Humane mesenchymale Stammzellen - Nabelschnur - Arterie
Allgemeine Informationen
Beschreibung | Humane mesenchymale Stammzellen (hMSC) aus der Nabelschnurarterie sind eine besondere und vielversprechende Unterart von mesenchymalen Stammzellen, die gegenüber anderen MSC-Quellen mehrere einzigartige Vorteile bieten. Im Gegensatz zu MSC, die aus Knochenmark oder Fettgewebe stammen, werden MSC aus der Nabelschnurarterie aus einer primitiveren und weniger invasiven Quelle gewonnen, die eine jüngere und potenziell potentere Zellpopulation liefert. Diese Herkunft verleiht ihnen eine höhere Proliferationsfähigkeit und längere Telomere, was ihre Fähigkeit zur Selbsterneuerung verbessern und das Risiko der Seneszenz bei längerer Kultur verringern könnte. Darüber hinaus exprimieren MSZ aus der Nabelschnurarterie in der Regel eine Reihe einzigartiger Oberflächenmarker und haben ein geringeres immunogenes Profil, was sie für allogene Anwendungen besonders geeignet macht und das Risiko einer Immunabstoßung verringert. In vitro zeigen aus der Nabelschnurarterie gewonnene MSZ eine robuste Multipotenz und die Fähigkeit, sich in Adipozyten, Osteoblasten und Chondrozyten zu differenzieren, wenn sie spezifischen Differenzierungsmedien ausgesetzt werden. Diese Vielseitigkeit ist mit der von aus anderen Geweben stammenden MSZ vergleichbar, hat aber den zusätzlichen Vorteil, dass sie primitiv sind, was ihr therapeutisches Potenzial erhöhen kann. Jede Charge dieser MSZ wird einer strengen Qualitätskontrolle unterzogen, bei der unter anderem Lebensfähigkeit, Reinheit und Potenz geprüft werden, um sicherzustellen, dass die Zellen den hohen Standards für Forschungsanwendungen entsprechen. Die Zellen werden in frühen Passagen in einem speziellen Kryomedium kryokonserviert, wodurch ihre hohe Lebensfähigkeit (92 % bis 95 %) nach dem Auftauen erhalten bleibt, was für ihren effektiven Einsatz in nachgeschalteten Anwendungen entscheidend ist. Insgesamt bieten hMSCs aus der Nabelschnurarterie eine Kombination aus leichter Zugänglichkeit, hoher Proliferationskapazität und geringer Immunogenität, was sie zu einem wertvollen Instrument für eine Vielzahl von Forschungsstudien macht, insbesondere für solche, die sich auf regenerative Medizin und Immunmodulation konzentrieren. Diese mit vollem Einverständnis des Spenders gewonnenen Zellen stellen eine hochwertige und ethisch vertretbare Option für Forscher dar, die das gesamte Potenzial mesenchymaler Stammzellen in vitro erforschen wollen. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Nabelschnur - Arterie |
Anwendungen | Arzneimitteltests, regenerative Medizin, Krankheitsforschung |
Merkmale
Alter | Bitte anfragen |
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Geschlecht | Bitte anfragen |
Ethnizität | Kaukasisch |
Morphologie | Gut verteilte spindelförmige, fibroblastenähnliche Morphologie für mindestens 5 Passagen. Weniger als 2 % der Zellen weisen in jeder Passage eine spontane myofibroblastenähnliche Morphologie auf. |
Zelltyp | Stammzelle |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | Humane mesenchymale Stammzellen, Nabelschnur - Arterie (Cytion Katalognummer 300648) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Expression / Mutation
Antigenexpression | Ein umfassendes Panel von Markern, darunter CD73/CD90/CD105 (positiv) und CD14/CD34/CD45/HLA-DR (negativ), wird in der Durchflusszytometrie-Analyse verwendet, um kultivierte MSC (P2-P3) vor der Kryokonservierung zu identifizieren. Diese Marker werden vom MSC-Ausschuss der ISCT empfohlen. |
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Viren | Der Spender ist negativ für HBV (PCR), Treponema pallidum (PCR) und HIV-1/2 (IFA); die Zellen sind negativ für HBV, HCV, HSV1, HSV2, CMV, EBV, HHV6, Toxoplasma gondii, Treponema pallidum, Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum und Ureaplasma parvum. |
Handhabung
Nährboden | Alpha MEM, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, ohne: Ribonukleoside, w/o: Deoxyribonukleoside, w: 1,0 mM Natriumpyruvat, w: 2,2 g/L NaHCO3 |
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Mittlere Supplemente | Ergänzen Sie das Medium mit 10 % FBS, 2 ng/ml bFGF |
Passage-Lösung | Trypsin-EDTA |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Aussaatdichte | 1 bis 3 x 10^4 Zellen/cm^2 |
Medienwechsel | Erste Flüssigkeitserneuerung nach 24 Stunden, dann alle 2 bis 3 Tage. |
Einfriermedium | Als Kryokonservierungsmedium verwenden Sie 80 % FBS + 10 % Basalmedium + 10 % DMSO, um die Lebensfähigkeit zu erhalten, oder CM-1 (Cytion-Katalognummer 800100) für einen besseren Kryoschutz, der eine unerwünschte Differenzierung verhindert und gleichzeitig die Pluripotenz bewahrt. |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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Benötigte Produkte
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.