Клетки U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

800,00 €*

Продуктите се доставят замразени в сух лед в криоепруви. Всяка криоепрува обикновено съдържа 3 × 10 ⁶ клетки за адхезивни линии или 5 × 10⁶ клетки за суспензионни линии (за подробности вижте сертификата за анализ на партидата).

Цени без данъци и разходи за доставка

cryovial

Номер на продукта: 300664

Информационен лист за безопасност

Продуктов лист

Споразумение с трета страна

Описание	U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 е геномно редактирана човешка остеосаркомна клетъчна линия, получена от U2OS клетки, в които ендогенният ген SEH1L (SEH1) е модифициран с помощта на CRISPR/Cas9 технология, за да кодира SNAPf таг в рамката. SEH1 е компонент на Y-комплекса (известен също като NUP107-160 комплекс), основен структурен модул на ядрения порен комплекс (NPC), който допринася за сглобяването и стабилността на порестата скафолд. Чрез вмъкване на SNAPf кодиращата последователност в ендогенния локус, маркираният SEH1 протеин се експресира под естествен регулаторен контрол, запазвайки физиологичните нива на експресия и минимизирайки смущенията в състава на ядрените пори. SNAPf тагът е инженерно създаден, бързо реагиращ вариант на SNAP-тага, който ковалентно се свързва с бензилгуанин-конюгирани субстрати, позволявайки селективно и стабилно флуоресцентно маркиране в живи или фиксирани клетки. В U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 клетките, фузионният протеин се локализира в ядрената мембрана в характерна за NPC разпределение точкова форма. Тъй като маркирането се извършва на нива на ендогенни протеини, тази система е подходяща за количествена флуоресцентна микроскопия, изображения със суперразделителна способност и анализи за проследяване на единични частици, насочени към разлагане на организацията и стехиометрията на NPC. Плоската морфология и големите ядра на U2OS клетките допълнително улесняват визуализацията с висока разделителна способност на структурите на ядрената мембрана. SEH1 участва в биогенезата на NPC и също така е свързан с процесите, свързани с кинетохорите по време на митозата. Съответно, тази клетъчна линия предоставя стабилна платформа за изследване на зависимата от клетъчния цикъл сглобка и разглобка на NPC, пространствената организация на Y-комплекса в порестата структура и потенциалните двойни роли на SEH1 в ядрената мембрана и митотичните кинетохори. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 позволява механистични изследвания на архитектурата и динамиката на ядрените пори при физиологично релевантни условия на експресия.
Организъм	Човек
Тъкан	Bone
Заболяване	Остеосарком

Възраст	15 години
Пол	Жена
Етническа принадлежност	Кавказки
Морфология	Подобни на епител
Свойства на растежа	Придържащи се

Цитиране	U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (каталожен номер 300664 на Cytion)
Ниво на биобезопасност	1
NCBI_TaxID	9606
Вложител	Лабораторията на Елънбърг (EMBL)
Статус на ГМО	GMO-S1: Тази човешка клетъчна линия на остеосарком (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) съдържа CRISPR-медииран синтез SNAPf-SEH1, който позволява селективно маркиране на нуклеопорина SEH1. Модификацията е стабилна. Тази класификация се прилага само в Германия и може да се различава в други страни.

Изразяване на протеини	SEH1, SNAPf-таг

Среда за култивиране	McCoys 5a, w: 3,0 g/L глюкоза, w: стабилен глутамин, w: 2,0 mM натриев пируват, w: 2,2 g/L NaHCO3 (номер на статията в Cytion 820200a)
Добавки	Допълнете средата с 10% FBS, 3,0 g/L глюкоза, стабилен глутамин, 2,0 mM натриев пируват, 2,2 g/L NaHCO3, 1% NEAA
Реагент за дисоциация	Accutase
Субкултивиране	Отстранете старата среда от адхезивните клетки и ги промийте с PBS, която не съдържа калций и магнезий. За колби Т25 използвайте 3-5 ml PBS, а за колби Т75 - 5-10 ml. След това покрийте клетките изцяло с Accutase, като използвате 1-2 ml за колби Т25 и 2,5 ml за колби Т75. Оставете клетките да се инкубират на стайна температура за 8-10 минути, за да се отделят. След инкубацията внимателно разбъркайте клетките с 10 ml среда, за да ги ресуспендирате, след което центрофугирайте при 300xg за 3 минути. Изхвърлете супернатантата, ресуспендирайте клетките в прясна среда и ги прехвърлете в нови колби, които вече съдържат прясна среда.
Средство за замразяване	Като среда за криоконсервация използваме пълна среда за растеж (включително FBS) + 10% DMSO за адекватна жизнеспособност след размразяване или CM-1 (каталожен номер 800100 на Cytion), която включва оптимизирани осмопротектори и метаболитни стабилизатори за подобряване на възстановяването и намаляване на криоиндуцирания стрес.
Размразяване и култивиране на клетките	Уверете се, че флаконът остава дълбоко замразен при доставката, тъй като клетките се транспортират със сух лед, за да се поддържат оптимални температури по време на транспортирането. При получаване или съхранявайте незабавно криовиолата при температури под -150 °C, за да осигурите запазване на клетъчната цялост, или преминете към стъпка 3, ако е необходимо незабавно култивиране. За незабавно култивиране бързо размразете флакона, като го потопите във водна баня с чиста вода и антимикробен агент с температура 37 °C, като разбърквате внимателно в продължение на 40-60 секунди, докато остане малка ледена бучка. Извършвайте всички следващи стъпки при стерилни условия в аспиратор, като преди отваряне дезинфекцирате криовиолата със 70% етанол. Внимателно отворете дезинфекцирания флакон и прехвърлете клетъчната суспензия в 15 ml центрофужна епруветка, съдържаща 8 ml хранителна среда със стайна температура, като разбъркате внимателно. Центрофугирайте сместа при 300 x g в продължение на 3 минути, за да отделите клетките, и внимателно изхвърлете супернатантата, съдържаща остатъчна замразяваща среда. Внимателно ресуспендирайте клетъчната пелета в 10 ml прясна хранителна среда. За адхезивни клетки разделете суспензията между две колби Т25; за суспензионни култури прехвърлете цялата среда в една колба Т25, за да стимулирате ефективното взаимодействие и растеж на клетките. Придържайте се към установените протоколи за субкултивиране за непрекъснат растеж и поддържане на клетъчната линия, като гарантирате надеждни експериментални резултати.
Инкубационна атмосфера	37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.
Покритие на колбата	За оптимално прикрепване и жизнеспособност след размразяване препоръчваме да се използват колби или плаки с колагеново покритие.
Процедура за замразяване	Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед във валидирана, изолирана опаковка с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.
Условия за доставка	Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед във валидирана, изолирана опаковка с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.
Условия за съхранение	За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Стерилност	Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма. За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

Моля, обърнете внимание, че тази клетъчна линия не е достъпна в рамките на стандартната MTA на Cytion, тъй като изисква споразумение с трета страна и/или е предмет на преговори с първоначалния лицензодател.

Клетки U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

Обща информация

Характеристики

Регулаторни данни

Биомолекулярни данни

Работа с

Контрол на качеството / Генетичен профил / HLA

Споразумение с трета страна