 år) med plateepitelkreft [1].
- SiHa-cellelinjen har en hypertriploid karyotype. De fleste cellene har et gjennomsnittlig kromosomtall mellom 69 og 72. Imidlertid har rundt 24 % av cellene et modalt kromosomtall på 71.
- SiHa-cellene er humane papillomavirus 16-positive. De viser integrasjon av rundt 1 til 2 kopier av HPV-genomet per celle [2].
- Disse livmorhalskreftcellene har en epitelial morfologi.
SiHa-cellelinje: Informasjon om dyrking
Det er ikke lett å opprettholde en cellelinjekultur før man kjenner til alle de viktigste punktene for dyrking av den. Du bør vite: Hva er doblingstiden til SiHa? Hva er SiHa-cellemedium? Hvordan dyrker man SiHa-cellelinjen?
Viktige punkter for dyrking av SiHa-celler
Fordoblingstid:
Fordoblingstiden for SiHa-celler er omtrent 17 timer.
Adherente eller i suspensjon:
SiHa er en vedheftende cellelinje.
Subkultiveringsforhold:
Subkultiveringsforholdet for SiHa-celler er 1:2 til 1:4. Ved passering skylles de vedheftende cellene med 1x PBS. Accutase-løsning tilsettes, og cellene inkuberes i 8 til 10 minutter ved romtemperatur. Deretter tilsettes dyrkningsmedium, og cellene sentrifugeres. Cellepelleten resuspenderes, og cellene helles over i en ny kolbe for dyrking.
Vekstmedium:
Eagle's minimum essential medium (EMEM) som inneholder 10 % FBS, 2 mM L-glutamin, 2,2 g/L NaHCO₃ og Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) brukes for optimal vekst av SiHa-celler. Mediet skiftes ut 2 til 3 ganger per uke.
Vekstbetingelser:
SiHa-celler oppbevares i en fuktet inkubator ved 37 °C med 5 % CO₂-tilførsel.
Oppbevaring:
De frosne ampullene med SiHa-cellekulturen for livmorhalskreft oppbevares ved temperaturer under -150 °C i en elektrisk fryser eller i dampfasen av flytende nitrogen for lengre tids oppbevaring.
Fryseprosess og medium:
CM-1 eller CM-ACF frysemedium brukes til frysing av SiHa-celler. Cellene fryses ved hjelp av en langsom frysemetode som tillater kun en temperaturreduksjon på 1 °C per minutt for å beskytte cellenes levedyktighet.
Tineprosess:
Frosne celler holdes i 40 til 60 sekunder i et vannbad ved 37 °C til det kun gjenstår en liten isklump. Deretter tilsettes ferskt vekstmedium, og cellene sentrifugeres for å fjerne komponenter fra frysemediet. Cellepelleten resuspenderes, og cellene overføres til en kulturflaske for vekst.
Biosikkerhetsnivå:
Det kreves et laboratorium med biosikkerhetsnivå 1 for håndtering og vedlikehold av SiHa-cellekulturer.
Fordeler og ulemper ved SiHa-cellelinjen
I likhet med andre humane karsinomcellelinjer har også SiHa noen særegne egenskaper som er forbundet med visse fordeler og ulemper. Her har vi drøftet noen av de viktigste.
Fordeler ved SiHa-celleinjen for livmorhalskreft
- Modell for livmorhalskreft
- Avledet fra plateepitelkarsinom i livmorhalsen.
- Brukes til å studere mekanismer, vekst og utvikling av livmorhalskreft.
- Eksponerer genene p53+ og pRB+, som er knyttet til DNA-reparasjon, regulering av cellesyklusen og tumorsuppresjon.
- Tumorogenisk potensial
- SiHa-celler er tumorigeniske og kan indusere dårlig differensierte epidermoide svulster av grad III hos nakne mus.
- Brukes til in vivo kreftforskning og testing av kreftbehandlinger.
Ulemper ved SiHa-celler
- Proliferasjonshastighet
- SiHa-celler prolifererer raskt, noe som fører til overvekst.
- Krever hyppig passering, noe som øker risikoen for genetisk ustabilitet, noe som kan påvirke cellenes oppførsel over tid.
Forskningsanvendelser av SiHa-celler
SiHa-cellelinjen brukes i stor utstrekning i forskning på livmorhalskreft. Her drøftes noen spesifikke anvendelser av denne cellelinjen.
- Studier relatert til humant papillomavirus (HPV): SiHa-celler er HPV 16-positive og er derfor verdifulle enheter for å studere humant papillomavirusinfeksjon, dets molekylære mekanismer og dets rolle i utviklingen og progresjonen av livmorhalskreft. Forskere bruker også disse cellene til å undersøke viral replikasjon, integrasjon og dens innvirkning på vertscelleprosesser. I en studie gjennomført i 2020 ble SiHa-cellelinjen brukt til å undersøke hvilken rolle HPV E6/E7-onkoproteiner spiller i utviklingen av livmorhalskreft ved å målrette dem med CRISPR-teknologi. Funnene viste at nedregulering av E6/E7-genene førte til hemmet vekst og apoptose i SiHa-cellene. Disse virale genene kan derfor fungere som viktige mål for utvikling av behandlinger mot HPV-assosiert livmorhalskreft [3].
- Kreftbiologi: SiHa-celler fungerer som en uvurderlig modell for å studere livmorhalskreftbiologi, inkludert kreftutvikling, progresjon, metastasering og invasjon. Forskere bruker disse cellene til å utforske de genetiske mutasjonene og de underliggende molekylære signalveiene som bidrar til utvikling og vekst av livmorhalskreft; for eksempel ble SiHa-celler brukt i en studie som viste at oppregulert SEC61G (SEC61-translokon-subenhet gamma) fremmer proliferasjon av livmorhalskreftceller gjennom aktivering av MAPK-kaskaden [4].
- Legemiddelscreening og -testing: SiHa er en mye brukt livmorhalskreftlinje for å vurdere effekten av potensielle kreftmedisiner spesifikt rettet mot HPV-assosiert livmorhalskreft. Forskere undersøker legemidlers antiproliferative, apoptotiske og antimetastatiske potensial ved hjelp av disse cellene. For eksempel en studie utført i 2019 som undersøkte det cytotoksiske potensialet til fruktekstrakter fra Vatica diospyroides Symington Type SS på SiHa-livmorhalskreftcellelinjen [5].
SiHa-celler til din forskning!
Forskningspublikasjoner som omhandler SiHa-celler
Noen viktige og ofte siterte forskningspublikasjoner omhandler SiHa-cellelinjen for plateepitelkarsinom i livmorhalsen.
Denne publikasjonen i OncoTargets and Therapy (2019) foreslo at det naturlige stoffet aloe-emodin utøver apoptotiske effekter knyttet til HPV E6/E7 og glukosemetabolismen i SiHa-celler fra livmorhalskreft.
Denne artikkelen ble publisert i Future Journal of Pharmaceutical Sciences i 2022. Denne studien undersøkte antitumoraktiviteten til bladekstrakt fra Excoecaria agallocha (L.) i SiHa-celle-linjen for livmorhalskreft.
Denne studien, publisert i Journal of Sol-Gel Science and Technology (2022), foreslo at 1,10-fenantrolinmolekylet, ved kobling med zinksulfat-nanopartikler, utøver betydelige antiproliferative effekter i SiHa-celler.
Denne forskningen ble publisert i Oncology Reports i 2019. Studien avslørte at Astragalosid IV, et naturprodukt, hemmer migrasjonen og invasjonen av SiHa-celler ved å modulere de TGF‑β1‑medierte PI3K- og MAPK-signalveiene.
Denne studien i tidsskriftet *Biomedicine & Pharmacotherapy* (2020) viste at IFI16 (interferon-gamma-induserbart protein 16) regulerer PD-L1-genet ved å aktivere STING-TBK1-NF-kB-signalveien for å fremme veksten av SiHa-livmorhalskreftceller.
Ressurser for SiHa-cellelinjen: Protokoller, videoer og mer
Her er noen nettressurser om SiHa-cellene.
- Transfeksjon av SiHa-celler: Denne forskningsartikkelen inneholder en protokoll for vedlikehold av SiHa-celler fra livmorhalskreft og for transfeksjon av SiHa-celler.
Følgende lenke inneholder informasjon om cellekultur for SiHa-celler.
- SiHa-cellelinjen: Dette nettstedet inneholder mye verdifull informasjon om SiHa-cellelinjen. Dette inkluderer informasjon om vekstmedier, dyrkingsbetingelser, protokoller for subkultivering av SiHa-celler og håndtering av proliferative og kryokonserverte kulturer.
Ofte stilte spørsmål om SiHa-celler fra livmorhalskreft
Referanser
- Melzer, C., J. von der Ohe og R. Hass, Kortfattet oversikt: Samspillet mellom mesenkymale stroma-/stamcellelignende celler og kreftceller gir terapeutisk potensial. Stem cells, 2018. 36(7): s. 951–968.
- Ostrowska, K.M. m.fl., Undersøkelse av innvirkningen av høyrisiko-humant papillomavirus på den biokjemiske sammensetningen av livmorhalskreftceller ved hjelp av vibrasjonsspektroskopi. Analyst, 2010. 135(12): s. 3087–3093.
- Chen, Y., m.fl., In vitro- og in vivo-veksthemming av humane livmorhalskreftceller gjennom spalting av humant papillomavirus E6/E7-mRNA ved hjelp av CRISPR/Cas13a-systemet. Antiviral Research, 2020. 178: s. 104794.
- Fan, Y., et al., SEC61G fremmer spredning av livmorhalskreft ved å aktivere MAPK-signalveien. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A., et al., Kreftbekjempende potensial hos fruktekstrakter fra Vatica diospyroides symington type SS og deres effekt på programmert celledød i livmorhalskreftcellelinjer. The Scientific World Journal, 2019. 2019.