Клітини HROHep03

Cytion's Freeze Medium CM-1
- це сучасне середовище для кріоконсервування, розроблене для забезпечення найвищого рівня життєздатності та функціональності клітин після розморожування. Це універсальне середовище підходить для широкого спектру типів клітин, включаючи клітини людини і тварин, що робить його незамінним інструментом для різноманітних наукових досліджень. Створене на основі ретельно збалансованої комбінації кріопротекторів та основних поживних речовин, середовище Freeze Medium CM-1 мінімізує утворення кристалів льоду та клітинний стрес під час процесу заморожування, зберігаючи таким чином клітинну цілісність.
Основні характеристики середовища Freeze Medium CM-1 включають

Широка сумісність: Ефективний для широкого спектру типів клітин, включаючи первинні клітини, стовбурові клітини та сформовані клітинні лінії.
Висока життєздатність: Оптимізовано для максимального відновлення та життєздатності клітин після розморожування, що забезпечує надійні результати експериментів.
Готовність до використання: Зручно готуються і стерилізуються для негайного застосування, скорочуючи час підготовки і ризик забруднення.
Підвищена стабільність: Підтримує стабільні характеристики за стандартних умов кріоконсервування, забезпечуючи відтворюваність результатів.
Тривалий термін зберігання: CM-1
- це готовий до використання сироватковий розчин для кріоконсервування, який можна зберігати в холодильнику до одного року.


Використання CM-1 для заморожування клітин

Щоб використовувати CM-1 для заморожування як адгезійних, так і суспензійних клітин, виконайте такі дії

Для адгезивних клітин промийте і відокремте їх від культурального субстрату. Для суспендованих клітин перейдіть до наступного кроку.
Підрахуйте клітини, щоб переконатися, що вони мають належну концентрацію.
Відцентрифугуйте клітини, щоб осадити їх, а потім ресуспендуйте в заморожувальному середовищі CM-1.
Перенесіть ресуспендовані клітини в кріопробірки.
Використовуйте метод повільного заморожування перед перенесенням клітин на довгострокове зберігання





Метод
Опис
Етапи





❄️
Ручне заморожування

Поетапний метод, що передбачає поступове зниження температури для забезпечення життєздатності клітин

1️⃣ Помістіть клітини в середовище для заморожування в морозильну камеру при 4°C на 40 хвилин.
2️⃣ Перенесіть в морозильну камеру при -80°C на 24 години.
3️⃣ Зберігайте клітини в рідкому азоті для тривалого збереження



❄️
Використання містера Фрості

Зручний пристрій, який дозволяє контролювати швидкість заморожування без використання електроенергії

1️⃣ Підготуйте клітини в кріопробірках із заморожувальним середовищем.
2️⃣ Помістіть кріовіали в контейнер Mr. Frosty.
3️⃣ Зберігайте при -80°C протягом 24 годин перед перенесенням у рідкий азот



❄️
Морозильник з контрольованою температурою

Високоточний морозильник Thermo Fisher або інших виробників, призначений для контрольованого зниження температури

1️⃣ Запрограмуйте пристрій на поступове зниження температури.
2️⃣ Помістіть підготовлені клітини в морозильну камеру.
3️⃣ Після циклу заморожування перенесіть клітини в рідкий азот









Зберігайте кріовіали при температурі нижче -130°C або в рідкому азоті для тривалого збереження.


Склад

Містить FBS, ДМСО, глюкозу, солі
Буферна ємність: pH = 7,2-7,6


Середовище CM-1 від Cytion пропонує надійне рішення для кріоконсервування, що забезпечує високу життєздатність клітин та їх функціональність після розморожування для широкого спектру дослідницьких завдань.

DMEM:Ham's F12 — це широко визнане та широко використовуване базове середовище для культивування клітин у біологічних дослідженнях. Воно слугує основним джерелом поживних речовин для росту різних ліній клітин ссавців, особливо у поєднанні з ембріональною сироваткою великої рогатої худоби (FBS).

Ця унікальна формула поєднує модифіковане середовище Дульбекко (DMEM) та Ham's F-12 (поживна суміш Ham's F-12) у точному співвідношенні 1:1. Додавання L-глутаміну ще більше покращує її склад.

DMEM, похідна від мінімального есенціального середовища Ігл (EMEM), має підвищену концентрацію амінокислот та вітамінів порівняно зі своїм попередником. Натомість Ham's F-12 базується на середовищі Ham's F-10, забезпечуючи доповнюючий набір необхідних компонентів.

Для забезпечення оптимального росту клітин зазвичай DMEM:Ham's F12 доповнюють FBS у типовій концентрації 5–10%. Це додавання є необхідним, оскільки у середовищі відсутні гормони росту, ліпіди та білки, що мають вирішальне значення для розвитку клітин.

DMEM:Ham's F12 містить буферну систему для регулювання рН і часто доповнюється феноловим червоним, індикатором рН. Культивовані клітини в DMEM:Ham's F12 або будь-якому середовищі, що використовує бікарбонатну буферну систему, потребують контрольованого середовища з вмістом CO2 5–10% для підтримання відповідного рівня рН. 


Контроль якості

Стерильно фільтрований


Зберігання та термін придатності

Зберігати при температурі від +2 °C до +8 °C, захищаючи від світла.
Після відкриття зберігати при температурі 4 °C і використати протягом 6–8 тижнів.


Умови транспортування

Температура навколишнього середовища


Зберігання

Зберігати в холодильнику при температурі від +2 °C до +8 °C у темному місці. Уникати заморожування та частого нагрівання до +37 °C, оскільки це знижує якість продукту.
Не нагрівайте середовище вище 37°C та не використовуйте неконтрольовані джерела тепла, такі як мікрохвильові печі.
Якщо планується використання лише частини середовища, відберіть необхідну кількість та нагрійте її до кімнатної температури перед використанням.


Склад



Категорія
Компоненти
Концентрація (мг/л)


Амінокислоти
Гліцин
18,75


L-аланін
4,45


L-аргінін HCl
147,50


L-аспарагін H₂O
7,50


L-аспарагінова кислота
6,65


L-цистеїн HCl H₂O
17,56


L-цистин 2 HCl
31,29


L-глутамінова кислота
7,35


L-глутамін
365,00


L-гістидин HCl H₂O
31,48


L-ізолейцин
54,47


L-лейцин
59,05


L-лізин HCl
91,25


L-метіонін
17,24


L-фенілаланін
35,48


L-пролін
17,25


L-серин
26,25


L-треонін
53,45


L-триптофан
9,02


L-тирозин 2 Na 2 H2O
55,79


L-валін
52,85


Вітаміни
D-біотин
0,0035


Хлорид холіну
8,98


D-пантотенат кальцію
2,24


Фолієва кислота
2,66


міо-інозитол
12,60


Нікотинамід
2,02


Піридоксин HCl
0,031


Піридоксаль HCl
2,00


Рибофлавін
0,219


Тіамін HCl
2,17


Вітамін В12
0,68



Неорганічні солі
CaCl₂·2H₂O
154,50


CuSO4 5 H2O
0,0013


Fe(NO3)3 9 H2O
0,05


FeSO4 7 H2O
0,417


KCl
311,80


MgCl2 6 H2O
61,20


MgSO4 7 H2O
100,00


NaCl
6996,00


NaHCO3
1200,00


Na₂HPO₄
71,02


NaH2PO4 2 H2O
70,87


ZnSO4 7 H2O
0,432



Інші компоненти
D-глюкоза
3151,00


Гіпоксантин
2,40


ГЕПЕС
3574,50


Лінолева кислота
0,042


Ліпоєва кислота
0,105


Феноловий червоний натрієвий
8,63


Путресцин 2 HCl
0,081


Піруват натрію
55,00


Тімідин
0,365

Розчин для відокремлення клітин Accutase з ЕДТА та феноловим червоним – 100 мл

Accutase — це готовий до використання, стерильнофільтрований розчин для відокремлення клітин, розроблений як м'яка альтернатива трипсину/EDTA для дисоціації адгезивних клітин ссавців зі стандартного пластикового посуду для культивування тканин та поверхонь з адгезивним покриттям. Він поєднує протеолітичну та колагенолітичну активність ферментів у збалансованому сольовому розчині для забезпечення ефективної, але контрольованої дисоціації, зберігаючи білки на поверхні клітин та підтримуючи високу життєздатність після пасажування та швидке повторне прикріплення.

Формула Accutase базується на фосфатно-буферному розчині Дюльбекко (DPBS) з ЕДТА та феноловим червоним як візуальним індикатором рН. Ферменти мають нессавцеве та небактеріальне походження, що робить Accutase особливо придатним для досліджень стовбурових клітин, робочих процесів з вакцинами та будь-яких застосувань, де необхідно мінімізувати забруднення, похідні від тварин або мікроорганізмів. Розчин самоінгібується при 37 °C, тому після відокремлення не потрібні нейтралізуючі реагенти або середовища, що містять сироватку — клітини можна переносити безпосередньо у свіже середовище.

Основні характеристики

Готова до використання 1x стерильнофільтрована рідина – розведення або відновлення не потрібні
Комбінована протеолітична та колагенолітична активність ферментів для м'якого роз'єднання
Кожна партія стандартизована до визначеної активності дисоціації для забезпечення стабільності між партіями
Ферменти не походять від ссавців та бактерій
Автоінгібується при 37 °C – не потребує нейтралізуючого розчину
Створено на основі PBS Дульбекко з EDTA
Феноловий червоний включений як візуальний індикатор pH
pH 6,8–7,8


Типові застосування
Accutase м'яко дисоціює широкий спектр адгезивних та чутливих типів клітин, включаючи ембріональні стовбурові клітини людини (hESCs), індуковані плюрипотентні стовбурові клітини людини (iPSCs), нейральні стовбурові клітини, первинні нейрони та стандартні культивовані адгезивні лінії, такі як HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 та A549. Типові випадки використання включають:

Рутинне субкультурування та пасажування адгезивних клітин ссавців
Делікатне роз'єднання окремих клітин hESCs, iPSCs та інших чутливих ліній
Підготовка зразків для проточної цитометрії та аналізу FACS
Аналіз маркерів клітинної поверхні, де важлива цілісність епітопу
Аналізи міграції, проліферації та апоптозу клітин
Аналізи стану спокою шляхом депривації сироватки та дослідження трансфекції онкогенів
Аналізи міграції пухлинних клітин та клітин нервового гребеня
Збільшення масштабів виробництва в робочих процесах біореакторів

Для рутинної роботи нанесіть приблизно 10 мл Accutase на 75 см2 поверхні культури та інкубуйте протягом 5–10 хвилин при кімнатній температурі. Оптимальний час інкубації слід визначати для кожної клітинної лінії окремо, і він не повинен перевищувати одну годину. Перед додаванням промийте клітинний шар розчином солі без Ca2+/Mg2+, таким як DPBS без кальцію та магнію, щоб видалити залишки сироватки та двовалентні катіони.

Поводження та зберігання
Зберігайте нерозкриту пляшку в замороженому стані при температурі -15 °C або нижче. Розморожуйте при кімнатній температурі або протягом ночі при температурі від +2 °C до +8 °C. Не розморожуйте Accutase у водяній бані при 37 °C, оскільки підвищені температури знижують активність ферменту. Після розморожування розчин можна зберігати до 2 місяців при температурі від +2 °C до +8 °C; не зберігайте при кімнатній температурі. Не розігрівайте реагент до 37 °C перед застосуванням – додавайте його безпосередньо до промитих клітин при кімнатній температурі. Для тривалого зберігання рекомендується розливати реагент у одноразові аліквоти, щоб уникнути багаторазових циклів розморожування. Завжди працюйте в асептичних умовах.

Якість
Виробляється відповідно до суворих стандартів якості. Кожна партія Accutase проходить стерильну фільтрацію та тестується на стерильність, рН, зовнішній вигляд та дисоціаційну активність, щоб забезпечити стабільну та відтворювану ефективність від партії до партії.

Технічні характеристики



Характеристики
Деталі



Тип продуктуРеагент для відокремлення/дисоціації клітин
ФорматСтерильнофільтрована рідина, готова до використання
Об'єм100 мл
Робоча концентрація1x (готова до використання)
Активність ферментуКомбінована протеолітична та колагенолітична
Походження ферментуНессавцевий та небактеріальний
Буферна системаPBS Дюльбекко з ЕДТА
Індикатор pHФеноловий червоний
Діапазон pH6,8 – 7,8
Зовнішній виглядПрозорий розчин від блідо-червоного до оранжевого кольору
Температура зберігання-15 °C або нижче
Стабільність після розморожуванняДо 2 місяців при температурі від +2 °C до +8 °C
Рекомендований об’єм для використання~10 мл на 75 см² поверхні культури
Типовий час інкубації5 – 10 хвилин при кімнатній температурі
Умови транспортуванняЗаморожено на сухому льоді
ПризначенняТільки для наукових досліджень та подальшого виробництва



Формула (склад на літр)



Компонент
Концентрація (мг/л)




Неорганічні солі

Хлорид натрію (NaCl)8000,00
Гідрофосфат натрію (Na2HPO4)1150,00
Хлорид калію (KCl)200,00
Дігідрофосфат калію (KH2PO4)200,00

Інші компоненти

EDTA · 4Na (тетранатрій EDTA)220,00
Феноловий червоний3,00
Запатентована суміш ферментів (протеолітична та колагенолітична активність)1x



Accutase є зареєстрованою торговою маркою компанії Innovative Cell Technologies, Inc.

Огляд продукту
Об'єм: 100 мл Зберігання: ≤-15°C Стерильність: Стерильно відфільтрований
Розчин антибіотика/антимікотика (100х )
- це стерильний, готовий до використання концентрат, призначений для зменшення ризику мікробного забруднення в культурі клітин та інших лабораторних дослідженнях. Цей 100-кратний розчин містить добре відому комбінацію пеніциліну, стрептоміцину та амфотерицину В, що забезпечує антимікробну активність широкого спектру дії проти грампозитивних і грамнегативних бактерій, дріжджів та нитчастих грибів. Препарат підходить для використання в культурах еукаріотичних клітин, бактеріальних середовищах та інших чутливих до забруднення системах, підтримуючи чистоту та послідовність лабораторних операцій.
Застосування та переваги Оптимізоване для рутинних дослідницьких протоколів, це рішення широко використовується для підтримання асептичних умов у робочих процесах з клітинними культурами. Воно забезпечує надійну роботу в чутливих до забруднення середовищах, допомагаючи дослідникам зменшити ризик надмірного росту мікроорганізмів без шкоди для здоров'я клітин і відтворюваності експериментів. Стерильно відфільтрований склад усуває необхідність у додаткових етапах розчинення, сприяючи спрощеній підготовці середовищ і зменшуючи варіабельність щоденних лабораторних процедур.
Використання та сумісність Для досягнення стандартних робочих концентрацій розведіть розчин у співвідношенні 1:100 у вашому поживному середовищі. Продукт сумісний з широким спектром клітинних ліній ссавців і базальних середовищ. Завдяки постійній наявності на складі, дослідники отримують вигоду від надійного безперервного постачання та спрощеного планування логістики. Розчин слід зберігати при ≤ -15 °C і захищати від повторних циклів заморожування-розморожування для збереження стабільності. Тільки для дослідницьких цілей. Не для використання в діагностичних або терапевтичних процедурах. Не застосовувати для лікування людей або тварин.

Фосфатно-буферний розчин (PBS)
Фосфатно-буферний розчин (PBS)
- це буферний розчин, який широко використовується в біологічних і хімічних дослідженнях. Він відіграє важливу роль у підтримці балансу рН та осмолярності під час різних експериментальних процедур, включаючи обробку тканин та культивування клітин. Наш буферний розчин PBS ретельно розроблений з використанням високочистих інгредієнтів для забезпечення стабільності та надійності в кожному експерименті. Осмолярність та концентрація іонів нашого PBS наближені до людського організму, що робить його ізотонічним та нетоксичним для більшості клітин.

Склад нашого розчину PBS
Наш розчин PBS
- це відрегульована за рівнем рН суміш фосфатних буферів надвисокої чистоти та фізіологічних розчинів. У 1-кратній робочій концентрації він містить

8000 мг/л хлориду натрію (NaCl)
200 мг/л хлориду калію (KCl)
1150 мг/л фосфат натрію двоосновний безводний (Na2HPO4)
200 мг/л фосфат калію одноосновний безводний (KH2PO4)

Цей склад забезпечує оптимальний рН та іонний баланс, що підходить для широкого спектру біологічних застосувань.

Застосування нашого розчину PBS
Наш розчин PBS ідеально підходить для різних застосувань у біологічних дослідженнях. Його ізотонічні та нетоксичні властивості роблять його придатним для розведення речовин і промивання клітинних контейнерів. Розчини PBS, що містять ЕДТА, ефективні для видалення прикріплених і злиплих клітин. Однак не слід додавати до PBS двовалентні метали, такі як цинк, оскільки це може призвести до випадання осаду. У таких випадках рекомендується використовувати буфери Good's. Крім того, наш розчин PBS є прийнятною альтернативою вірусному транспортному середовищу для транспортування та зберігання РНК-вірусів, включаючи SARS-CoV-2.

Контроль якості

Стерильно відфільтрований


Зберігання та термін придатності

Зберігати при температурі від +2°C до +25°C, в захищеному від світла місці.
Після відкриття зберігати при температурі від 2°C до 25°C і використати протягом 24 місяців.


Умови транспортування

Температура навколишнього середовища


Обслуговування

Зберігати в холодильнику при температурі від +2°C до +8°C у темряві. Уникайте заморожування та частого нагрівання до +37°C, оскільки це знижує якість продукту.
Не нагрівайте середовище вище 37°C і не використовуйте неконтрольовані джерела тепла, такі як мікрохвильові печі.
Якщо потрібно використати лише частину засобу, відберіть необхідну кількість і підігрійте його до кімнатної температури перед застосуванням.

Склад



Категорія
Компоненти
Концентрація (мг/л)


Солі
Калій хлористий
200



Калій фосфат одноосновний безводний
200



Натрій хлористий
8000



Натрій фосфат двоосновний безводний
1150