Células de Wilms3

US$ 800,00*

Os produtos são enviados congelados em gelo seco, em criotubos. Cada criotubo contém, normalmente, 3 × 10^⁶ células para linhagens aderentes ou 5 × 10^⁶ células para linhagens em suspensão (consulte o Certificado de Análise [CoA] do lote para obter mais detalhes).

Preços sem impostos, mais custos de envio

cryovial

Número do produto: 300414

Ficha de dados de segurança

Ficha técnica do produto

Certificado de Análise (CoA)

Descrição	A linhagem celular Wilms3 foi estabelecida a partir de um tumor de Wilms primário em um paciente pediátrico, caracterizado por uma mutação somática no gene WT1. Ao contrário de muitas outras linhagens celulares de tumor de Wilms, a Wilms3 apresenta uma mutação heterozigótica de deslocamento de quadro no gene WT1 (c.1293-1294insA, p.V432SfsX87), levando à produção de uma proteína WT1 truncada. Essa perda parcial da função do WT1 está associada ao desenvolvimento de tumores que apresentam um fenótipo estromal ou mesenquimal. No entanto, a mutação no WT1 da Wilms3 não é homozigótica, o que aumenta a complexidade de seu estudo, pois ela mantém parte da função do WT1 que pode influenciar a biologia do tumor de maneira diferente em comparação com linhas celulares com perda completa do WT1. O Wilms3 também apresenta uma mutação no gene CTNNB1, afetando especificamente a treonina 41 (p.T41A), que desempenha um papel crítico na via de sinalização Wnt. Essa mutação estabiliza a β-catenina, impedindo sua degradação e levando à ativação constitutiva da via Wnt. A ativação persistente da sinalização Wnt impulsiona a proliferação celular e contribui para a tumorigênese no Wilms3, tornando-o um modelo-chave para o estudo do impacto das mutações no CTNNB1 no contexto de um contexto de WT1 parcialmente funcional. Fenotipicamente, as células do Wilms3 apresentam uma morfologia de tipo mesenquimal, expressando vimentina e sem citoqueratina, o que é consistente com as características estromais observadas no tumor original. Essas células apresentam potencial de diferenciação limitado, com a capacidade de sofrer alguma diferenciação mesenquimal sob condições específicas. Análises proteômicas do Wilms3 revelaram a ativação de vários receptores de tirosina quinase (RTKs), incluindo PDGFRβ e AXL, que favorecem a sobrevivência e a proliferação celular. Além disso, vias de sinalização a jusante, como MAPK e PI3K/AKT, são ativadas, reforçando as propriedades malignas das células do Wilms3. Um aspecto único do Wilms3 é sua funcionalidade parcial do WT1, o que oferece uma perspectiva distinta sobre como as mutações no WT1 contribuem para a biologia do tumor de Wilms quando a mutação não é completa. A interação entre o WT1 e a sinalização Wnt no Wilms3 oferece uma oportunidade valiosa para estudar os papéis sutis que essas vias desempenham no desenvolvimento do tumor. De modo geral, o Wilms3 serve como um importante modelo para investigar os mecanismos moleculares subjacentes ao tumor de Wilms na presença de perda parcial do WT1 e ativação constitutiva da via Wnt.
Organismo	Humano
Tecido	Rim
Doença	Tumor de Wilms
Aplicações	Modelo de cultura celular in vitro. Estudos bioquímicos

Idade	11 a 12 meses
Gênero	Masculino
Etnia	caucasiano
Morfologia	Em forma de fuso
Tipo de célula	Células de Wilms
Propriedades de crescimento	Aderente

Referência	Wilms3 (número de catálogo da Cytion 300414)
Nível de biossegurança	1
NCBI_TaxID	9606
Número de acesso do Cellosaurus	CVCL_A5SF

Perfil mutacional	Status da mutação no gene WT1: homozigoto para c.1293-1294insA, p.V432fsx87; LOH: 11p11-11pter; status da mutação no gene CTNNB1: tipo selvagem

Meio de cultura	Kit MSCGM (da Lonza)
Reagente de dissociação	Accutase
Subcultura	Remova o meio antigo das células aderentes e lave-as com PBS sem cálcio nem magnésio. Para frascos T25, use 3 a 5 ml de PBS; para frascos T75, use 5 a 10 ml. Em seguida, cubra as células completamente com Accutase, utilizando 1 a 2 ml para frascos T25 e 2,5 ml para frascos T75. Deixe as células incubarem à temperatura ambiente por 8 a 10 minutos para que se desprendam. Após a incubação, misture delicadamente as células com 10 ml de meio para ressuspender, depois centrifugue a 300xg por 3 minutos. Descarte o sobrenadante, ressuspenda as células em meio fresco e transfira-as para novos frascos que já contenham meio fresco.
Meio de congelamento	Como meio de criopreservação, utilizamos meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% de DMSO para garantir viabilidade adequada após o descongelamento, ou CM-1 (número de catálogo da Cytion 800100), que inclui osmoprotetores e estabilizadores metabólicos otimizados para melhorar a recuperação e reduzir o estresse induzido pela criopreservação.
Descongelamento e cultura de células	Verifique se o frasco permanece profundamente congelado no momento da entrega, pois as células são enviadas em gelo seco para manter as temperaturas ideais durante o transporte. Após o recebimento, armazene o criovial imediatamente a temperaturas abaixo de -150 °C para garantir a preservação da integridade celular ou prossiga para a etapa 3, caso seja necessária a cultura imediata. Para cultura imediata, descongele rapidamente o frasco imergindo-o em um banho-maria a 37 °C com água limpa e um agente antimicrobiano, agitando suavemente por 40 a 60 segundos até que reste apenas um pequeno pedaço de gelo. Realize todas as etapas subsequentes em condições estéreis em uma cabine de fluxo, desinfetando o criovial com etanol a 70% antes de abri-lo. Abra cuidadosamente o frasco desinfetado e transfira a suspensão celular para um tubo de centrífuga de 15 ml contendo 8 ml de meio de cultura à temperatura ambiente, misturando delicadamente. Centrifugue a mistura a 300 x g por 3 minutos para separar as células e descarte cuidadosamente o sobrenadante contendo o meio de congelamento residual. Ressuspender suavemente o sedimento celular em 10 ml de meio de cultura fresco. Para células aderentes, dividir a suspensão entre dois frascos de cultura T25; para culturas em suspensão, transferir todo o meio para um frasco T25 a fim de promover a interação e o crescimento celular eficazes. Siga os protocolos de subcultura estabelecidos para o crescimento contínuo e a manutenção da linhagem celular, garantindo resultados experimentais confiáveis.
Atmosfera de incubação	37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.
Condições de envio	As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.
Condições de armazenamento	Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

Esterilidade	A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência. Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Número do lote	Tipo de certificado	Data	Número de catálogo
300414-221	Certificado de Análise	23. May. 2025	300414

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Informações gerais

Características

Dados regulatórios

Dados biomoleculares

Manuseio

Controle de Qualidade e Análise Molecular

Certificado de Análise (CoA)