DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucose, w: 1,6 mM L-Glutamine, w: 15 mM HEPES, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat, w: 1,2 g/L NaHCO3
DMEM:Ham's F12 is een algemeen erkend en veelgebruikt basismedium in celkweek voor biologisch onderzoek. Het dient als een fundamentele bron van voedingsstoffen voor de groei van verschillende zoogdiercellijnen, vooral wanneer het wordt aangevuld met foetaal runderserum (FBS).
Deze unieke formulering combineert Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) en Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) in een nauwkeurige 1:1 verhouding. De toevoeging van L-glutamine verbetert de samenstelling nog verder.
DMEM, afgeleid van Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), biedt een verhoogde concentratie aminozuren en vitaminen vergeleken met zijn voorganger. Ham's F-12 daarentegen is gebaseerd op Ham's F-10 medium en biedt een aanvullende set essentiële componenten.
Om optimale celgroei te ondersteunen, is het gebruikelijk om DMEM:Ham's F12 aan te vullen met FBS in een typische concentratie van 5-10%. Deze toevoeging is nodig omdat het medium geen groeihormonen, lipiden en eiwitten bevat die cruciaal zijn voor de ontwikkeling van cellen.
DMEM:Ham's F12 bevat een pH-buffersysteem en wordt vaak aangevuld met fenolrood, een pH-indicator. Voor het kweken van cellen in DMEM:Ham's F12, of elk medium dat het bicarbonaat-buffersysteem gebruikt, is een gecontroleerde CO2-omgeving van 5-10% nodig om de juiste pH-niveaus te handhaven. Fenolrood maakt het mogelijk om pH-veranderingen van 6,2 (geel) tot 8,2 (rood) te controleren.
Kwaliteitscontrole
- pH = 7,2 +/- 0,02 bij 20-25°C.
- Elk lot is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
- Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
- Verwarm het medium niet tot meer dan 37°C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetrons).
- Als slechts een deel van het medium moet worden gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
- Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen | mg/L | |
Anorganische zouten | Calciumchloride x 2H2O | 154,45 |
IJzer(III)nitraat x 9H2O | 0,05 | |
IJzer(II)-sulfaat x 7H2O | 0,42 | |
Kaliumchloride | 311,83 | |
Koper(II)-sulfaat x 5H2O | 0.001 | |
Watervrij magnesiumchloride | 28,57 | |
Magnesiumsulfaat | 48,85 | |
Natriumchloride | 6,999.50 | |
Natriumdiwaterstoffosfaat watervrij | 54,35 | |
dinatriumwaterstoffosfaat | 70,98 | |
Zinksulfaat x 7H2O | 0,43 | |
Andere componenten | D(+)-Glucose watervrij | 3,151.00 |
HEPES | 3,574.50 | |
Hypoxanthine | 2,04 | |
Linolzuur | 0,04 | |
DL-68 liponzuur | 0.103 | |
Natriumpyruvaat | 110,00 | |
Fenol rood | 8,10 | |
Putrescine x 2HCl | 0.081 | |
Thymidine | 0,36 | |
Aminozuren | L-Alanine | 4,45 |
L-Arginine x HCl | 147,35 | |
L-Asparagine x H2O | 7,50 | |
L-Asparaginezuur | 6,65 | |
L-Cystine x 2HCl | 31,29 | |
L-Cysteïne x HCl x H2O | 17,56 | |
L-Glutamine | 365,00 | |
L-Glutaminezuur | 7,35 | |
Glycine | 18,75 | |
L-Histidine x HCl x H2O | 31,48 | |
L-Isoleucine | 54,37 | |
L-Leucine | 58,96 | |
L-Lysine x HCl | 91,37 | |
L-Methionine | 17,24 | |
L-Fenylalanine | 35,48 | |
L-proline | 17,27 | |
L-Serine | 26,25 | |
L-Threonine | 53,55 | |
L-Tryptofaan | 9,02 | |
L-Tyrosine x 2Na x 2H2O | 55,81 | |
L-Valine | 52,66 | |
Vitaminen | D-(+)-Biotine | 0,004 |
D-Calcium pantothenaat | 2,12 | |
Choline chloride | 8,98 | |
Foliumzuur | 2,66 | |
myo-Inositol | 12,51 | |
Nicotinamide | 2,02 | |
Pyridoxine x HCl | 2,03 | |
Riboflavine | 0,22 | |
Thiamine x HCl | 2,17 | |
Vitamine B12 | 0,68 | |
NaHCO3 | 1,200.00 |