ImWilms10T Zellen
Allgemeine Informationen
Beschreibung | Die imWilms10T-Zelllinie ist eine immortalisierte Variante der primären Wilms10T-Tumorzelllinie, die aus einer Wilms-Tumorprobe (Nephroblastom) eines pädiatrischen Patienten gewonnen wurde. Diese Zelllinie zeichnet sich durch eine homozygote Deletion des WT1-Gens aus, was zu einem vollständigen Verlust der WT1-Proteinfunktion führt. WT1 ist ein entscheidendes Gen für die Nierenentwicklung, und seine Deletion in imWilms10T spiegelt eine schwere genetische Störung wider, die mit der Pathogenese des Wilms-Tumors in Verbindung gebracht wird. Zusätzlich zur WT1-Deletion weisen imWilms10T-Zellen einen Verlust an Heterozygotie (LOH) in der chromosomalen Region 11p15 auf, die Schlüsselgene wie IGF2 enthält und zum aggressiven Verhalten des Tumors beiträgt. Um die begrenzte Lebensdauer der Wilms10T-Zellen zu überwinden, wurde die imWilms10T-Zelllinie durch die Einführung eines dreifach mutierten SV40 Large T Antigens (U19dl89-97tsA58) in die ursprünglichen Tumorzellen hergestellt. Dieser Immortalisierungsprozess ermöglicht es den imWilms10T-Zellen, sich unbegrenzt zu vermehren und dabei die Chromosomenstabilität zu erhalten, so dass sie ein zuverlässiges Modell für Langzeitstudien darstellen. Die imWilms10T-Zellen behalten die kritischen Merkmale der elterlichen Wilms10T-Linie bei, einschließlich des vollständigen Verlusts von WT1 und des Vorhandenseins von LOH bei 11p15, was sie zu einer unschätzbaren Ressource für die Untersuchung der molekularen Folgen der WT1-Deletion und der damit verbundenen tumorerzeugenden Prozesse macht. imWilms10T-Zellen wurden eingehend auf ihre Beteiligung an wichtigen Signalwegen untersucht, die die Tumorprogression vorantreiben. Proteomanalysen haben gezeigt, dass diese Zellen eine Phosphorylierung und Aktivierung mehrerer Rezeptortyrosinkinasen (RTKs), wie IGF1R, PDGFRβ und AXL, aufweisen. Diese aktivierten Rezeptoren signalisieren über nachgeschaltete Wege, einschließlich der MAPK- und PI3K/AKT-Wege, die für die Aufrechterhaltung des bösartigen Phänotyps der Zellen entscheidend sind. Die imWilms10T-Zelllinie dient als wichtiges Instrument zur Untersuchung der Auswirkungen eines vollständigen WT1-Verlusts auf die zelluläre Signalübertragung, das Tumorwachstum und potenzielle therapeutische Ziele bei Wilms-Tumoren, insbesondere bei aggressiveren Tumorsubtypen. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Niere |
Krankheit | Wilms-Tumor |
Synonyme | ImWilms10 T, IM-WT-10 |
Merkmale
Alter | 2 Jahre |
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Geschlecht | Weiblich |
Ethnizität | Kaukasisch |
Morphologie | Spindelförmig |
Zelltyp | Wilms-Zellen |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | ImWilms10T (Cytion Katalognummer 300419) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Hinterleger | B. Royer-Pokora |
Expression / Mutation
Mutationsprofil | WT1-Mutationsstatus: homozygot del WT1 innerhalb del11p13, LOH: keine in 11p13, aber UPD in 11p15, CTNNB1-Mutationsstatus: homozygot del TCT, p.DS45, UPD 3p |
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Handhabung
Nährboden | MSCGM-Kit (von Lonza) |
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Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Medienwechsel | 1 bis 2 Mal pro Woche |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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STR profile |
Amelogenin: x,x
CSF1PO: 11,12
D13S317: 12,12
D16S539: 9,1
D5S818: 10,12
D7S820: 11,12
TH01: 8,6
TPOX: 8,11
vWA: 15,18
D3S1358: 17,17
D21S11: 29,3
D18S51: 14,16
Penta E: 7,1
Penta D: 10,13
D8S1179: 10,15
FGA: 22,24
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HLA-Allele |
A*: 01:01:01, 11:01:01
B*: 18:01:01, 27:05:02
C*: 01:02:01, 12:03:01
DRB1*: 01:01:01, 11:04:01
DQA1*: 01:01:01, 05:05:01
DQB1*: 03:01:01, 05:01:01
DPB1*: 04:01:01G, 04:02:01G
E: 01:01:01
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Benötigte Produkte
Zu den wichtigsten Eigenschaften von Freeze Medium CM-1 gehören:
Breite Kompatibilität: Wirksam für eine breite Palette von Zelltypen, einschließlich Primärzellen, Stammzellen und etablierte Zelllinien.
Hohe Lebensfähigkeit: Optimiert, um die Wiederherstellung und Lebensfähigkeit von Zellen nach dem Auftauen zu maximieren und zuverlässige Versuchsergebnisse zu gewährleisten.
Fertig zum Gebrauch: Praktisch vorbereitet und sterilisiert für die sofortige Anwendung, wodurch die Vorbereitungszeit und das Kontaminationsrisiko reduziert werden.
Erhöhte Stabilität: Bewahrt eine gleichbleibende Leistung unter Standard-Kryokonservierungsbedingungen und gewährleistet reproduzierbare Ergebnisse.
Lange Haltbarkeitsdauer: CM-1 ist ein serumhaltiges, gebrauchsfertiges Kryokonservierungsmedium, das bis zu einem Jahr im Kühlschrank aufbewahrt werden kann.
Verwendung von CM-1 zum Einfrieren von Zellen
Gehen Sie wie folgt vor, um CM-1 für das Einfrieren von adhärenten und Suspensionszellen zu verwenden
Bei adhärenten Zellen waschen Sie diese und lösen sie vom Kultursubstrat. Bei Suspensionszellen fahren Sie direkt mit dem nächsten Schritt fort.
Zählen Sie die Zellen, um sicherzustellen, dass sie die richtige Konzentration haben.
Zentrifugieren Sie die Zellen, um sie zu pelletieren, und resuspendieren Sie sie dann in CM-1-Gefriermedium.
Überführen Sie die resuspendierten Zellen in Kryogefäße.
Verwenden Sie eine langsame Gefriermethode, bevor Sie die Zellen in die Langzeitlagerung überführen
🥶 Methode
🔍 Beschreibung
💡 Schritte
❄️
Manuelles Einfrieren
Ein schrittweises Verfahren, bei dem die Temperatur schrittweise gesenkt wird, um die Lebensfähigkeit der Zellen zu gewährleisten
1️⃣ Zellen in Gefriermedium für 40 Minuten bei 4°C einfrieren.
2️⃣ Für 24 Stunden in einen Gefrierschrank mit -80°C transferieren.
3️⃣ Zellen zur Langzeitkonservierung in flüssigem Stickstoff lagern
🧊
Verwendung von Mr. Frosty
Ein praktisches Gerät, das kontrollierte Einfrierraten ohne elektrische Energie ermöglicht
1️⃣ Bereiten Sie die Zellen in Kryoröhrchen mit Gefriermedium vor.
2️⃣ Kryovials in den Mr. Frosty-Behälter stellen.
3️⃣ Vor dem Umfüllen in flüssigen Stickstoff 24 Stunden lang bei -80 °C lagern
🧬
Controlled-Rate Freezer
Ein hochpräziser Gefrierschrank von Thermo Fisher oder anderen Herstellern, der für eine kontrollierte Temperaturabsenkung ausgelegt ist
1️⃣ Programmieren Sie das Gerät so, dass die Temperatur schrittweise gesenkt wird.
2️⃣ Legen Sie die vorbereiteten Zellen in den Gefrierschrank.
3️⃣ Nach dem Einfrierzyklus die Zellen in flüssigen Stickstoff überführen
Lagern Sie die Kryoflaschen bei Temperaturen unter -130°C oder in flüssigem Stickstoff zur langfristigen Aufbewahrung.
Inhaltsstoffe
Enthält FBS, DMSO, Glucose, Salze
Pufferkapazität: pH = 7,2 bis 7,6
Cytion's Freeze Medium CM-1 bietet eine zuverlässige Lösung für die Kryokonservierung, die eine hohe Lebensfähigkeit und Funktionalität der Zellen nach dem Auftauen für eine Vielzahl von Forschungsanwendungen gewährleistet.
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.