U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 细胞

Name: CLS Cell Lines Service GmbH
Address: Dr.-Eckener-Straße 8, Eppelheim, 69214, DE
Telephone: +496221405780
Price range: €€€

€800.00*

产品采用干冰冷冻运输，装于冷冻管中。每支冷冻管通常含有3×10^⁶ 个贴壁细胞系细胞或5×10^⁶ 个悬浮细胞系细胞（具体详见批次合格证）。

价格不含税，另加运费

cryovial

产品编号 300663

安全数据表

产品介绍

第三方协议

说明	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2是一种基因组编辑的人类骨肉瘤细胞系，源自U2OS细胞。其中内源性RANBP2（又称NUP358）基因座经CRISPR/Cas9技术修饰，在天然蛋白质编码框内插入SNAPf标签。 Nup358/RanBP2作为大型核孔蛋白，定位于核孔复合体（NPC）的胞质丝状结构，在核质运输、SUMO化修饰及有丝分裂过程中发挥关键作用。内源性标签确保SNAPf-Nup358在生理性启动子调控下表达，既维持天然表达水平，又最大限度减少过表达系统相关的人为干扰。 SNAPf标签是SNAP标签的快速标记变体，可共价结合苄基鸟嘌呤偶联底物，实现活细胞或固定细胞中Nup358的选择性稳定荧光标记。在U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2细胞中，融合蛋白以细胞质核孔复合体纤维特有的点状分布模式定位于核膜。该构型支持高分辨率荧光成像、超分辨显微镜、脉冲追踪标记及单分子追踪技术，用于研究核孔复合体的结构与动态变化。 U2OS细胞扁平形态与大核特性进一步促进了核膜结构的定量成像。该模型可用于探究Nup358在CRM1/出口蛋白依赖性核输出、Ran GTP酶周期调控及胞质运输平台空间组织中的特异性作用。鉴于Nup358参与有丝分裂纺锤体组装与着丝粒功能，该细胞系同样适用于研究细胞周期依赖性核孔蛋白重分布及有丝分裂期间核孔复合体的解聚/重聚过程。 U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2细胞系为解析人类细胞核孔复合体胞质面的结构与功能特性提供了具有生理相关性的研究平台。
有机体	人类
组织	骨质
疾病	骨肉瘤

年龄	15 年
性别	女性
种族	高加索人
形态学	上皮样
生长特性	附着物

引用	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2（Cytion 目录号 300663）
生物安全等级	1
NCBI_TaxID	9606
存款人	艾伦伯格实验室（EMBL）
转基因生物现状	GMO-S1：这种人类骨肉瘤细胞系（U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2）含有 CRISPR 工程化的 SNAPf-Nup358/RanBP2 融合体，可对核孔细胞质纤维进行精确标记。该修饰可稳定整合。此分类仅适用于德国国内，其他地区可能有所不同。

蛋白质表达	Nup358/RanBP2, SNAPf-tag

培养基	McCoys 5a，w：3.0 克/升葡萄糖，w：稳定谷氨酰胺，w：2.0 毫摩尔丙酮酸钠，w：2.2 克/升 NaHCO3（Cytion 文章编号 820200a）。
补充剂	在培养基中添加 10% FBS、3.0 g/L 葡萄糖、稳定的谷氨酰胺、2.0 mM 丙酮酸钠、2.2 g/L NaHCO3、1% NEAA
解离试剂	Accutase
亚培养	去除粘附细胞上的旧培养基，用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS，T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞，T25 烧瓶用 1-2 毫升，T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟，使其分离。孵育后，用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬，然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。
冷冻介质	我们使用完全生长培养基（包括 FBS）+10% DMSO 或 CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）作为冷冻保存培养基，以获得足够的解冻后存活率，CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂，可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。
解冻和培养细胞	确认小瓶在运送时仍处于深度冷冻状态，因为细胞是用干冰运送的，以便在运输过程中保持最佳温度。收到细胞后，立即将冻存瓶保存在低于 -150°C 的温度下，以确保细胞的完整性；如果需要立即培养，则进行步骤 3。如需立即进行培养，可将冻存瓶浸入 37°C 的水浴中，加入清水和抗菌剂，轻轻搅拌 40-60 秒，直至残留一小块冰，迅速解冻冻存瓶。在流动罩内无菌条件下进行所有后续步骤，打开前用 70% 乙醇消毒冷冻瓶。小心打开消毒瓶，将细胞悬浮液转移到装有 8 毫升室温培养基的 15 毫升离心管中，轻轻搅拌。将混合物以 300 x g 离心 3 分钟，分离细胞，小心弃去含有残留冷冻培养基的上清液。用 10 毫升新鲜培养基轻轻重悬细胞团。对于粘附细胞，将悬浮液分装在两个 T25 培养瓶中；对于悬浮培养，将所有培养基转移到一个 T25 培养瓶中，以促进细胞的有效相互作用和生长。坚持既定的亚培养方案，以继续生长和维持细胞系，确保可靠的实验结果。
培养氛围	37°C, 5%_CO2, 加湿环境。
烧瓶涂层	为了在解冻后获得最佳附着力和存活率，我们建议使用涂有胶原蛋白的烧瓶或平板。
冷冻程序	冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装，以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。
运输条件	冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装，以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。
储存条件	如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。

无菌	使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。

请注意，标准 Cytion MTA 无法提供该细胞系，因为需要第三方协议和/或与原始许可人协商。

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 细胞

一般信息

特点

监管数据

生物分子数据

处理

质量控制/基因图谱/HLA

第三方协议