661w šūnas

661W ir peles konusa fotoreceptoru atvasināta šūnu līnija, kas sākotnēji izveidota no tīklenes audzēja, kas radies transgēnā pelē, kura ekspresē simian vīrusu 40 (SV40) lielā T antigēna kontrolē cilvēka starpfotoreceptoru retinoīdu saistošā proteīna (IRBP) promotora. Līnija tika izveidota no pēcdzemdību tīklenes eksplantātiem un pārstāv nemirstīgus konusa fotoreceptoru prekursorus. 661W šūnas izrāda adhezīvu augšanu un tiek regulāri uzturētas Dulbecco modificētā Eagle vidē, kas papildināta ar embrija liellopu serumu standarta kultivēšanas apstākļos. Tās ir plaši izmantotas kā konusa fotoreceptoru in vitro modelis, jo īpaši pētījumos par gaismas izraisītiem bojājumiem, oksidatīvo stresu, apoptozi un tīklenes deģeneratīvajiem mehānismiem.

Molekulārā un transkriptomiskā raksturojuma analīze apstiprina, ka 661W šūnas ekspresē lielāko daļu konusa fotoreceptoru marķieru, tostarp konusa opsīnus un fototransdukcijas saistītos gēnus. Augstas izšķirtspējas attēlveidošanas pētījumi liecina, ka šīs šūnas veido primāros cilijus ar strukturālām īpašībām, kas atgādina fotoreceptoru savienojošos cilijus un ārējos segmentus. Imunocitokīmiskās un ultrastrukturālās analīzes atklāj ciliju proteīnu lokalizāciju aksonēmā, membrānā un pārejas zonā, kas apstiprina to lietderību tīklenes ciliju patoloģiju izpētē. Funkcionālie pētījumi ir parādījuši, ka siRNA mediēta intraflagellāro transporta gēnu, piemēram, Ift88, nomākšana izraisa ciliju zudumu, apstiprinot 661W kā piemērotu sistēmu ciliju bioloģijas mehānisko pētījumu veikšanai.

661W šūnas ir ļoti jutīgas pret fotooksidatīvo stresu. Saskare ar redzamo gaismu izraisa apoptozes šūnu nāvi, kas saistīta ar NF-κB aktivitātes samazināšanos un kaspāzes ceļu aktivizēšanos. Anti-apoptozes proteīnu, piemēram, Bcl-2, pārmērīga ekspresija piešķir rezistenci pret gaismas izraisītu apoptozi, uzturot NF-κB kodola aktivitāti un uzlabojot šūnu izdzīvošanu. Šīs īpašības padara 661W par stabilu modeli fotoreceptoru deģenerācijas molekulāro ceļu izpētei. Ir svarīgi atzīmēt, ka 661W līnija ir bijusi iesaistīta arī vēsturiskos šūnu līnijas nepareizas identifikācijas gadījumos, tostarp krusteniskā kontaminācijā ar RGC-5 līniju, kas uzsver nepieciešamību pēc stingras autentifikācijas, izmantojot šo modeli. Kopumā 661W nodrošina labi raksturotu peles konusa fotoreceptoru platformu tīklenes deģenerācijas, oksidatīvā stresa reakciju, cilāriju funkcijas un terapeitisko intervenču, kas vērstas uz konusa izdzīvošanu, pētīšanai.