Panc 10.05 Cellen

1. Controleer of de flacon bij levering diepgevroren blijft, aangezien de cellen op droog ijs worden verzonden om optimale temperaturen tijdens het transport te behouden.

2. Bewaar het cryoflesje na ontvangst onmiddellijk bij temperaturen lager dan -150 °C om de integriteit van de cellen te behouden, of ga verder met stap 3 als onmiddellijke kweek vereist is.

3. Voor onmiddellijke kweek moet de flacon snel worden ontdooid door deze onder te dompelen in een waterbad van 37 °C met schoon water en een antimicrobieel middel, waarbij gedurende 40-60 seconden zachtjes wordt geschud totdat er een klein ijsklontje overblijft.

4. Voer alle volgende stappen uit onder steriele omstandigheden in een stromingskap en desinfecteer de cryoflacon met 70% ethanol voor het openen.

5. Open voorzichtig de gedesinfecteerde flacon en breng de celsuspensie over in een centrifugebuis van 15 ml met 8 ml kweekmedium op kamertemperatuur en meng voorzichtig.

6. Centrifugeer het mengsel bij 300 x g gedurende 3 minuten om de cellen te scheiden en gooi het supernatant met resterend vriesmedium voorzichtig weg. Eventueel het centrifugeren overslaan, maar na 24 uur het achtergebleven vriesmedium verwijderen.

7. Resuspendeer de celpellet voorzichtig in 10 ml vers kweekmedium. Verdeel bij adherente cellen de suspensie over twee T25-kweekkolven; breng bij suspensiekweken al het medium over in één T25-kweekkolf om effectieve celinteractie en -groei te bevorderen.

8. Houd u aan de vastgestelde subcultuurprotocollen voor continue groei en onderhoud van de cellijn, om betrouwbare experimentele resultaten te garanderen.

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.