Sf9-Zellen
















Allgemeine Informationen
Beschreibung | Sf9-Zellen sind klonale Isolate, die von der Spodoptera frugiperda Sf21-Zelllinie (IPLB-Sf-21-AE) abstammen. Sie werden häufig in Insektenzellkulturen für die rekombinante Proteinproduktion mit Baculovirus-Expressionssystemen verwendet. Sf9-Zellen haben eine epitheliale Morphologie und wurden aus dem Puppen-Ovarialgewebe des Heerwurms geklont. Eine der wichtigsten Eigenschaften von Sf9-Zellen ist ihre kleine, regelmäßige Größe, die sich ideal für die Bildung von Monolayern und Plaques eignet. Sie eignen sich auch für Transfektion, Plaque-Assay/Reinigung, Amplifikation von Hochtiter-Stämmen und Expression von rekombinanten Proteinen. Die Sf9-Insektenzelllinie kann in Anhänge- und Suspensionskulturen gehalten werden und benötigt für ihr Wachstum weder Serum noch CO2. Sie gelten als Biologische Schutzstufe 1 und werden in der Regel in einem Inkubator bei 26-28 Grad Celsius gezüchtet. Sf9-Zellen/Baculovirus-Expressionssysteme werden häufig für die Expression von Proteinen auf hohem Niveau verwendet, häufig zur Reinigung, aber Proteine können auch in der definierten Sf9-Zellumgebung funktionell exprimiert werden. Die Größe der infizierten Sf9-Zellen beträgt im Allgemeinen 17-30 Mikrometer im Durchmesser. Die Sf9-Zelllinie unterscheidet sich von der Sf21-Zelllinie dadurch, dass es sich um ein klonales Isolat mit einer kleineren und regelmäßigeren Größe handelt, während Sf21-Zellen eine ungleichmäßigere Größe haben und Monolayer und Plaques bilden, die unregelmäßiger sind. Einige Sf9-Zelllinien beherbergen möglicherweise ein Rhabdovirus mit negativem Sinn, das Spodoptera frugiperda rhabdovirus (SfRV), obwohl nicht alle getesteten Sf9-Zellen mit diesem Virus infiziert zu sein scheinen. Die Genomgröße von Sf9 wurde auf 451 Mbp mit einem G+C-Gehalt von 36,53 % geschätzt. |
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Organismus | Herbst-Heerwurm |
Gewebe | Eierstock |
Anwendungen | Transfektion, Plaque-Assay/Reinigung, Amplifikation von Hochtiterstämmen und Expression rekombinanter Proteine |
Synonyme | SF9, sf9, SF-9, Sf-9, sf-9, Sf 9, Spodoptera frugiperda Klon 9, Sf-Klon 9, IPLB-Sf-9AE, IPLB-SF-9AE, IPLB-SF-9, IPLB-Sf-9, IPLB-Sf9 |
Merkmale
Alter | Puppenstadium |
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Geschlecht | Weiblich |
Morphologie | Rund, befestigt, epitheloid |
Wachstumseigenschaften | Monolayer, anhaftend |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | Sf9 (Cytion-Katalognummer 604328) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Expression / Mutation
Virusanfälligkeit | Baculoviren, Autographa californica (MNPV), St. Louis-Enzephalitis (SLE) |
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Handhabung
Nährboden | Spodopan (PAN Biotech) |
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Mittlere Supplemente | Ergänzen Sie das Medium bei Bedarf mit 2% FBS, um die Proliferation zu fördern |
Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Es wird empfohlen, die Zellen mit einem Zellschaber abzulösen. Sammeln Sie das Medium mit den abgelösten Zellen nach dem Abschaben in einem 15-ml-Zentrifugenröhrchen. Geben Sie etwa 5 ml des Mediums in das Röhrchen und spülen Sie das Röhrchen mehrmals aus, um alle verbleibenden Zellen aufzufangen und sie mit den restlichen Zellen im Röhrchen zu kombinieren. 3 Minuten lang bei 300xg zentrifugieren, den Überstand abnehmen, die Zellen in frischem, kaltem Medium resuspendieren und in neue Fläschchen verteilen. |
Splitverhältnis | Für die ersten beiden Subkulturen wird ein Verhältnis von 1:3 bis 1:5 empfohlen. Bei weiteren Subkulturen können die Zellen in einem Verhältnis von 1:10 bis 1:20 geteilt werden |
Aussaatdichte | 1 x 10^4 Zellen/cm^2. Inkubation bei 26 bis 30 Grad Celsius in einem nicht befeuchteten, raumluftgeregelten Inkubator. Zellkulturflaschen mit Filterkappen verwenden oder die Kappen lösen, um einen Sauerstoffaustausch zu ermöglichen. |
Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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STR profile |
Amelogenin: x,x
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Benötigte Produkte
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) ist eine vielseitige Pufferlösung, die in vielen biologischen und chemischen Anwendungen sowie bei der Gewebeverarbeitung eingesetzt wird. Unsere PBS-Lösung ist mit hochwertigen Inhaltsstoffen formuliert, um einen konstanten pH-Wert während der Experimente zu gewährleisten. Die Osmolarität und die Ionenkonzentration unserer PBS-Lösung sind auf die des menschlichen Körpers abgestimmt, so dass sie isotonisch und für die meisten Zellen nicht toxisch ist.
Zusammensetzung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist eine pH-angepasste Mischung aus hochreinen Phosphatpuffern und Kochsalzlösungen. Bei einer 1fachen Arbeitskonzentration enthält sie 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 und 2 mM KH2PO4. Wir haben diese Zusammensetzung auf der Grundlage von CSHL-Protokollen und der Molekularen Klonierung nach Sambrook gewählt, die in der Forschungsgemeinschaft etablierte Standards sind.
Anwendungen unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist ideal für eine Vielzahl von Anwendungen in der biologischen Forschung. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich perfekt für die Verdünnung von Substanzen und das Spülen von Zellbehältern. Unsere PBS-Lösung mit EDTA kann auch zum Lösen von angehefteten und verklumpten Zellen verwendet werden. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass zweiwertige Metalle wie Zink nicht zu PBS hinzugefügt werden dürfen, da dies zu Ausfällungen führen kann. In solchen Fällen werden Good's Puffer empfohlen. Darüber hinaus hat sich unsere PBS-Lösung als akzeptable Alternative zu viralen Transportmedien für den Transport und die Lagerung von RNA-Viren, wie z. B. SARS-CoV-2, erwiesen.
Lagerung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung kann bei Raumtemperatur gelagert werden und ist somit leicht zu verwenden und zugänglich.
Zusammenfassend
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass unsere PBS-Lösung bei vielen biologischen und chemischen Experimenten ein wesentlicher Bestandteil ist. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich für zahlreiche Anwendungen, von der Zellkultur bis zum Virustransportmedium. Durch die Wahl unserer hochwertigen PBS-Lösung können Forscher ihre Experimente optimieren und genaue und zuverlässige Ergebnisse erzielen.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Kaliumchlorid
200,00
Kaliumdihydrogenphosphat
200,00
Natriumchlorid
8,000.00
di-Natriumhydrogenphosphat wasserfrei
1,150.00