Células Hep2 e seu papel na pesquisa do câncer de laringe
As células Hep 2 são um modelo in vitro fundamental, amplamente utilizado em diversos domínios da pesquisa biomédica, como reumatologia, pesquisa sobre câncer e imunologia. Originárias do carcinoma laríngeo, essas células humanas têm sido essenciais para elucidar o tecido de origem e as características específicas das neoplasias laríngeas. Sua importância é amplamente reconhecida na pesquisa translacional do câncer, onde contribuíram significativamente para nossa compreensão da natureza e origem dos cânceres de laringe, marcando uma presença substancial nas publicações sobre pesquisa do câncer de laringe [1].
- Meio de crescimento
- O EMEM, ou meio essencial mínimo de Eagle, é utilizado para a cultura das células Hep 2. Este meio é suplementado com 10% de FBS, 1,0 g/L de glicose, 2,2 g/L de NaHCO₃, 2,0 mM de L-glutamina, 1% de NEAA e 1 mM de piruvato de sódio para o crescimento celular ideal. O meio deve ser renovado de 2 a 3 vezes por semana.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação relatado para as células Hep 2 é de aproximadamente 40 horas.
- Tipo de crescimento
- As células Hep 2 são aderentes e crescem em monocamadas.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível na
- Cytion — Encomende Hep2
Origem e características gerais das células Hep 2
A origem e as características gerais de uma linhagem celular definem sua aplicabilidade na pesquisa. Esta seção ajudará você a conhecer a origem e algumas características marcantes das células Hep 2. Por exemplo, você descobrirá: O que é a linhagem celular Hep 2? Qual é a origem das células Hep 2? E qual é a morfologia das células Hep 2?
- A Hep 2, uma linhagem celular epitelial humana imortal, foi descrita pela primeira vez por H.W. Toolan como células de carcinoma laríngeo em 1954. No entanto, recentemente, foi relatado que a linhagem celular Hep 2 é composta por células de adenocarcinoma cervical e se originou de uma contaminação da linhagem celular Hela [2].
- As células Hep 2 contêm cromossomos marcadores da Hela e apresentam-se positivas para queratina e sequências de DNA do papilomavírus humano, conforme confirmado por coloração com imunoperoxidase e PCR, respectivamente.
- A Hep 2, derivada da linhagem celular Hela, possui uma morfologia de tipo epitelial.
- A linhagem celular Hep 2 apresenta aberrações cromossômicas tanto estruturais quanto numéricas, com um cariótipo quase triploide [3].
Linha celular HEp-2: Informações sobre o cultivo
Antes de trabalhar com uma linha celular, é preciso conhecer os seguintes pontos-chave para sua cultura. Essas informações podem ser úteis para cultivar e manter a linha celular de maneira eficaz. Você deve saber: Qual é o tempo de duplicação das células HEp-2? As células Hep 2 são aderentes? Qual é a densidade de semeadura das células Hep 2?
Tempo de duplicação populacional:
O tempo de duplicação relatado para as células Hep 2 é de aproximadamente 40 horas.
Adesivas ou em suspensão:
As células Hep 2 são aderentes e crescem formando monocamadas.
Densidade de semeadura:
Uma densidade de semeadura de 1 x 10⁴ células/cm² é ideal para a cultura de células Hep 2. Para a semeadura, as células Hep 2 aderentes são lavadas com solução PBS 1x, seguida de incubação com solução de dissociação Accutase. Após 8 a 10 minutos de incubação à temperatura ambiente, as células são ressuspensas no meio e centrifugadas. As células coletadas são então dispensadas em meio fresco e transferidas para novos frascos para cultura.
Meio de crescimento:
O EMEM (meio essencial mínimo de Eagle) é utilizado para a cultura de células Hep 2. Este meio é suplementado com 10% de FBS, 1,0 g/L de glicose, 2,2 g/L de NaHCO₃, 2,0 mM de L-glutamina, 1% de NEAA e 1 mM de piruvato de sódio para o crescimento celular ideal. O meio deve ser renovado de 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento:
Assim como outras linhagens de células de mamíferos, as células Hep 2 também são cultivadas em uma incubadora umidificada, ajustada a uma temperatura de 37 °C e com suprimento contínuo de 5% de CO₂.
Armazenamento:
As células Hep 2 podem ser armazenadas em freezers elétricos de temperatura ultrabaixa (abaixo de -150 °C) ou na fase de vapor de nitrogênio líquido para armazenamento de longo prazo.
Processo de congelamento e meio:
Os meios de congelamento recomendados para as células Hep 2 são o CM-1 ou o CM-ACF. As células devem ser congeladas por meio de um processo de congelamento lento, que permita uma queda gradual de 1 °C na temperatura e proteja a viabilidade celular.
Processo de descongelamento:
O frasco com as células congeladas é rapidamente descongelado por agitação em banho-maria a 37 °C até restar apenas um pequeno pedaço de gelo. As células são então adicionadas a meio fresco e centrifugadas para remover os componentes do meio de congelamento. Posteriormente, o sedimento celular é ressuspenso no meio, e as células são distribuídas em frascos de cultura. As células precisam repousar por quase 24 horas para aderirem.
Nível de biossegurança
Recomenda-se o uso de laboratório de nível 1 de biossegurança para o manuseio e manutenção de culturas de células Hep 2.
Vantagens e limitações das células Hep 2
Quase todas as linhagens celulares apresentam uma combinação única de vantagens e limitações que contribuem para seu uso no campo da pesquisa. Esta seção descreverá alguns dos principais prós e contras associados à linhagem celular Hep 2.
Vantagens
As principais vantagens da linhagem celular Hep 2 são:
- Origem humana: A Hep 2 é derivada de células epiteliais humanas, o que a torna um valioso modelo in vitro para o estudo de doenças humanas e infecções virais.
- Detecção de ANA: A linha celular Hep 2 possui um conjunto de proteínas nativas que apresenta numerosos antígenos, tornando-a um excelente substrato para a detecção de anticorpos antinucleares (ANA). Essa característica permite a triagem específica e altamente sensível de ANA no soro, tornando-a uma ferramenta diagnóstica crucial para a identificação de doenças do tecido conjuntivo.
Limitações
- Anomalias cromossômicas: As células Hep 2 apresentam múltiplas anomalias cromossômicas numéricas e estruturais. Essas anomalias podem afetar o comportamento celular e restringir sua aplicabilidade em certos experimentos laboratoriais.
- Tumorigenicidade: A Hep 2, uma linhagem celular epitelial humana derivada de tumor, pode apresentar anomalias genéticas normalmente ausentes em células epiteliais. Consequentemente, o uso das células Hep 2 pode ser limitado em estudos específicos focados na fisiologia celular normal.
Expansão das aplicações da linhagem celular Hep 2 na pesquisa biomédica
A linha celular Hep 2 se destaca como um modelo exemplar para uma infinidade de aplicações na pesquisa biomédica. Reconhecidas por sua versatilidade, essas células desempenham papéis fundamentais em experimentos in vitro, que vão desde a análise de receptores até o estudo de doenças complexas.
Explorando mecanismos tumorigênicos e alvos terapêuticos com células Hep 2
As células Hep 2, por serem tumorigênicas, são fundamentais para aprofundar as complexidades da biologia do câncer. Elas fornecem insights sobre as vias de sinalização do câncer e estudos mecanísticos, além de serem um pilar na triagem e avaliação de medicamentos anticâncer. Por exemplo, um estudo perspicaz utilizou as células Hep 2 para delinear a influência do miRNA-33a na proliferação de células cancerosas. Os resultados esclareceram os efeitos antiproliferativos do miRNA-33a por meio de sua interação com o PIM1, um oncogene conhecido, sugerindo um novo alvo terapêutico [4]. Em outro caso, as células Hep 2 foram empregadas na avaliação do potencial terapêutico de nanopartículas de óxido de zinco de Marsdenia tenacissima, destacando sua eficácia antiproliferativa e apoptótica [5].
Avanços na pesquisa virológica com insights das células Hep 2
A suscetibilidade das células Hep 2 a vários vírus humanos as torna um recurso inestimável na pesquisa virológica. Elas têm sido utilizadas com eficácia na expressão de genes virais do SARS-CoV-2 para desvendar a complexa interação entre o vírus e os mecanismos celulares do hospedeiro [6]. Essa aplicação é particularmente crucial na era atual, em que compreender e combater infecções virais como a COVID-19 é uma prioridade global.
Decifrando as funções celulares: manipulação gênica nas células Hep 2
A adaptabilidade da linhagem celular Hep 2 à manipulação genética ressalta sua utilidade em estudos mecanísticos. Os pesquisadores aproveitam essa característica para modular a expressão gênica e elucidar os papéis de genes específicos nas funções celulares. Um estudo notável envolveu a superexpressão da proteína de ligação ao RNA RBM6 em células Hep 2, o que facilitou a investigação de seu potencial supressor de tumores, fornecendo insights valiosos sobre os fundamentos moleculares do câncer [7].
Aprimorando o diagnóstico de doenças por meio de aplicações da linhagem celular Hep 2
Além desses domínios de pesquisa, as células Hep 2 são reconhecidas por suas capacidades diagnósticas, especialmente na detecção de ANAs, que são fundamentais no diagnóstico de doenças autoimunes, como o lúpus eritematoso sistêmico. A precisão com que as células Hep 2 podem detectar os ANAs auxilia no diagnóstico e no desenvolvimento de tratamentos direcionados, aprofundando nossa compreensão das patologias autoimunes e aprimorando o atendimento ao paciente.
Por meio dessas diversas aplicações, as células Hep 2 contribuíram significativamente para os avanços na pesquisa translacional do câncer, no estudo de infecções virais e na exploração de mecanismos celulares. Sua contribuição para a geração de dados clinicamente relevantes é inestimável, confirmando seu papel indispensável tanto no laboratório quanto na clínica. À medida que a pesquisa continua a evoluir, a linhagem celular Hep 2 certamente permanecerá na vanguarda, auxiliando na descoberta de novos tratamentos e ampliando nosso conhecimento sobre a saúde e as doenças humanas.
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Células Hep 2: Publicações científicas
A seguir, apresentamos algumas publicações de pesquisa interessantes e mais citadas sobre as células Hep 2.
- A síntese de nanopartículas de óxido de zinco a partir de Marsdenia tenacissima inibe a proliferação celular e induz a apoptose em células de câncer de laringe (Hep-2)
Este artigo, publicado no Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology (2019), explorou o potencial anticâncer de nanopartículas de óxido de zinco biossintetizadas a partir de Marsdenia tenacissima na linhagem celular Hep 2. - Nanopartículas de PLGA bioformuladas e carregadas com hesperidina neutralizam a via apoptótica intrínseca mediada pelas mitocôndrias em células
cancerosas Este artigo foi publicado no Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials em 2021. Este estudo examinou as propriedades anticâncer de nanopartículas de ácido polilático-co-glicólico (PLGA) bioformuladas e carregadas com hesperidina em células Hep 2. - Atividade antiviral do extrato etanólico de Lophatherum gracile contra a infecção
pelo vírus sincicial respiratório Esta publicação no Journal of Ethnopharmacology, em 2019, utilizou células Hep 2 para estudar a infecção pelo vírus sincicial respiratório e selecionar medicamentos antivirais contra ele. O estudo relatou o promissor potencial antiviral do extrato etanólico de uma planta medicinal, a Lophatherum gracile, contra a infecção pelo vírus sincicial respiratório. - Avaliação de extratos aquosos de quatro plantas aromáticas quanto à sua atividade contra a adesão de Candida albicans às células
epiteliais HEp-2 humanas Esta pesquisa foi publicada na revista Gene Reports (2020). Este estudo explorou o potencial inibitório de extratos aquosos de quatro plantas aromáticas contra a adesão de Candida albicans às células epiteliais Hep 2 humanas. - A proteína de sinalização 1 induzível por Wnt1 regula a glicólise e a quimiorresistência do carcinoma de células escamosas da laringe por meio da via
YAP1/TEAD1/GLUT1 Este estudo foi publicado na revista Journal of Cellular Physiology em 2019. O estudo relata que a proteína de sinalização 1 induzível por Wnt1 (WISP1) interage com a via YAP1/TEAD1/GLUT1 e regula o metabolismo da glicose e a quimiorresistência na linhagem celular Hep 2.
Recursos para a linha celular Hep 2: protocolos, vídeos e muito mais
A Hep 2 é uma linhagem celular bem conhecida. Existem vários recursos disponíveis sobre a linhagem celular Hep 2.
- Subcultura da linha celular Hep 2: este vídeo é um guia passo a passo para a subcultura de células Hep 2.
- Triagem de anticorpos antinucleares (ANA) em células Hep 2: este vídeo explica a triagem de anticorpos antinucleares (ANA) utilizando a linha celular Hep 2.
- Cultura de Hep 2: este link contém informações básicas sobre cultura celular das células Hep 2. Inclui divisão celular, congelamento e descongelamento de células.
Referências
- Fusi, M. e S. Dotti, Adaptação da linhagem celular HEp-2 a sistemas de cultura totalmente livres de derivados animais e análise em tempo real do crescimento celular. Biotechniques, 2021. 70(6): p. 319-326.
- Gorphe, P., Uma revisão abrangente da linha celular Hep-2 na pesquisa translacional para o câncer de laringe. Am J Cancer Res, 2019. 9(4): p. 644-649.
- Wang, M., et al., Os fibroblastos associados ao câncer em um tumor laríngeo xenotransplantado estabelecido a partir da linha celular humana HEp-2 não são derivados de células cancerosas por meio da transição epitelial-mesenquimal; eles são fenotipicamente ativados, mas cariotipicamente normais. PLoS One, 2015. 10(2): p. e0117405.
- Karatas, O.F., Potencial antiproliferativo do miR-33a em células Hep-2 de câncer de laringe por meio da ação sobre o PIM1. Head Neck, 2018. 40(11): p. 2455-2461.
- Wang, Y., et al., A síntese de nanopartículas de óxido de zinco a partir de Marsdenia tenacissima inibe a proliferação celular e induz a apoptose em células de câncer de laringe (Hep-2). Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology, 2019. 201: p. 111624.
- Zhang, J., et al., Um estudo sistêmico e molecular da localização subcelular das proteínas do SARS-CoV-2. Signal Transduct Target Ther, 2020. 5(1): p. 269.
- Wang, Q., et al., A proteína de ligação ao RNA RBM6, como gene supressor de tumor, reprime o crescimento e a progressão do laringocarcinoma. Gene, 2019. 697: p. 26-34.