U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 细胞

Name: CLS Cell Lines Service GmbH
Address: Dr.-Eckener-Straße 8, Eppelheim, 69214, DE
Telephone: +496221405780
Price range: €€€

€800.00*

产品采用干冰冷冻运输，装于冷冻管中。每支冷冻管通常含有3×10^⁶ 个贴壁细胞系细胞或5×10^⁶ 个悬浮细胞系细胞（具体详见批次合格证）。

价格不含税，另加运费

cryovial

产品编号 300664

安全数据表

产品介绍

第三方协议

说明	U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1是一种基因组编辑的人类骨肉瘤细胞系，源自U2OS细胞。该细胞系通过CRISPR/Cas9技术对内源性SEH1L（SEH1）基因进行修饰，使其编码一个同框SNAPf标签。 SEH1是Y复合体（又称NUP107-160复合体）的组成部分，该复合体作为核孔复合体（NPC）的核心结构单元，参与孔架组装与稳定性维持。通过在内源性基因座插入SNAPf编码序列，标记的SEH1蛋白在天然调控机制下表达，既保持生理表达水平又最大限度减少对核孔组成的干扰。 SNAPf标签是经工程改造的SNAP标签快速反应变体，可共价结合苄基鸟嘌呤偶联底物，实现活细胞或固定细胞中选择性稳定的荧光标记。在U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1细胞中，融合蛋白以NPC分布特有的点状模式定位于核膜。由于标记发生在内源性蛋白水平，该系统特别适用于定量荧光显微镜、超分辨成像及单粒子追踪分析，可深入解析核孔复合体的组织结构与化学计量比。U2OS细胞扁平形态与大核特性进一步促进了核膜结构的高分辨率可视化。 SEH1参与核孔复合体生物合成，并被证实与有丝分裂期间着丝粒相关过程有关。因此，该细胞系为研究细胞周期依赖性核孔复合体组装与解聚、孔架结构内Y复合体的空间组织、以及SEH1在核膜与有丝分裂着丝粒上的潜在双重作用提供了可靠平台。 U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1细胞系可在生理相关表达条件下，实现核孔结构与动态机制的研究。
有机体	人类
组织	骨质
疾病	骨肉瘤

年龄	15 年
性别	女性
种族	高加索人
形态学	上皮样
生长特性	附着物

引用	U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1（Cytion 目录号 300664）
生物安全等级	1
NCBI_TaxID	9606
存款人	艾伦伯格实验室（EMBL）
转基因生物现状	GMO-S1：这种人类骨肉瘤细胞系（U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1）含有 CRISPR 介导的 SNAPf-SEH1 融合，可对 SEH1 核蛋白进行选择性标记。这种修饰是稳定存在的。本分类仅适用于德国国内，其他地区可能有所不同。

蛋白质表达	SEH1、SNAPf 标记

培养基	McCoys 5a，w：3.0 克/升葡萄糖，w：稳定谷氨酰胺，w：2.0 毫摩尔丙酮酸钠，w：2.2 克/升 NaHCO3（Cytion 文章编号 820200a）。
补充剂	在培养基中添加 10% FBS、3.0 g/L 葡萄糖、稳定的谷氨酰胺、2.0 mM 丙酮酸钠、2.2 g/L NaHCO3、1% NEAA
解离试剂	Accutase
亚培养	去除粘附细胞上的旧培养基，用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS，T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞，T25 烧瓶用 1-2 毫升，T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟，使其分离。孵育后，用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬，然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。
冷冻介质	我们使用完全生长培养基（包括 FBS）+10% DMSO 或 CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）作为冷冻保存培养基，以获得足够的解冻后存活率，CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂，可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。
解冻和培养细胞	确认小瓶在运送时仍处于深度冷冻状态，因为细胞是用干冰运送的，以便在运输过程中保持最佳温度。收到细胞后，立即将冻存瓶保存在低于 -150°C 的温度下，以确保细胞的完整性；如果需要立即培养，则进行步骤 3。如需立即进行培养，可将冻存瓶浸入 37°C 的水浴中，加入清水和抗菌剂，轻轻搅拌 40-60 秒，直至残留一小块冰，迅速解冻冻存瓶。在流动罩内无菌条件下进行所有后续步骤，打开前用 70% 乙醇消毒冷冻瓶。小心打开消毒瓶，将细胞悬浮液转移到装有 8 毫升室温培养基的 15 毫升离心管中，轻轻搅拌。将混合物以 300 x g 离心 3 分钟，分离细胞，小心弃去含有残留冷冻培养基的上清液。用 10 毫升新鲜培养基轻轻重悬细胞团。对于粘附细胞，将悬浮液分装在两个 T25 培养瓶中；对于悬浮培养，将所有培养基转移到一个 T25 培养瓶中，以促进细胞的有效相互作用和生长。坚持既定的亚培养方案，以继续生长和维持细胞系，确保可靠的实验结果。
培养氛围	37°C, 5%_CO2, 加湿环境。
烧瓶涂层	为了在解冻后获得最佳附着力和存活率，我们建议使用涂有胶原蛋白的烧瓶或平板。
冷冻程序	冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装，以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。
运输条件	冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装，以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。
储存条件	如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。

无菌	使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。

请注意，标准 Cytion MTA 无法提供该细胞系，因为需要第三方协议和/或与原始许可人协商。

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 细胞

一般信息

特点

监管数据

生物分子数据

处理

质量控制/基因图谱/HLA

第三方协议