HaCaT-solut
Olennaiset tosiasiat Hacat-kennoista
| Kuvaus | HaCaT-solut ovat keskeinen malli dermatologisessa tutkimuksessa, sillä ne tarjoavat tietoa ihon biologian ja patologian monimutkaisista mekanismeista. Spontaanisti kuolematon HaCaT-solulinja on peräisin aikuisen ihmisen epidermissoluista, ja se säilyttää kyvyn lisääntyä ja erilaistua, kuten tyvikeratinosyytit in vivo. HaCaT-solut toimivat vankkana alustana epidermiksen erilaistumisprosessin tutkimiseen ja ihon eheyden ylläpitämisen kannalta olennaisten epidermiksen erilaistumisen merkkiaineiden tutkimiseen. HaCaT-solujen alttiutta apoptoosille ja niiden herkkyyttä apoptoosia indusoiville aineille tutkitaan laajasti, erityisesti sytotoksisten aineiden, kuten RIPL:n, yhteydessä. Tutkijat arvioivat näiden aineiden sytotoksisuutta ja sytotoksisuuden laajuutta HaCaT-solujen avulla ja käyttävät solumuutosten visualisointiin tekniikoita, kuten fluoresenssimikroskopiaa. Tutkijat ovat käyttäneet HaCaT-soluja erilaisten aineiden, kuten antimikrobisten substraattien, vaikutusten ja niiden vaikutuksen solujen elinkelpoisuuteen tutkimiseen. Nämä solut ovat erinomainen substraatti antimikrobisten biomateriaalien ja antimikrobisten atelokollageenisubstraattien testaamiseen, jotka ovat ratkaisevan tärkeitä ihon korjaamisessa ja lääketieteellisissä sovelluksissa. HaCaT-epidermislinjalla on myös ratkaiseva rooli solujen vanhenemisen, sytokiinien ja ikääntymiseen ja kroonisiin sairauksiin liittyvien geeniekspressioprofiilien tutkimisessa. HaCaT-solujen transkriptioprofiilit, mukaan lukien κB:n ja mikroRNA:iden rooli, antavat tietoa molekyylitason säätelymekanismeista. HaCaT-keratinosyyttilinja tarjoaa epidermisen keratinosyytin ominaisuuksineen helposti käsiteltävän järjestelmän epidermisen solujen ja immuunijärjestelmän välisen monimutkaisen vuorovaikutuksen ja erityisesti keratinosyyttien roolin tutkimiseen sairaustiloissa. Niiden avulla voidaan tutkia epigeneettisiä muutoksia ja niiden vaikutusta keratinosyyttien erilaistumiseen, mukaan luettuna ihosolujen barrier-toiminnan kannalta keskeisen sarveistuneen kuoren muodostuminen. Yhteenvetona voidaan todeta, että HaCaT-solut ovat välttämätön malli dermatologisessa tutkimuksessa, sillä ne helpottavat ihon biologian ja patologian syvällisempää ymmärtämistä, koska ne muistuttavat tyvikeratinosyyttejä ja kykenevät solujen kasvuun ja erilaistumiseen. Niiden käyttö ulottuu epidermiksen erilaistumisen ja antimikrobisten vaikutusten tutkimisesta soluvasteiden, kuten apoptoosin, tutkimiseen, mikä tekee niistä solubiologian ja biolääketieteellisen tutkimuksen kulmakiven. |
|---|---|
| Organismi | Ihminen |
| Kudos | Iho |
Yksityiskohdat
| Ikä | 62 vuotta |
|---|---|
| Sukupuoli | Mies |
| Etnisyys | Kaukasialainen |
| Solutyyppi | Keratinosyytit, joiden halkaisija on 20-25 mikrometriä. |
| Kasvuominaisuudet | Tarttuva |
Dokumentaatio
| Viittaus | HaCaT (Cytionin luettelonumero 300493) |
|---|---|
| Bioturvallisuustaso | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusLiittyminen | CVCL_0038 |
HaCaT-keratinosyyttisolulinjan genetiikka
| Tumorigeeninen | Ei |
|---|---|
| Karyotyyppi | Aneuploidi (hypotetraploidi) |
Hacat-solulinjan käsittely
| Viljelyalusta | DMEM, w: 4,5 g/l glukoosia, w: 4 mM L-glutamiinia, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvaattia (Cytionin artikkelinumero 820300a) |
|---|---|
| Lisäravinteet | Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä |
| Dissosiaatioreagenssi | EDTA:n (kanta: 0,05 %) ja trypsiinin (kanta: 0,1 %) 1:1 seos on valmistettava joka kerta ennen solujen irrottamista käyttäen PBS:ää, jossa ei ole Ca2+ ja Mg2+, fysiologisen osmolaarisuuden aikaansaamiseksi. Käyttövalmiita trypsiinin/EDTA:n seoksia ei suositella, koska ne voivat aiheuttaa soluklönttejä. Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää TrypLE Expressiä (Life Technologies) trypsiinin/EDTA:n sijasta. Valmistajan protokollaa on noudatettava. |
| Kaksinkertaistumisaika | HaCaT-solujen kaksinkertaistumisaika on 28 tuntia. |
| Alakulttuuri |
|
| Jakosuhde | A ratio of 1:5 to 1:10 is recommended |
| Kylvötiheys | 1 x 104 solua/cm2 |
| Nesteen uusiminen | 2 kertaa viikossa |
| Jäädytä väliaine | Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä. |
| Solujen sulattaminen ja viljely |
|
| Inkubaatioilmapiiri | 37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä. |
| Pullon pinnoite | Optimaalisen kiinnittymisen ja elinkelpoisuuden saavuttamiseksi sulatuksen jälkeen suosittelemme kollageenipinnoitettujen pullojen tai levyjen käyttöä. |
| Jäädytysmenettely | Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon. |
| Toimitusehdot | Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon. |
| Varastointiolosuhteet | Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen. |
Laadunvarmistus
| Steriliteetti | Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä. Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti. |
|---|---|
| STR-profiili |
Amelogeniini: x,x
CSF1PO: 9,11
D13S317: 10,12
D16S539: 9,12
D5S818: 12
D7S820: 9,11
TH01: 09. Mrz
TPOX: 11,12
vWA: 16,17
D3S1358: 16
D21S11: 28,30.2
D18S51: 12
Penta E: 7,12
Penta D: 11,13
D8S1179: 14
FGA: 24
D1S1656: 11,12
D2S1338: 17,25
D12S391: 18,23
D19S433: 13,14
|
| HLA-alleelit |
A*: '31:01:02
B*: '40:01:02, '51:01:01
C*: '03:04:01, '15:02:01
DRB1*: '04:01:01, '15:01:01
DQA1*: '01:02:01, '03:03:01
DQB1*: '03:01:01, '06:02:01
DPB1*: '03:01:01, '04:01:01
E: '01:03:01, '01:03:02
|
Analyysitodistus (CoA)
| Erän numero | Todistuksen tyyppi | Päivämäärä | Luettelonumero |
|---|---|---|---|
| 300493-250324 | Analyysitodistus | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-190723 | Analyysitodistus | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-190124 | Analyysitodistus | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-170225SF | Analyysitodistus | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-170225 | Analyysitodistus | 23. May. 2025 | 300493 |
| 300493-040424 | Analyysitodistus | 23. May. 2025 | 300493 |