HeLa-Zellen
Geschichte der Zellen von Henrietta Lacks
Beschreibung | HeLa-Zellen, die aus den Gebärmutterhalskrebszellen von Henrietta Lacks stammen, sind eine unsterbliche Zelllinie, die in der biomedizinischen Forschung weit verbreitet ist. Die menschliche Zelllinie Hela hat zu bedeutenden Fortschritten in der Forschung beigetragen und spielt auch heute noch eine zentrale Rolle in den Labors weltweit. 1951 suchte Henrietta Lacks, eine junge Mutter von fünf Kindern, wegen vaginaler Blutungen einen Arzt im Johns Hopkins Hospital auf, wo Dr. Howard Jones einen bedeutenden bösartigen Tumor an ihrem Gebärmutterhals feststellte. Zu dieser Zeit war das Johns Hopkins Medicine Institute eine der wenigen Einrichtungen, die verarmten Afroamerikanern eine medizinische Versorgung anboten. Henrietta Lacks unterzog sich wegen ihres Gebärmutterhalskrebses einer Radiumbehandlung, der damals führenden Therapie. Während der Behandlung wurde eine Biopsie durchgeführt, und eine Probe ihrer Krebszellen wurde an das Labor von Dr. George Otto Gey gesandt. Dr. Gey hatte versucht, Zellen von Gebärmutterhalskrebs-Patientinnen unterschiedlicher Herkunft zu kultivieren, jedoch ohne Erfolg, bis er Henriettas Zellen entdeckte, die sich als erste Zellen kontinuierlich vermehrten, eine Entdeckung, die sie von allen bisherigen Proben unterschied. Später stellte sich heraus, dass das Zervixkarzinom von Henrietta Lacks durch das menschliche Papillomavirus (HPV) verursacht worden war. HPV ist ein weit verbreitetes Virus, das unter anderem zu Gebärmutterhalskrebs führen kann. Die Forschung an HeLa-Zellen hat wesentlich zum Verständnis der Rolle von HPV bei Gebärmutterhalskrebs beigetragen und zur Entwicklung von präventiven HPV-Impfstoffen geführt, die die Häufigkeit von HPV-bedingten Krebserkrankungen deutlich verringert haben. Diese außergewöhnlichen Zellen, die nach den Initialen von Henrietta Lacks als "HeLa"-Zellen bezeichnet werden, haben seitdem in der medizinischen Forschung eine wichtige Rolle gespielt. Sie ermöglichten es den Wissenschaftlern, das Wachstum von Krebszellen, die Auswirkungen verschiedener Substanzen und die Funktionsweise von Viren zu untersuchen und trugen so wesentlich zum medizinischen Fortschritt bei, einschließlich der Entwicklung von Impfstoffen gegen Polio und COVID-19, ohne die ethischen Bedenken direkter Menschenversuche. HeLa-Zellen werden aufgrund ihrer hohen Transfektionseffizienz und Anfälligkeit für Virusinfektionen häufig für Studien zur Genfunktion, zur Herstellung rekombinanter Proteine und zur Gentherapie verwendet. Sie sind von zentraler Bedeutung für die Erforschung des viralen Verhaltens, einschließlich der Replikation und Pathogenese, und haben eine Schlüsselrolle in der Hepatitis-B-Forschung gespielt, indem sie virale Proteine exprimierten und bei der Entwicklung von Diagnosetests und Impfstoffen halfen, wodurch globale Gesundheitsmaßnahmen erheblich vorangetrieben wurden. HeLa-Zellen sind nach wie vor eine unschätzbare Ressource für die laufende Forschung in Medizin und Wissenschaft. Die Bedeutung der HeLa-Zellen und anderer unsterblicher Zelllinien kann gar nicht hoch genug eingeschätzt werden, da sie die Medizin und die Erforschung von Infektionskrankheiten weiterhin prägen und ein bleibendes Vermächtnis von Henrietta Lacks und ihrem Beitrag zum wissenschaftlichen Fortschritt darstellen. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Gebärmutterhals |
Krankheit | Adenokarzinom |
Anwendungen | Transfektionswirt |
Synonyme | HELA, Hela, He La, He-La, Henrietta Lacks-Zellen, Helacyton gartleri |
Einzelheiten
Alter | 30 Jahre |
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Geschlecht | Weiblich |
Ethnizität | Afroamerikaner |
Morphologie | Epithelähnlich |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Dokumentation
Zitat | HeLa (Cytion Katalognummer 300194) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Genetisches Profil
Isoenzyme | G6PD, A |
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Virusanfälligkeit | Humanes Adenovirus 3, Enzephalomyokarditis-Virus, Humanes Poliovirus 1, Humanes Poliovirus 2, Humanes Poliovirus 3 |
Reverse Transkriptase | Negativ |
Produkte | Keratin, Lysophosphatidylcholin (Lyso-PC) induziert AP-1-Aktivität und c-jun N-terminale Kinase-Aktivität (JNK1) über einen von der Proteinkinase C unabhängigen Weg |
Karyotyp | Die HeLa-Zelllinie mit ihrem komplexen Karyotyp, der ein hohes Maß an Aneuploidie und strukturellen Umlagerungen aufweist, ist für ihr schnelles Wachstum und ihre Langlebigkeit in Kultur bekannt. HeLa-Zellen weisen in der Regel 82 Chromosomen auf, wobei die Spanne von 70 bis 164 variieren kann. Bemerkenswert ist, dass 98 % der HeLa-Zellen ein kleines telozentrisches Chromosom besitzen und 100 % der untersuchten Zellen eine Aneuploidie aufweisen. Diese Chromosomenanomalien sind der Grund für ihr schnelles Wachstum und ihre Immortalisierung sowie für ihre Verbindung mit Gebärmutterhalskrebs und anderen Krebszellen. |
Umgang mit der Hela-Zelllinie
Nährboden | EMEM, w: 2 mM L-Glutamin, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: EBSS, w: 1 mM Natriumpyruvat, w: NEAA (Cytion-Artikelnummer 820100c) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Accutase |
Verdopplungszeit | 28 bis 36 Stunden |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Splitverhältnis | Empfohlen wird ein Verhältnis von 1:2 bis 1:6 |
Aussaatdichte | 1 x 10^4 Zellen/cm^2 |
Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
Wiederherstellung durch Einfrieren | Nach dem Auftauen die Zellen bei 2 bis 3 x 10^4 Zellen/cm^2 plattieren und die Zellen mindestens 24 bis 48 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und anhaften lassen. |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätssicherung von Hela-Zellen
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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STR profile |
Amelogenin: x,x
CSF1PO: 9,1
D13S317: 12,13.3
D16S539: 9,1
D5S818: 11,12
D7S820: 8,12
TH01: 7
TPOX: 8,12
vWA: 16,18
D3S1358: 15,18
D21S11: 27,28
D18S51: 16
Penta E: 7,17
Penta D: 8,15
D8S1179: 12,13
FGA: 18,21
D6S1043: 18
D2S1338: 17
D12S391: 20,25
D19S433: 13,14
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HLA-Allele |
A*: 68:02:01
B*: 15:03:01
C*: 12:03:01
DRB1*: 01:02:01
DQA1*: 01:01:02
DQB1*: 05:01:01
DPB1*: 01:01:01
E: 01:03:02
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Benötigte Produkte
Zu den wichtigsten Eigenschaften von Freeze Medium CM-1 gehören:
Breite Kompatibilität: Wirksam für eine breite Palette von Zelltypen, einschließlich Primärzellen, Stammzellen und etablierte Zelllinien.
Hohe Lebensfähigkeit: Optimiert, um die Wiederherstellung und Lebensfähigkeit von Zellen nach dem Auftauen zu maximieren und zuverlässige Versuchsergebnisse zu gewährleisten.
Fertig zum Gebrauch: Praktisch vorbereitet und sterilisiert für die sofortige Anwendung, wodurch die Vorbereitungszeit und das Kontaminationsrisiko reduziert werden.
Erhöhte Stabilität: Bewahrt eine gleichbleibende Leistung unter Standard-Kryokonservierungsbedingungen und gewährleistet reproduzierbare Ergebnisse.
Lange Haltbarkeitsdauer: CM-1 ist ein serumhaltiges, gebrauchsfertiges Kryokonservierungsmedium, das bis zu einem Jahr im Kühlschrank aufbewahrt werden kann.
Verwendung von CM-1 zum Einfrieren von Zellen
Gehen Sie wie folgt vor, um CM-1 für das Einfrieren von adhärenten und Suspensionszellen zu verwenden
Bei adhärenten Zellen waschen Sie diese und lösen sie vom Kultursubstrat. Bei Suspensionszellen fahren Sie direkt mit dem nächsten Schritt fort.
Zählen Sie die Zellen, um sicherzustellen, dass sie die richtige Konzentration haben.
Zentrifugieren Sie die Zellen, um sie zu pelletieren, und resuspendieren Sie sie dann in CM-1-Gefriermedium.
Überführen Sie die resuspendierten Zellen in Kryogefäße.
Verwenden Sie eine langsame Gefriermethode, bevor Sie die Zellen in die Langzeitlagerung überführen
🥶 Methode
🔍 Beschreibung
💡 Schritte
❄️
Manuelles Einfrieren
Ein schrittweises Verfahren, bei dem die Temperatur schrittweise gesenkt wird, um die Lebensfähigkeit der Zellen zu gewährleisten
1️⃣ Zellen in Gefriermedium für 40 Minuten bei 4°C einfrieren.
2️⃣ Für 24 Stunden in einen Gefrierschrank mit -80°C transferieren.
3️⃣ Zellen zur Langzeitkonservierung in flüssigem Stickstoff lagern
🧊
Verwendung von Mr. Frosty
Ein praktisches Gerät, das kontrollierte Einfrierraten ohne elektrische Energie ermöglicht
1️⃣ Bereiten Sie die Zellen in Kryoröhrchen mit Gefriermedium vor.
2️⃣ Kryovials in den Mr. Frosty-Behälter stellen.
3️⃣ Vor dem Umfüllen in flüssigen Stickstoff 24 Stunden lang bei -80 °C lagern
🧬
Controlled-Rate Freezer
Ein hochpräziser Gefrierschrank von Thermo Fisher oder anderen Herstellern, der für eine kontrollierte Temperaturabsenkung ausgelegt ist
1️⃣ Programmieren Sie das Gerät so, dass die Temperatur schrittweise gesenkt wird.
2️⃣ Legen Sie die vorbereiteten Zellen in den Gefrierschrank.
3️⃣ Nach dem Einfrierzyklus die Zellen in flüssigen Stickstoff überführen
Lagern Sie die Kryoflaschen bei Temperaturen unter -130°C oder in flüssigem Stickstoff zur langfristigen Aufbewahrung.
Inhaltsstoffe
Enthält FBS, DMSO, Glucose, Salze
Pufferkapazität: pH = 7,2 bis 7,6
Cytion's Freeze Medium CM-1 bietet eine zuverlässige Lösung für die Kryokonservierung, die eine hohe Lebensfähigkeit und Funktionalität der Zellen nach dem Auftauen für eine Vielzahl von Forschungsanwendungen gewährleistet.
Dieses EMEM-Medium besteht aus 2 mM L-Glutamin, 1,5 g/L NaHCO3, EBSS, 1 mM Natriumpyruvat und NEAA.
Was ist in EMEM enthalten?
EMEM ist eine modifizierte Version von Eagle's Minimum Essential Medium und enthält Earle's Balanced Salt Solution, nicht essentielle Aminosäuren, L-Glutamin, Natriumpyruvat und Natriumbicarbonat. Es ist wichtig zu beachten, dass dieser reduzierte Gehalt an Natriumbicarbonat (NaHCO3, 1,5 g/L) für die Verwendung bei 5 % CO2 in der Luft vorgesehen ist. Um seine Wirksamkeit zu erhalten, wird empfohlen, das Medium bei 2 °C bis 8 °C im Dunkeln zu lagern, wenn es nicht verwendet wird.
Wozu wird EMEM verwendet?
Eagle's minimal essential medium (EMEM) ist ein Zellkulturmedium, das Zellen in Gewebekulturen erhalten kann. Das Medium enthält höhere Konzentrationen von Aminosäuren, was eine genauere Annäherung an die Proteinzusammensetzung kultivierter Säugetierzellen ermöglicht. EMEM kann zur Kultivierung verschiedener Zellen verwendet werden, darunter Fibroblasten, menschliche Leberkrebszellen (HepG2) und Astrozytenzellen aus fötalen Gehirnvorläuferzellen (PDA). Es wird in der Regel in Gegenwart von fötalem Rinderserum (FBS), Kalbs
- oder Pferdeserum verwendet.
Wie unterscheidet sich EMEM von anderen Zellkulturmedien?
EMEM und Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) haben zwar einige Gemeinsamkeiten, unterscheiden sich aber auch. Beide Medien sind proteinarm und enthalten die Aminosäuren, Salze, Glukose und Vitamine, die erforderlich sind, um eine Zelle mit Energie zu versorgen und sie in der Gewebekultur zu erhalten. Die DMEM-Formulierung ist jedoch so modifiziert, dass sie bis zu viermal mehr Vitamine und Aminosäuren und zwei
- bis viermal mehr Glukose enthält als EMEM. Es sei darauf hingewiesen, dass sich EMEM auch von der ursprünglichen MEM-Formulierung unterscheidet.
Qualitätskontrolle
pH = 7,2 +/
- 0,02 bei 20-25°C.
Jede Charge wurde auf Sterilität und Abwesenheit von Mykoplasmen und Bakterien getestet.
Wartung
Gekühlt bei +2°C bis +8°C im Dunkeln aufbewahren. Einfrieren und Erwärmen bis zu +37° C mindern die Qualität des Produkts.
Erwärmen Sie das Medium nicht auf mehr als 37° C und verwenden Sie keine unkontrollierbaren Wärmequellen (z.B. Mikrowellengeräte).
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, nehmen Sie diese Menge aus der Flasche und erwärmen Sie sie bei Raumtemperatur.
Die Haltbarkeit eines jeden Mediums mit Ausnahme des Basismediums beträgt 8 Wochen ab dem Herstellungsdatum.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Calciumchlorid x 2H2O
264,92
Magnesium-Sulfat
97,67
Kaliumchlorid
400,00
Natriumchlorid
6,800.00
Natriumdihydrogenphosphat x H2O
140,00
Sonstige Bestandteile
D(+)-Glucose
1,000.00
Phenolrot
10,00
Natriumpyruvat
110,00
NaHCO3
1,500.00
Aminosäuren
L-Alanin
8,90
L-Arginin x HCl
126,00
L-Asparagin x H2O
13,20
L-Asparaginsäure
13,30
L-Cystin
24,00
L-Glutamin
292,30
L-Glutaminsäure
14,70
Glycin
7,50
L-Histidin x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucin
52,00
L-Leucin
52,00
L-Lysin x HCl
72,50
L-Methionin
15,00
L-Phenylalanin
32,00
L-Prolin
11,50
L-Serin
10,50
L-Threonin
48,00
L-Tryptophan
10,00
L-Tyrosin
36,00
L-Valin
46,00
Vitamine
D-Calciumpantothenat
1,00
Cholinchlorid
1,00
Folsäure
1,00
myo-Inositol
2,00
Nicotinamid
1,00
Pyridoxal x HCl
1,00
Riboflavin
0,10
Thiamin x HCl
1,00
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) ist eine vielseitige Pufferlösung, die in vielen biologischen und chemischen Anwendungen sowie bei der Gewebeverarbeitung eingesetzt wird. Unsere PBS-Lösung ist mit hochwertigen Inhaltsstoffen formuliert, um einen konstanten pH-Wert während der Experimente zu gewährleisten. Die Osmolarität und die Ionenkonzentration unserer PBS-Lösung sind auf die des menschlichen Körpers abgestimmt, so dass sie isotonisch und für die meisten Zellen nicht toxisch ist.
Zusammensetzung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist eine pH-angepasste Mischung aus hochreinen Phosphatpuffern und Kochsalzlösungen. Bei einer 1fachen Arbeitskonzentration enthält sie 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 und 2 mM KH2PO4. Wir haben diese Zusammensetzung auf der Grundlage von CSHL-Protokollen und der Molekularen Klonierung nach Sambrook gewählt, die in der Forschungsgemeinschaft etablierte Standards sind.
Anwendungen unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist ideal für eine Vielzahl von Anwendungen in der biologischen Forschung. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich perfekt für die Verdünnung von Substanzen und das Spülen von Zellbehältern. Unsere PBS-Lösung mit EDTA kann auch zum Lösen von angehefteten und verklumpten Zellen verwendet werden. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass zweiwertige Metalle wie Zink nicht zu PBS hinzugefügt werden dürfen, da dies zu Ausfällungen führen kann. In solchen Fällen werden Good's Puffer empfohlen. Darüber hinaus hat sich unsere PBS-Lösung als akzeptable Alternative zu viralen Transportmedien für den Transport und die Lagerung von RNA-Viren, wie z. B. SARS-CoV-2, erwiesen.
Lagerung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung kann bei Raumtemperatur gelagert werden und ist somit leicht zu verwenden und zugänglich.
Zusammenfassend
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass unsere PBS-Lösung bei vielen biologischen und chemischen Experimenten ein wesentlicher Bestandteil ist. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich für zahlreiche Anwendungen, von der Zellkultur bis zum Virustransportmedium. Durch die Wahl unserer hochwertigen PBS-Lösung können Forscher ihre Experimente optimieren und genaue und zuverlässige Ergebnisse erzielen.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Kaliumchlorid
200,00
Kaliumdihydrogenphosphat
200,00
Natriumchlorid
8,000.00
di-Natriumhydrogenphosphat wasserfrei
1,150.00