HaCaT-ras A5-Zellen




























Allgemeine Informationen
Beschreibung | HaCaT-ras A5-Zellen sind eine spontan immortalisierte, nicht-tumorigene Zelllinie menschlicher Hautkeratinozyten, die für die Untersuchung der Interaktionen zwischen Tumormikroumgebung und dem Fortschreiten des Hautkarzinoms von Bedeutung sind. Diese von einem 62-jährigen kaukasischen Mann stammenden Zellen wurden einer klonalen Selektion und Mutagenese unterzogen, die in Verbindung mit einer autokrinen Wachstumsfaktorregulierung die Bildung langsam wachsender, hoch differenzierter gutartiger zystischer Tumore in Balb/c-nu/nu-Mäusen ermöglichen. Dies macht sie zu einem wertvollen Modell für die Erforschung der zellulären Dynamik und der molekularen Mechanismen der Tumorprogression in vivo. Die HaCaT-ras A5-Zellen sind besonders geeignet, um die komplexen Wechselwirkungen zwischen Tumorzellen und umgebenden Stromazellen, einschließlich Fibroblasten, Immunzellen und Endothelzellen, aufzuklären. Diese Interaktionen werden durch die Sekretion verschiedener Signalmoleküle wie Wachstumsfaktoren, Zytokine und Proteasen vermittelt, von denen Interleukin-6 (IL-6) eine zentrale Rolle spielt. Es ist bekannt, dass IL-6 bei vielen Krebsarten dysreguliert wird, vor allem durch Überexpression oder anhaltende Aktivierung des Transkriptionsfaktors STAT3. Forschungsarbeiten haben gezeigt, dass die Stimulierung von HaCaT-ras A5-Zellen durch IL-6 deren Proliferation über den JAK/STAT-Signalweg signifikant erhöht, während Fibroblasten aufgrund einer stärkeren Hemmung durch SOCS3, einem negativen Regulator dieses Signalwegs, unbeeinflusst bleiben. Diese unterschiedliche Reaktion wurde in einem mathematischen Modell erfasst, das die Dynamik von STAT3 und SOCS3 beschreibt und ein tieferes Verständnis der zellspezifischen Signalkaskaden ermöglicht. Darüber hinaus wirkt sich IL-6 nicht nur direkt auf die Proliferation von HaCaT-ras A5-Zellen aus, sondern beeinflusst auch indirekt die zelluläre Umgebung durch die Aktivierung eines Netzwerks von Wachstumsfaktoren wie HGF, KGF, VEGF und IL-8. Eine Genexpressionsanalyse mit über 16.000 Genen ergab, dass die IL-6-Stimulation 19 Gene hochreguliert, die mit dem Interferon-Signalweg sowohl in HaCaT-ras A5-Zellen als auch in Fibroblasten in Verbindung stehen, was mit der beobachteten Wachstumshemmung in Fibroblasten korreliert. Die Entdeckung der entscheidenden Rolle von SerpinB4 bei der Proliferation von HaCaT-ras A5-Zellen, die durch siRNA-Knockdown-Experimente bestätigt wurde, unterstreicht die komplizierte Regulierung durch IL-6 sowohl in Tumor- als auch in Stromazellen. Dieses umfassende Verständnis der Rolle von IL-6 erhöht das Potenzial für die Entwicklung gezielter therapeutischer Strategien, die darauf abzielen, die IL-6-Signalwege in der Mikroumgebung des Tumors zu modulieren. Insgesamt bieten HaCaT-ras A5-Zellen ein robustes Modell zur Erforschung des komplexen Zusammenspiels innerhalb der Tumormikroumgebung und ebnen den Weg für neue Ansätze in der Krebsforschung und Therapieentwicklung. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Haut |
Synonyme | HaCaT-ras-Klon A-5, HaCaT A-5, A-5, A5 |
Merkmale
Alter | 62 Jahre |
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Geschlecht | Männlich |
Ethnizität | Kaukasisch |
Zelltyp | Keratinozyten |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | HaCaT-ras A5 (Cytion Katalognummer 300494) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Hinterleger | DKFZ, Heidelberg |
Expression / Mutation
Proteinexpression | P53 (+), CEA (+), |
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Tumorigene | Bildung von gutartigen Tumoren bei Balb/c-nu/nu-Mäusen. |
Karyotyp | Aneuploid (hypotetraploid) |
Handhabung
Nährboden | DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Die 1:1-Mischung aus EDTA (Bestand: 0,05 %) und Trypsin (Bestand: 0,1 %) muss jedes Mal vor dem Ablösen der Zellen mit PBS ohne Ca2+ und Mg2+ hergestellt werden, um eine physiologische Osmolarität zu erreichen. Gebrauchsfertige Mischungen von Trypsin/EDTA werden nicht empfohlen, da dies zu Zellklumpen führen kann. Als Alternative kann TrypLETM Express (Life Technologies) anstelle von Trypsin/EDTA verwendet werden. Das Protokoll des Herstellers sollte befolgt werden. |
Subkultivierung |
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Splitverhältnis | Empfohlen wird ein Verhältnis von 1:5 bis 1:10 |
Aussaatdichte | 1 x 10^4 Zellen/cm^2 |
Medienwechsel | 2 Mal pro Woche |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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STR profile |
Amelogenin: x,x
CSF1PO: 9,11
D13S317: 10,12
D16S539: 9,12
D5S818: 12
D7S820: 9,11
TH01: 09. Mrz
TPOX: 11,12
vWA: 16,17
D3S1358: 16
D21S11: 28,30.2
D18S51: 12
Penta E: 7,12
Penta D: 11,13
D8S1179: 14
FGA: 24
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HLA-Allele |
A*: '31:01:02
B*: '40:01:02, '51:01:01
C*: '03:04:01, '15:02:01
DRB1*: '04:01:01, '15:01:01G
DQA1*: '01:02:01, '03:03:01
DQB1*: '03:01:01, '06:02:01
DPB1*: '03:01:01G, '04:01:01G
E: '01:03:01, '01:03:02
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Benötigte Produkte
Was DMEM von anderen Medien unterscheidet, ist seine einzigartige Zusammensetzung. Es enthält eine beeindruckende Vervierfachung der Aminosäure
- und Vitaminkonzentration im Vergleich zum ursprünglichen Eagle's Minimal Essential Medium. Ursprünglich mit niedrigem Glukosegehalt (1 g/L) und Natriumpyruvat entwickelt, wird DMEM häufig mit höherem Glukosegehalt verwendet, entweder mit oder ohne Natriumpyruvat. DMEM enthält keine Proteine, Lipide oder Wachstumsfaktoren, so dass eine Ergänzung erforderlich ist. Um ein optimales Wachstum zu erreichen, wird DMEM häufig mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS) ergänzt. Außerdem enthält DMEM ein Natriumbicarbonat-Puffersystem (3,7 g/L), das zur Aufrechterhaltung eines physiologischen pH-Werts eine 5-10%ige CO2-Umgebung erfordert.
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) ist ein hoch angesehenes Medium für die Zell
- und Gewebekultur, das den Wachstumsanforderungen verschiedener adhärenter Zellphänotypen gerecht wird. Es übertrifft das ursprüngliche Eagle's Medium, das in den 1950er Jahren für die Kultivierung von Hühnerzellen entwickelt wurde, durch eine verbesserte ergänzende Formulierung, die als Dulbecco's Modifikation bekannt ist. Diese Modifikation erhöht den Gehalt an ausgewählten Aminosäuren und Vitaminen im Vergleich zum Originalmedium um das bis zu Vierfache.
Im Bereich der Zellkultur spielt DMEM eine wichtige Rolle als Wachstumsmedium für verschiedene Zelltypen, darunter Primärzellen, Stammzellen und transformierte Zellen. Forscher setzen die modifizierte Version von DMEM auch für eine Vielzahl von Forschungsanwendungen ein, z. B. in der Arzneimittelforschung, im Tissue Engineering und bei der Untersuchung von Zellsignalwegen.
Qualitätskontrolle
pH = 7,2 +/
- 0,02 bei 20-25°C.
Jede Charge wurde auf Sterilität und Abwesenheit von Mykoplasmen und Bakterien getestet.
Wartung
Gekühlt bei +2°C bis +8°C im Dunkeln aufbewahren. Einfrieren und Erwärmen bis zu +37° C mindern die Qualität des Produkts.
Erwärmen Sie das Medium nicht auf mehr als 37° C und verwenden Sie keine unkontrollierbaren Wärmequellen (z.B. Mikrowellengeräte).
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, nehmen Sie diese Menge aus der Flasche und erwärmen Sie sie bei Raumtemperatur.
Die Haltbarkeit eines jeden Mediums mit Ausnahme des Basismediums beträgt 8 Wochen ab dem Herstellungsdatum.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Calciumchlorid, wasserfrei
200,00
Eisen(III)-nitrat x 9H2O
0,10
Magnesiumsulfat, wasserfrei
97,66
Kaliumchlorid
400,00
Natriumchlorid
6.400,00
Natriumdihydrogenphosphatwasserfrei
108,69
Sonstige Bestandteile
D(+)-Glucose wasserfrei
4.500,00
Natriumpyruvat
110,00
Rotes Phenol
15,00
NaHCO3
1.500,00
Aminosäuren
L-Arginin x HCl
84,00
L-Cystin x 2HCl
62,58
L-Glutamin
584,00
Glycin
30,00
L-Histidin x HCl xH2O
42,00
L-Isoleucin
104,80
L-Leucin
104,80
L-Lysin x HCl
146,20
L-Methionin
30,00
L-Phenylalanin
66,00
L-Serin
42,00
L-Threonin
95,20
L-Tryptophan
16,00
L-Tyrosin x Na
103,79
L-Valin
93,60
Vitamine
D-Calciumpantothenat
4,00
Cholinchlorid
4,00
Folsäure
4,00
myo-Inositol
7,00
Nicotinamid
4,00
Pyridoxin x HCl
4,00
Riboflavin
0,40
Thiamin x HCl
4,00
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) ist eine vielseitige Pufferlösung, die in vielen biologischen und chemischen Anwendungen sowie bei der Gewebeverarbeitung eingesetzt wird. Unsere PBS-Lösung ist mit hochwertigen Inhaltsstoffen formuliert, um einen konstanten pH-Wert während der Experimente zu gewährleisten. Die Osmolarität und die Ionenkonzentration unserer PBS-Lösung sind auf die des menschlichen Körpers abgestimmt, so dass sie isotonisch und für die meisten Zellen nicht toxisch ist.
Zusammensetzung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist eine pH-angepasste Mischung aus hochreinen Phosphatpuffern und Kochsalzlösungen. Bei einer 1fachen Arbeitskonzentration enthält sie 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 und 2 mM KH2PO4. Wir haben diese Zusammensetzung auf der Grundlage von CSHL-Protokollen und der Molekularen Klonierung nach Sambrook gewählt, die in der Forschungsgemeinschaft etablierte Standards sind.
Anwendungen unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist ideal für eine Vielzahl von Anwendungen in der biologischen Forschung. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich perfekt für die Verdünnung von Substanzen und das Spülen von Zellbehältern. Unsere PBS-Lösung mit EDTA kann auch zum Lösen von angehefteten und verklumpten Zellen verwendet werden. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass zweiwertige Metalle wie Zink nicht zu PBS hinzugefügt werden dürfen, da dies zu Ausfällungen führen kann. In solchen Fällen werden Good's Puffer empfohlen. Darüber hinaus hat sich unsere PBS-Lösung als akzeptable Alternative zu viralen Transportmedien für den Transport und die Lagerung von RNA-Viren, wie z. B. SARS-CoV-2, erwiesen.
Lagerung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung kann bei Raumtemperatur gelagert werden und ist somit leicht zu verwenden und zugänglich.
Zusammenfassend
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass unsere PBS-Lösung bei vielen biologischen und chemischen Experimenten ein wesentlicher Bestandteil ist. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich für zahlreiche Anwendungen, von der Zellkultur bis zum Virustransportmedium. Durch die Wahl unserer hochwertigen PBS-Lösung können Forscher ihre Experimente optimieren und genaue und zuverlässige Ergebnisse erzielen.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Kaliumchlorid
200,00
Kaliumdihydrogenphosphat
200,00
Natriumchlorid
8,000.00
di-Natriumhydrogenphosphat wasserfrei
1,150.00