Buňky U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1
800,00 €*
Produkty jsou dodávány zmrazené v suchém ledu v kryotrubkách. Každá kryotrubka obvykle obsahuje 3 × 10 6 buněk pro adhezivní linie nebo 5 × 106 buněk pro suspenzní linie (podrobnosti najdete v certifikátu analýzy šarže).
Obecné informace
| Popis | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 je genomově upravená lidská osteosarkomová buněčná linie odvozená z buněk U2OS, ve které byl endogenní gen SEH1L (SEH1) modifikován pomocí technologie CRISPR/Cas9 tak, aby kódoval in-frame SNAPf tag. SEH1 je součástí Y-komplexu (známého také jako komplex NUP107-160), základního strukturálního modulu jaderného pórového komplexu (NPC), který přispívá k sestavení a stabilitě pórové kostry. Vložením kódující sekvence SNAPf do endogenního lokusu se značený protein SEH1 exprimuje pod nativní regulační kontrolou, čímž se zachovávají fyziologické úrovně exprese a minimalizují se poruchy složení jaderných pórů. Značka SNAPf je uměle vytvořená, rychle reagující varianta značky SNAP, která se kovalentně váže na substráty konjugované s benzylguaninem, což umožňuje selektivní a stabilní fluorescenční značení v živých nebo fixovaných buňkách. V buňkách U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 se fúzní protein lokalizuje do jaderné membrány v bodovém vzoru charakteristickém pro distribuci NPC. Protože značení probíhá na úrovni endogenních proteinů, je tento systém vhodný pro kvantitativní fluorescenční mikroskopii, superrozlišovací zobrazování a analýzy sledování jednotlivých částic zaměřené na rozbor organizace a stechiometrie NPC. Plochá morfologie a velká jádra buněk U2OS dále usnadňují vysokorozlišovací vizualizaci struktur jaderné obálky. SEH1 se podílí na biogenezi NPC a je také zapojen do procesů spojených s kinetochory během mitózy. Tato buněčná linie proto poskytuje robustní platformu pro zkoumání sestavování a rozebírání NPC závislého na buněčném cyklu, prostorové organizace Y-komplexu v rámci pórovitého lešení a potenciální dvojí role SEH1 v jaderné obálce a mitotických kinetochorech. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 umožňuje mechanistické studie architektury a dynamiky jaderných pórů za fyziologicky relevantních expresních podmínek. |
|---|---|
| Organismus | Člověk |
| Tkáň | Kost |
| Nemoc | Osteosarkom |
Charakteristika
| Věk | 15 let |
|---|---|
| Pohlaví | Ženy |
| Etnická příslušnost | Kavkazský |
| Morfologie | Epitelu podobné |
| Růstové vlastnosti | Adherentní |
Regulační údaje
| Citace | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (katalogové číslo Cytion 300664) |
|---|---|
| Úroveň biologické bezpečnosti | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| Vkladatel | Ellenbergova laboratoř (EMBL) |
| Status GMO | GMO-S1: Tato lidská buněčná linie osteosarkomu (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) obsahuje fúzi SNAPf-SEH1 zprostředkovanou CRISPR, která umožňuje selektivní značení nukleoporinu SEH1. Modifikace je stabilně přítomná. Tato klasifikace platí pouze v Německu a může se lišit v jiných zemích. |
Biomolekulární data
| Exprese bílkovin | SEH1, SNAPf-tag |
|---|
Zpracování
| Kultivační médium | McCoys 5a, w: 3,0 g/l glukóza, w: stabilní glutamin, w: 2,0 mM pyruvát sodný, w: 2,2 g/l NaHCO3 (číslo článku Cytion 820200a) |
|---|---|
| Doplňky | Doplňte médium o 10% FBS, 3,0 g/l glukózy, stabilní glutamin, 2,0 mM pyruvát sodný, 2,2 g/l NaHCO3, 1% NEAA |
| Disociační činidlo | Accutase |
| Subkultivace | Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium. |
| Zmrazovací médium | Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo. |
| Rozmrazování a kultivace buněk |
|
| Inkubační atmosféra | 37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra. |
| Povlak baňky | Pro optimální uchycení a životaschopnost po rozmrazení doporučujeme používat baňky nebo destičky potažené kolagenem. |
| Postup zmrazování | Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu. |
| Přepravní podmínky | Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu. |
| Podmínky skladování | Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku. |
Kontrola kvality / Genetický profil / HLA
| Sterilita | Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy. Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám. |
|---|