SiHa-celler – nyt lys på forskningen i livmoderhalskræft
SiHa-celler er livmoderhalskræftceller, der er meget udbredt i biomedicinsk forskning. De er fremragende transfektionsværter og er derfor velegnede til undersøgelser af genekspression. På grund af deres menneskelige oprindelse og relevans for livmoderhalskræft anvendes disse celler hovedsageligt inden for kræftbiologi, virologi og lægemiddeludvikling.
- Vækstmedium
- Eagle's minimum essential medium (EMEM) indeholdende 10 % FBS, 2 mM L-glutamin, 2,2 g/L NaHCO3 og Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) anvendes til optimal vækst af SiHa-celler. Mediet udskiftes 2 til 3 gange om ugen.
- Fordoblingstid
- Fordoblingstiden for SiHa-celler er ca. 17 timer.
- Væksttype
- SiHa er en adhærent cellelinje.
- Biosikkerhedsniveau
- BSL-1
- Kan bestilles hos
- Cytion — Bestil SiHa
Generelle egenskaber og oprindelse af SiHa-celler
Det er afgørende at forstå en cellelinjes oprindelse og generelle egenskaber, da det har indflydelse på dens anvendelse i din forskning. I dette afsnit af artiklen vil du lære om SiHa-cellelinjens oprindelse, særlige egenskaber og meget mere: Hvad er SiHa-kræftcellelinjen? Hvad er SiHa-celler HPV? Hvad er SiHa-cellelinjens oprindelse? Hvad er SiHa's morfologi?
- SiHa, cellelinjen for livmoderhalskræft, stammer fra fragmenter af en primær livmoderbiopsi fra en asiatisk kvinde (55 år) med pladecellekræft [1].
- SiHa-cellelinjen udviser en hypertriploid karyotype. De fleste celler har et gennemsnitligt kromosomantal på mellem 69 og 72. Imidlertid har omkring 24 % af cellerne et modalt kromosomantal på 71.
- SiHa-celler er humane papillomavirus 16-positive. De udviser integration af omkring 1 til 2 kopier af HPV-genomet pr. celle [2].
- Disse livmoderhalskræftceller udviser en epitelial morfologi.
SiHa-cellelinje: Oplysninger om dyrkning
Det er ikke let at opretholde en cellelinjekultur, før man kender alle de vigtige punkter i forbindelse med dyrkningen. Man bør vide: Hvad er fordoblingstiden for SiHa? Hvad er SiHa-cellemediet? Hvordan dyrker man SiHa-cellelinjen?
Vigtige punkter ved dyrkning af SiHa-celler
Fordoblingstid:
Fordoblingstiden for SiHa-celler er ca. 17 timer.
Adhærent eller i suspension:
SiHa er en adhærent cellelinje.
Subkultiveringsforhold:
Subkultiveringsforholdet for SiHa-celler er 1:2 til 1:4. Ved passering skylles de adhærente celler med 1x PBS. Der tilsættes Accutase-opløsning, og cellerne inkuberes i 8 til 10 minutter ved stuetemperatur. Derefter tilsættes dyrkningsmedium, og cellerne centrifugeres. Cellepelleten resuspenderes, og cellerne hældes over i en ny kolbe til dyrkning.
Vækstmedium:
Eagle's minimum essential medium (EMEM) indeholdende 10 % FBS, 2 mM L-glutamin, 2,2 g/L NaHCO3 og Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) anvendes til optimal vækst af SiHa-celler. Mediet udskiftes 2 til 3 gange om ugen.
Vækstbetingelser:
SiHa-celler opbevares i en befugtet inkubator ved 37 °C med en CO₂-tilførsel på 5 %.
Opbevaring:
De frosne hætteglas med SiHa-cellekulturen fra livmoderhalskræft opbevares ved en temperatur under -150 °C i en elektrisk fryser eller i væskeformigt kvælstofs dampfase ved længerevarende opbevaring.
Fryseproces og medium:
CM-1- eller CM-ACF-frysemedium anvendes til nedfrysning af SiHa-celler. Cellerne nedfryses ved hjælp af en langsom nedfrysningsmetode, der kun tillader et fald på 1 °C pr. minut for at beskytte cellernes levedygtighed.
Optøningsproces:
De frosne celler opbevares i 40 til 60 sekunder i et vandbad ved 37 °C, indtil der kun er en lille isklump tilbage. Derefter tilsættes frisk vækstmedium, og cellerne centrifugeres for at fjerne komponenterne fra frysemediet. Cellepelleten resuspenderes, og cellerne overføres til en dyrkningskolbe med henblik på vækst.
Biosikkerhedsniveau:
Der kræves et laboratorium på biosikkerhedsniveau 1 til håndtering og vedligeholdelse af SiHa-cellekulturer.
Fordele og ulemper ved SiHa-cellelinjen
Ligesom andre humane karcinomcellelinjer har SiHa også nogle særlige egenskaber, der er forbundet med visse fordele og ulemper. Her har vi diskuteret nogle af de væsentligste.
Fordele ved SiHa-celle-linjen til livmoderhalskræft
- Model for livmoderhalskræft
- Afledt af pladecellekarcinom i livmoderhalsen.
- Anvendes til at undersøge mekanismerne, væksten og udviklingen af livmoderhalskræft.
- Udtrykker generne p53+ og pRB+, som er relateret til DNA-reparation, regulering af cellecyklussen og tumorsuppression.
- Tumorigen potentiale
- SiHa-celler er tumorigeniske og kan fremkalde dårligt differentierede epidermoide tumorer af grad III hos nude-mus.
- Anvendes til in vivo kræftforskning og afprøvning af kræftbehandlinger.
Ulemper ved SiHa-celler
- Proliferationshastighed
- SiHa-celler prolifererer hurtigt, hvilket fører til overvækst.
- Kræver hyppig passering, hvilket øger risikoen for genetisk ustabilitet, som kan påvirke cellernes adfærd over tid.
Forskningsmæssige anvendelser af SiHa-celler
SiHa-cellelinjen anvendes i vid udstrækning i forskning i livmoderhalskræft. Her beskrives nogle specifikke anvendelser af denne cellelinje.
- Undersøgelser relateret til humant papillomavirus (HPV): SiHa-celler er HPV 16-positive og er derfor værdifulde enheder til at studere humant papillomavirusinfektion, dens molekylære mekanismer og dens rolle i udviklingen og progressionen af livmoderhalskræft. Forskere anvender også disse celler til at undersøge viral replikation, integration og dens indvirkning på værtscellens processer. I en undersøgelse fra 2020 blev SiHa-cellelinjen anvendt til at undersøge HPV E6/E7-onkoproteinernes rolle i udviklingen af livmoderhalskræft ved at målrette CRISPR-teknologi mod disse proteiner. Resultaterne viste, at nedregulering af E6/E7-generne medførte hæmning af SiHa-cellernes vækst og apoptose. Disse virale gener kan derfor fungere som afgørende lægemiddelmål for udvikling af behandlinger mod HPV-relateret livmoderhalskræft [3].
- Kræftbiologi: SiHa-celler fungerer som en uvurderlig model til at studere livmoderhalskræftbiologi, herunder kræftudvikling, progression, metastase og invasion. Forskere anvender disse celler til at undersøge de genetiske mutationer og de underliggende molekylære signalveje, der bidrager til udviklingen og væksten af livmoderhalskræft. I en undersøgelse, hvor SiHa-celler blev anvendt, fandt man eksempelvis, at opreguleret SEC61G (SEC61-translokon-underenhed gamma) fremmer livmoderhalskræftcellers proliferation gennem aktivering af MAPK-kaskaden [4].
- Lægemiddelscreening og -testning: SiHa er en udbredt livmoderhalskræftcellelinje til vurdering af effektiviteten af potentielle kræftlægemidler, der er specifikke for HPV-relateret livmoderhalskræft. Forskere undersøger lægemidlers antiproliferative, apoptotiske og antimetastatiske potentiale ved hjælp af disse celler. Et eksempel herpå er en undersøgelse fra 2019, der undersøgte det cytotoksiske potentiale af frugtekstrakter fra Vatica diospyroides Symington Type SS på SiHa-livmoderhalskræftcellelinjen [5].
SiHa-celler til din forskning!
Forskningspublikationer om SiHa-celler
Nogle vigtige og ofte citerede forskningspublikationer omhandler SiHa-cellelinjen for pladecellecarcinom i livmoderhalsen.
Denne publikation i OncoTargets and Therapy (2019) foreslog, at det naturlige stof aloe-emodin udøver apoptotiske virkninger i SiHa-celler fra livmoderhalskræft, der er forbundet med HPV E6/E7 og glukosemetabolismen.
Denne artikel blev offentliggjort i Future Journal of Pharmaceutical Sciences i 2022. Undersøgelsen undersøgte de antitumoraktiviteter, som bladekstrakt fra Excoecaria agallocha (L.) udviser i SiHa-celle-linjen for livmoderhalskræft.
Denne undersøgelse, der blev offentliggjort i Journal of Sol-Gel Science and Technology (2022), foreslog, at 1,10-phenanthrolin-molekylet, når det kobles til zinksulfat-nanopartikler, udøver betydelige antiproliferative effekter i SiHa-celler.
Denne forskning blev offentliggjort i Oncology Reports i 2019. Undersøgelsen afslørede, at Astragalosid IV, et naturprodukt, hæmmer migrationen og invasionen af SiHa-celler ved at modulere de TGF-β1-medierede PI3K- og MAPK-signalveje.
Denne undersøgelse i tidsskriftet *Biomedicine & Pharmacotherapy* (2020) afslørede, at IFI16 (interferon-gamma-inducerbart protein 16) regulerer PD-L1-genet via aktivering af STING-TBK1-NF-kB-signalvejen for at fremme væksten af SiHa-livmoderhalskræftceller.
Ressourcer til SiHa-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
Her er nogle online ressourcer om SiHa-cellerne.
- Transfektion af SiHa-celler: Denne forskningsartikel indeholder en protokol til vedligeholdelse af SiHa-celler fra livmoderhalskræft samt til transfektion af SiHa-celler.
Følgende link indeholder oplysninger om cellekultur for SiHa-celler.
- SiHa-cellelinje: Denne hjemmeside indeholder mange værdifulde data om SiHa-cellelinjen. Dette omfatter oplysninger om vækstmedier, dyrkningsbetingelser, protokoller til subkultivering af SiHa-celler samt håndtering af deres proliferative og kryopræserverede kulturer.
Ofte stillede spørgsmål om SiHa-celler fra livmoderhalskræft
Referencer
- Melzer, C., J. von der Ohe og R. Hass, Kortfattet oversigt: Interaktion mellem mesenkymale stroma-/stamcellelignende celler og kræftceller rummer terapeutisk potentiale. Stem cells, 2018. 36(7): s. 951-968.
- Ostrowska, K.M. et al., Undersøgelse af indflydelsen af højrisiko-humant papillomavirus på den biokemiske sammensætning af livmoderhalskræftceller ved hjælp af vibrationsspektroskopi. Analyst, 2010. 135(12): s. 3087-3093.
- Chen, Y., et al., In vitro- og in vivo-væksthæmning af humane livmoderhalskræftceller via spaltning af humane papillomavirus E6/E7-mRNA’er ved hjælp af CRISPR/Cas13a-systemet. Antiviral Research, 2020. 178: s. 104794.
- Fan, Y., et al., SEC61G fremmer spredningen af livmoderhalskræft ved at aktivere MAPK-signalvejen. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A., et al., Kræftbekæmpende potentiale af frugtekstrakter fra Vatica diospyroides symington type SS og deres effekt på programmeret celledød i livmoderhalskræftcellelinjer. The Scientific World Journal, 2019. 2019.