HEL 92.1.7 Solut

Cytionin Freeze Medium CM-1 on huipputekninen kryosäilytysmedium, joka on suunniteltu varmistamaan solujen elinkelpoisuuden ja toimivuuden korkein mahdollinen taso sulatuksen jälkeen. Tämä monipuolinen väliaine soveltuu monille eri solutyypeille, mukaan lukien ihmis
- ja eläinsolut, mikä tekee siitä välttämättömän työkalun erilaisiin tutkimussovelluksiin. Freeze Medium CM-1 on koostettu huolellisesti tasapainotetusta yhdistelmästä kryosuojakemikaaleja ja välttämättömiä ravintoaineita, ja se minimoi jääkiteiden muodostumisen ja solustressin jäädytysprosessin aikana, jolloin solujen eheys säilyy.
Freeze Medium CM-1:n tärkeimpiä ominaisuuksia ovat mm:

Laaja yhteensopivuus: Tehokas monenlaisille solutyypeille, mukaan lukien primaarisolut, kantasolut ja vakiintuneet solulinjat.
Korkea elinkelpoisuus: Optimoitu maksimoimaan solujen palautuminen ja elinkelpoisuus sulatuksen jälkeen, mikä takaa luotettavat koetulokset.
Käyttövalmis: Kätevästi valmisteltu ja steriloitu välitöntä käyttöä varten, mikä vähentää valmisteluaikaa ja kontaminaatioriskiä.
Parannettu stabiilisuus: Säilyttää tasaisen suorituskyvyn tavanomaisissa kryosäilytysolosuhteissa, mikä takaa toistettavat tulokset.
Pitkä säilyvyysaika: CM-1 on seerumia sisältävä, käyttövalmis kryosäilytysmedia, jota voidaan säilyttää jääkaapissa jopa vuoden ajan.


CM-1:n käyttö solujen pakastamiseen

Jos haluat käyttää CM-1:tä sekä adheesiosolujen että suspensiosolujen jäädyttämiseen, toimi seuraavasti

Adheesiosolut pestään ja irrotetaan viljelyalustasta. Jos kyseessä ovat suspensiosolut, siirry suoraan seuraavaan vaiheeseen.
Laske solut varmistaaksesi, että niiden pitoisuus on oikea.
Sentrifugoi solut pelletiksi ja suspendoi ne uudelleen CM-1-pakastusmediumiin.
Siirretään resuspendoidut solut kryopulloihin.
Käytä hidasta pakastusmenetelmää ennen solujen siirtämistä pitkäaikaissäilytykseen





Menetelmä
Kuvaus
Vaiheet





❄️
Manuaalinen jäädytys

Vaiheittainen menetelmä, jossa lämpötilaa alennetaan asteittain solujen elinkelpoisuuden varmistamiseksi

1️⃣ Aseta solut pakastusmediumiin 4 °C:n pakastimeen 40 minuutiksi.
2️⃣ Siirretään -80 °C:n pakastimeen 24 tunniksi.
3️⃣ Säilytä solut nestemäisessä typessä pitkäaikaissäilytystä varten



❄️
Mr. Frostyn käyttäminen

Kätevä laite, joka mahdollistaa hallitun pakastusnopeuden ilman sähkövirtaa

1️⃣ Valmistele solut kryopulloihin pakastusmediumilla.
2️⃣ Aseta kryopullot Mr. Frosty -astiaan.
3️⃣ Säilytä -80 °C:ssa 24 tuntia ennen siirtämistä nestemäiseen typpeen



❄️
Pakastin, jonka nopeus on säädetty

Thermo Fisherin tai muiden valmistajien korkean tarkkuuden pakastin, joka on suunniteltu lämpötilan hallittuun alentamiseen

1️⃣ Ohjelmoi laite alentamaan lämpötilaa asteittain.
2️⃣ Aseta valmistetut solut pakastimeen.
3️⃣ Siirrä solut pakastussyklin jälkeen nestemäiseen typpeen









Säilytä kryopullot alle -130 °C:n lämpötilassa tai nestemäisessä typessä pitkäaikaissäilytystä varten.


Ainesosat

Sisältää FBS:ää, DMSO:ta, glukoosia, suoloja
Puskurikyky: pH = 7,2-7,6


Cytionin Freeze Medium CM-1 tarjoaa luotettavan ratkaisun kryosäilytykseen, joka takaa solujen korkean elinkelpoisuuden ja toimivuuden sulatuksen jälkeen monenlaisissa tutkimussovelluksissa.

RPMI 1640 Medium, joka tunnetaan myös nimellä RPMI medium, on erittäin monipuolinen soluviljelyalusta, jota käytetään laajalti biologisessa tutkimuksessa erilaisten nisäkässolujen viljelyyn. George E. Moore, Robert E. Gerner ja H. Addison Franklin kehittivät sen vuonna 1966 maineikkaassa Roswell Park Comprehensive Cancer Centerissä, ja se on saanut nimensä Roswell Park Memorial Institute (RPMI) -nimisestä laitoksesta.
Alun perin se oli suunniteltu tukemaan ihmisen leukemiasolujen kasvua sekä suspensio
- että monokerrosviljelmissä, mutta tutkijoiden ja kaupallisten toimittajien tekemien muutosten myötä RPMI 1640 -medium on kehittynyt sopivaksi monille erilaisille nisäkässoluille. Se on poikkeuksellisen yhteensopiva sellaisten solulinjojen kanssa kuin HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrosyytit ja karsinoomat.
RPMI 1640 Medium erottuu muista soluviljelymedioista ainutlaatuisen koostumuksensa ansiosta. Se sisältää huomattavan määrän fosfaattia, aminohappoja ja vitamiineja. Erityisesti se sisältää biotiinia, B12-vitamiinia ja PABA:ta, joita ei ole Eagle's Minimal Essential Mediumissa tai Dulbecco's Modified Eagle Mediumissa. Lisäksi RPMI 1640 -mediassa on huomattavasti korkeammat inositoli
- ja koliinivitamiinien pitoisuudet. Se ei kuitenkaan sisällä proteiineja, lipidejä tai kasvutekijöitä. Näin ollen solujen kasvulle optimaalisten olosuhteiden luomiseksi tarvitaan yleensä 10 %:lla naudan sikiöseerumia (FBS).
RPMI 1640 -mediumin puskurointijärjestelmä perustuu natriumbikarbonaattiin, ja fysiologisesti sopivan pH:n ylläpitäminen edellyttää 5-10 %:n CO2-ympäristöä. Pelkistävän aineen, glutationin, sisältyminen tähän väliaineeseen erottaa tämän väliaineen edelleen muista.
Laadunvalvonta

Steriilisuodatettu


Varastointi ja säilyvyys

Säilytetään +2°C
- +8°C:ssa valolta suojattuna.
Kun se on avattu, säilytä 4 °C:ssa ja käytä 6-8 viikon kuluessa.


Toimitusolosuhteet

Ympäristön lämpötila


Huolto

Säilytettävä jääkaapissa +2°C
- +8°C:ssa pimeässä. Vältä pakastamista ja usein tapahtuvaa lämmittämistä +37°C:seen, koska se heikentää tuotteen laatua.
Älä lämmitä väliaineen lämpötilaa yli 37°C äläkä käytä kontrolloimattomia lämmönlähteitä, kuten mikroaaltolaitteita.
Jos väliaineesta käytetään vain osa, poista tarvittava määrä ja lämmitä se huoneenlämpöiseksi ennen käyttöä.



Koostumus




Luokka
Ainesosat
Pitoisuus (mg/l)


Aminohapot
Glysiini
10.00



L-Alanyyli-L-Glutamiini
434.40



L-arginiini
200.00



L-asparagiiniH2O
56.82



L-asparagiinihappo
20.00



L-kystiini 2HCl
65.20



L-glutamiinihappo
20.00



L-histidiini HClH2O
20.27



L-hydroksi-L-proliini
20.00



L-isoleusiini
50.00



L-leusiini
50.00



L-lysiini HCl
40.00



L-metioniini
15.00



L-Fenyylialaniini
15.00



L-Proliini
20.00



L-Seriini
30.00



L-treoniini
20.00



L-tryptofaani
5.00



L-tyrosiini 2Na 2H2O
28.83



L-valiini
20.00


Vitamiinit
p-Aminobentsoehappo
1.00



D-Biotiini
0.20



Koliinikloridi
3.00



D-kalsium-pantotenaatti
0.25



Foolihappo
1.00



myo-Inositoli
35.00



Nikotiiniamidi
1.00



Pyridoksiini HCl
1.00



Riboflaviini
0.20



Tiamiini HCl
1.00



B12-vitamiini
0.005


Epäorgaaniset suolat
Ca(NO3)2 4H2O
100.00



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
100.00



NaCl
6000.00



NaHCO3
2000.00



Na2HPO4
800.00


Muut komponentit
D-glukoosi
2000.00



L-Glutationi pelkistetty
1.00



Fenolipunainen natriumsuola
5.30

Accutase-solujen irrotusliuos, sisältää EDTA:ta ja fenolipunaväriainetta – 100 ml

Accutase on käyttövalmis, steriilisti suodatettu solujen irrotusliuos, joka on suunniteltu hellävaraiseksi vaihtoehdoksi trypsiinille/EDTA:lle kiinnittyneiden nisäkässolujen irrottamiseksi tavallisista kudosviljelymuovivälineistä ja tarttuviksi pinnoitetuista pinnoista. Se yhdistää proteolyyttisen ja kollageenolyyttisen entsyymiaktiivisuuden tasapainotetussa suolaliuoksessa tehokkaan mutta hallitun irrottamisen aikaansaamiseksi, säilyttäen solupinnan proteiinit ja tukien korkeaa elinkelpoisuutta siirron jälkeen sekä nopeaa uudelleenkiinnittymistä.

Accutase-valmiste perustuu Dulbeccon fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen (DPBS), jossa on EDTA:ta ja fenolipunainen visuaalisena pH-indikaattorina. Entsyymit ovat peräisin muista kuin nisäkkäistä tai bakteereista, minkä vuoksi Accutase sopii erityisen hyvin kantasolututkimukseen, rokotetyönkulkuihin ja muihin sovelluksiin, joissa eläin
- tai mikrobiperäisten kontaminanttien määrä on minimoitava. Liuos estää itsensä 37 °C:ssa, joten irrottamisen jälkeen ei tarvita neutraloivia reagensseja tai seerumia sisältävää elatusainetta – solut voidaan siirtää suoraan tuoreeseen elatusaineeseen.

Tärkeimmät ominaisuudet

Käyttövalmis 1x steriilisuodatettu neste – laimentamista tai rekonstituointia ei tarvita
Yhdistetty proteolyyttinen ja kollageenolyyttinen entsyymiaktiivisuus hellävaraista irrottamista varten
Jokainen erä on standardoitu määriteltyyn irrottamisaktiivisuuteen eräkohtaisen yhdenmukaisuuden varmistamiseksi
Entsyymit eivät ole peräisin nisäkkäistä tai bakteereista
Inhiboi itsensä 37 °C:ssa – neutralointiliuosta ei tarvita
Valmistettu Dulbeccon PBS:ssä EDTA:n kanssa
Sisältää fenolipunaisen visuaalisena pH-indikaattorina
pH 6,8–7,8


Tyypillisiä käyttökohteita
Accutase irrottaa hellävaraisesti monenlaisia kiinnittyneitä ja herkkiä solutyyppejä, mukaan lukien ihmisen alkion kantasolut (hESCs), ihmisen indusoidut pluripotentit kantasolut (iPSCs), hermoston kantasolut, primaariset neuronit sekä rutiinikäytössä olevat kiinnittyneet solulinjat, kuten HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 ja A549. Tyypillisiä käyttötapauksia ovat:

Adheesiivisten nisäkässolujen rutiininen aliviljely ja siirto
HES-solujen, iPS-solujen ja muiden herkkien solulinjojen hellävarainen yksittäisten solujen irrottaminen
Näytteiden valmistelu virtaussytometriaa ja FACS-analyysiä varten
Solupintamarkkerien analysointi, jossa epitopin eheys on tärkeää
Solujen migraatio-, proliferaatio
- ja apoptoosimääritykset
Lepotilan määritykset seerumin puutteella ja onkogeenien transfektiotutkimukset
Kasvainsolujen ja hermostopäällysteen solujen migraatiomääritykset
Tuotannon laajentaminen bioreaktoriprosesseissa

Rutiinityössä levitä noin 10 ml Accutasea 75 cm2:n viljelypinta-alaa kohti ja inkuboi 5–10 minuuttia huoneenlämmössä. Optimaalinen inkubointiaika on määritettävä kullekin solulinjalle erikseen, eikä se saa ylittää yhtä tuntia. Ennen lisäystä huuhtele solukerros Ca2+/Mg2+-vapaalla suolaliuoksella, kuten kalsiumia ja magnesiumia sisältämättömällä DPBS:llä, jotta poistat jäljellä olevan seerumin ja kaksiarvoiset kationit.

Käsittely ja säilytys
Säilytä avaamatonta pulloa pakastettuna -15 °C:ssa tai sitä alemmassa lämpötilassa. Sulata joko huoneenlämmössä tai yön yli +2 °C:ssa – +8 °C:ssa. Älä sulata Accutasea 37 °C:n vesihauteessa, sillä korkeat lämpötilat heikentävät entsyymiaktiivisuutta. Sulatuksen jälkeen liuosta voidaan säilyttää enintään 2 kuukautta +2 °C:ssa – +8 °C:ssa; älä säilytä huoneenlämmössä. Älä lämmitä reagenssia 37 °C:seen ennen käyttöä – lisää se suoraan pestyihin soluihin huoneenlämmössä. Pitkän säilyvyyden takaamiseksi suositellaan kertakäyttöisten alikvojen käyttöä, jotta vältytään toistuvilta sulatusjaksoilta. Työskentele aina aseptisissa olosuhteissa.

Laatu
Valmistettu tiukkojen laatustandardien mukaisesti. Jokainen Accutase-erä on steriilisuodatettu ja testattu steriilisyyden, pH:n, ulkonäön ja dissosiaatioaktiivisuuden osalta, jotta varmistetaan erästä toiseen yhdenmukainen ja toistettava suorituskyky.

Tuotetiedot



Tekniset tiedot
Yksityiskohdat



TuotetyyppiSolujen irrottamis-/dissosiaatioreagenssi
MuotoSteriilisuodatettu neste, käyttövalmis
Tilavuus100 ml
Käyttökonsentraatio1x (käyttövalmis)
EntsyymiaktiivisuusYhdistetty proteolyyttinen ja kollageenolyyttinen
Entsyymin alkuperäEi-nisäkäs
- ja ei-bakteeriperäinen
PuskurijärjestelmäDulbeccon PBS ja EDTA
pH-indikaattoriFenolipunainen
pH-alue6,8 – 7,8
UlkonäköKirkas, vaaleanpunainen tai oranssi liuos
Säilytyslämpötila-15 °C tai alle
Stabiilius sulatuksen jälkeenEnintään 2 kuukautta +2 °C – +8 °C:ssa
Suositeltu käyttömäärä~10 ml / 75 cm² viljelypintaa
Tyypillinen inkubointiaika5–10 minuuttia huoneenlämmössä
KuljetusolosuhteetPakastettu kuivajäällä
KäyttötarkoitusVain tutkimuskäyttöön ja jatkovalmistukseen



Koostumus (koostumus litraa kohti)



Komponentti
Pitoisuus (mg/l)




Epäorgaaniset suolat

Natriumkloridi (NaCl)8000,00
Dinatriumvetyfosfaatti (Na2HPO4)1150,00
Kaliumkloridi (KCl)200,00
Kaliumdihydrogeenifosfaatti (KH2PO4)200,00

Muut komponentit

EDTA · 4Na (tetranatrium-EDTA)220,00
Fenolipunainen3,00
Patentoitu entsyymiseos (proteolyyttinen ja kollageenolyyttinen aktiivisuus)1x



Accutase on Innovative Cell Technologies, Inc:n rekisteröity tavaramerkki.

Tuotteen yleiskatsaus
Tilavuus: 100 ml Säilytys: ≤-15°C Steriliteetti: Steriili suodatettu
Antibiootti-/antimykoottiliuos (100x) on steriili, käyttövalmis konsentraatti, joka on suunniteltu vähentämään mikrobikontaminaatioriskiä soluviljelyssä ja siihen liittyvissä laboratoriosovelluksissa. Tämä 100x-liuos sisältää vakiintuneen yhdistelmän penisilliiniä, streptomysiiniä ja amfoterisiini B:tä, joka tarjoaa laajakirjoisen antimikrobisen aktiivisuuden grampositiivisia ja gramnegatiivisia bakteereja, hiivoja ja säikeisiä sieniä vastaan. Valmiste soveltuu käytettäväksi eukaryoottisissa soluviljelmissä, bakteerialustoissa ja muissa kontaminaatioherkissä järjestelmissä, mikä tukee puhtaita ja johdonmukaisia laboratoriotoimintoja.
Käyttö ja hyödyt Rutiininomaisiin tutkimusprotokolliin optimoitua liuosta käytetään laajalti aseptisten olosuhteiden ylläpitämiseen soluviljelytyöprosesseissa. Se tarjoaa luotettavan suorituskyvyn kontaminaatioherkissä ympäristöissä ja auttaa tutkijoita vähentämään mikrobien liikakasvun riskiä vaarantamatta solujen terveyttä tai kokeiden toistettavuutta. Steriilisuodatettu koostumus poistaa tarpeen ylimääräisille liuotusvaiheille, mikä tukee virtaviivaista väliaineen valmistusta ja vähentää vaihtelua päivittäisissä laboratoriomenetelmissä.
Käyttö ja yhteensopivuus Saavuttaaksesi vakiotyöpitoisuudet laimenna liuos 1:100 täydelliseen kasvatusalustaan. Tuote on yhteensopiva monenlaisten nisäkässolulinjojen ja perusmedioiden kanssa. Jatkuvan varastosaatavuuden ansiosta tutkijat hyötyvät toimitusten luotettavasta jatkuvuudesta ja logistiikkasuunnittelun yksinkertaistamisesta. Liuos on säilytettävä ≤ -15 °C:ssa ja suojattava toistuvilta jäädytys-sulatussykleiltä stabiilisuuden säilyttämiseksi. Vain tutkimuskäyttöön. Ei käytettäväksi diagnostisissa tai terapeuttisissa toimenpiteissä. Ei käytettäväksi ihmisillä tai eläimillä.

Fosfaattipuskuroitu keittosuolaliuos (PBS-liuos)
Fosfaattipuskuroitu suolaliuos (PBS) on laajalti käytetty puskuriliuos biologisessa ja kemiallisessa tutkimuksessa. Sillä on ratkaiseva merkitys pH-tasapainon ja osmolaarisuuden ylläpitämisessä erilaisten kokeellisten toimenpiteiden aikana, mukaan lukien kudosten käsittely ja soluviljely. PBS-liuoksemme on valmistettu huolellisesti erittäin puhtaista ainesosista vakauden ja luotettavuuden varmistamiseksi jokaisessa kokeessa. PBS-liuoksemme osmolaarisuus ja ionipitoisuudet jäljittelevät läheisesti ihmiskehon osmolaarisuutta ja ionipitoisuuksia, joten se on isotoninen ja myrkytön useimmille soluille.

PBS-liuoksemme koostumus
PBS-liuoksemme on pH-säädetty sekoitus erittäin puhdasta laatua olevia fosfaattipuskureita ja suolaliuoksia. Se sisältää 1-kertaisena käyttökonsentraationa:

8000 mg/l natriumkloridia (NaCl)
200 mg/l kaliumkloridia (KCl)
1150 mg/L natriumfosfaattidibasinen vedetön (Na2HPO4)
200 mg/L Kaliumfosfaatti, monobasinen, vedetön (KH2PO4)

Tämä koostumus takaa optimaalisen pH
- ja ionitasapainon, joka soveltuu monenlaisiin biologisiin sovelluksiin.

PBS-liuoksemme käyttökohteet
PBS-liuoksemme soveltuu erinomaisesti erilaisiin biologisen tutkimuksen sovelluksiin. Sen isotonisten ja myrkyttömien ominaisuuksien ansiosta se soveltuu aineiden laimentamiseen ja solusäiliöiden huuhteluun. EDTA:ta sisältävät PBS-liuokset irrottavat tehokkaasti kiinnittyneet ja kyhmyiset solut. PBS:ään ei kuitenkaan pitäisi lisätä kaksiarvoisia metalleja, kuten sinkkiä, sillä ne voivat aiheuttaa saostumista. Tällaisissa tapauksissa suositellaan Goodin puskureita. Lisäksi PBS-liuoksemme on hyväksyttävä vaihtoehto virusten kuljetusalustalle RNA-virusten, kuten SARS-CoV-2:n, kuljetuksessa ja säilytyksessä.

Laadunvalvonta

Steriilisuodatettu


Varastointi ja säilyvyys

Säilytetään +2 °C:n ja +25 °C:n välillä valolta suojattuna.
Kun se on avattu, säilytä 2°C-25°C:ssa ja käytä 24 kuukauden kuluessa.


Kuljetusolosuhteet

Ympäristön lämpötila


Huolto

Säilytettävä jääkaapissa +2°C
- +8°C:ssa pimeässä. Vältä pakastamista ja usein tapahtuvaa lämmittämistä +37°C:een, koska se heikentää tuotteen laatua.
Älä lämmitä väliaineen lämpötilaa yli 37°C äläkä käytä kontrolloimattomia lämmönlähteitä, kuten mikroaaltolaitteita.
Jos väliaineesta käytetään vain osa, poista tarvittava määrä ja lämmitä se huoneenlämpöiseksi ennen käyttöä.

Koostumus



Luokka
Ainesosat
Pitoisuus (mg/l)


Suolat
Kaliumkloridi
200



Kaliumfosfaattimonobasinen vedetön kaliumfosfaatti
200



Natriumkloridi
8000



Vedetön dibasinen natriumfosfaatti
1150