U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 Hücreleri
€800,00*
Ürünler, kuru buzla donmuş halde kriyotüplerde gönderilir. Her kriyotüp, tipik olarak yapışkan hatlar için 3 × 10 6 hücre veya süspansiyon hatları için 5 × 106 hücre içerir (ayrıntılar için parti CoA'sına bakın).
Genel bilgi
| Açıklama | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1, endojen SEH1L (SEH1) geninin CRISPR/Cas9 teknolojisi kullanılarak bir çerçeve içi SNAPf etiketini kodlamak üzere modifiye edildiği U2OS hücrelerinden türetilmiş, genom düzenlemesi yapılmış bir insan osteosarkom hücre hattıdır. SEH1, gözenek iskeletinin montajına ve stabilitesine katkıda bulunan nükleer gözenek kompleksinin (NPC) temel yapısal modülü olan Y kompleksinin (NUP107-160 kompleksi olarak da bilinir) bir bileşenidir. SNAPf kodlama dizisini endojen lokusa ekleyerek, etiketli SEH1 proteini doğal düzenleyici kontrol altında eksprese edilir, fizyolojik ekspresyon seviyeleri korunur ve nükleer gözenek bileşimindeki bozulmalar en aza indirilir. SNAPf etiketi, benzylguanyin konjuge substratları kovalent olarak bağlayan, canlı veya sabit hücrelerde seçici ve stabil floresan etiketleme sağlayan, mühendislik ürünü, hızlı reaksiyon gösteren bir SNAP etiketi varyantıdır. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 hücrelerinde, füzyon proteini NPC dağılımının karakteristik noktalı deseninde nükleer zarfta lokalize olur. Etiketleme endojen protein seviyelerinde gerçekleştiğinden, bu sistem NPC organizasyonunu ve stokiyometrisini incelemek amacıyla yapılan kantitatif floresan mikroskopi, süper çözünürlüklü görüntüleme ve tek parçacık izleme analizleri için çok uygundur. U2OS hücrelerinin düz morfolojisi ve büyük çekirdekleri, nükleer zarf yapılarının yüksek çözünürlüklü görselleştirilmesini daha da kolaylaştırır. SEH1, NPC biyogenezine katılır ve ayrıca mitoz sırasında kinetokor ile ilişkili süreçlerde rol oynar. Buna göre, bu hücre hattı, hücre döngüsüne bağlı NPC montajı ve demontajı, gözenek iskeleti içindeki Y kompleksinin uzamsal organizasyonu ve SEH1'in nükleer zarf ve mitotik kinetokorlarda potansiyel ikili rollerini araştırmak için sağlam bir platform sağlar. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1, fizyolojik olarak ilgili ekspresyon koşulları altında nükleer gözenek mimarisi ve dinamiğinin mekaniksel çalışmalarını mümkün kılar. |
|---|---|
| Organizma | İnsan |
| Doku | Kemik |
| Hastalık | Osteosarkom |
Özellikler
| Yaş | 15 yıl |
|---|---|
| Cinsiyet | Kadın |
| Etnik köken | Kafkas |
| Morfoloji | Epitel benzeri |
| Büyüme özellikleri | Yapışık |
Düzenleyici Veriler
| Atıf | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (Cytion katalog numarası 300664) |
|---|---|
| Biyogüvenlik seviyesi | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| Depozitör | Ellenberg Laboratuvarı (EMBL) |
| GDO Durumu | GMO-S1: Bu insan osteosarkom hücre hattı (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1), SEH1 nükleoporininin seçici olarak etiketlenmesini sağlayan CRISPR aracılı bir SNAPf-SEH1 füzyonu içerir. Modifikasyon stabil olarak mevcuttur. Bu sınıflandırma sadece Almanya içinde geçerlidir ve başka yerlerde farklılık gösterebilir. |
Biyomoleküler Veriler
| Protein ifadesi | SEH1, SNAPf-tag |
|---|
Elleçleme
| Kültür Ortamı | McCoys 5a, w: 3.0 g/L Glukoz, w: stabil Glutamin, w: 2.0 mM Sodyum piruvat, w: 2.2 g/L NaHCO3 (Cytion makale numarası 820200a) |
|---|---|
| Takviyeler | Ortamı %10 FBS, 3,0 g/L Glukoz, stabil Glutamin, 2,0 mM Sodyum piruvat, 2,2 g/L NaHCO3, %1 NEAA ile takviye edin |
| Ayrıştırma Reaktifi | Accutase |
| Alt kültürleme | Yapışık hücrelerden eski ortamı çıkarın ve kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. T25 şişeleri için 3-5 ml PBS ve T75 şişeleri için 5-10 ml kullanın. Ardından, T25 flasklar için 1-2 ml ve T75 flasklar için 2,5 ml kullanarak hücreleri Accutase ile tamamen kaplayın. Hücreleri ayırmak için oda sıcaklığında 8-10 dakika inkübasyona bırakın. İnkübasyondan sonra, hücreleri yeniden süspanse etmek için 10 ml besiyeriyle hafifçe karıştırın, ardından 300xg'de 3 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın, hücreleri taze besiyerinde yeniden süspanse edin ve zaten taze besiyeri içeren yeni şişelere aktarın. |
| Ortamı dondurun | Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz. |
| Hücrelerin Çözdürülmesi ve Kültürlenmesi |
|
| Kuluçka Atmosferi | 37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer. |
| Şişe Kaplaması | Çözüldükten sonra optimum tutunma ve canlılık için Kolajen kaplı flasklar veya plakalar kullanmanızı öneririz. |
| Dondurma Prosedürü | Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın. |
| Nakliye Koşulları | Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın. |
| Depolama Koşulları | Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir. |
Kalite kontrol / Genetik profil / HLA
| Sterilite | Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır. Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur. |
|---|