DOHH-2 Cells

Cytion'ın Dondurma Ortamı CM-1, çözülme sonrası en yüksek düzeyde hücre canlılığı ve işlevselliği sağlamak için tasarlanmış son teknoloji ürünü bir kriyoprezervasyon ortamıdır. Bu çok yönlü besiyeri, hem insan hem de hayvan hücreleri dahil olmak üzere geniş bir hücre tipi yelpazesi için uygundur ve bu da onu çeşitli araştırma uygulamaları için önemli bir araç haline getirir. Kriyoprotektanlar ve temel besin maddelerinin titizlikle dengelenmiş bir kombinasyonuyla formüle edilen Freeze Medium CM-1, dondurma işlemi sırasında buz kristali oluşumunu ve hücresel stresi en aza indirir, böylece hücresel bütünlüğü korur.
Freeze Medium CM-1'in temel özellikleri şunlardır:

Geniş Uyumluluk: Birincil hücreler, kök hücreler ve yerleşik hücre hatları dahil olmak üzere çok çeşitli hücre tipleri için etkilidir.
Yüksek Canlılık: Çözülme sonrası hücre iyileşmesini ve canlılığını en üst düzeye çıkarmak için optimize edilmiş olup güvenilir deneysel sonuçlar sağlar.
Kullanıma Hazır: Hemen uygulama için uygun şekilde hazırlanır ve sterilize edilir, hazırlık süresini ve kontaminasyon riskini azaltır.
Geliştirilmiş Stabilite: Standart kriyoprezervasyon koşulları altında tutarlı performansı koruyarak tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.
Uzun Raf Ömrü: CM-1, buzdolabında bir yıla kadar saklanabilen, serum içeren, kullanıma hazır bir kriyoprezervasyon ortamıdır.


Hücreleri Dondurmak için CM-1 Kullanımı

CM-1'i hem yapışık hem de süspansiyon hücrelerini dondurmak için kullanmak üzere aşağıdaki adımları izleyin

Yapışık hücreler için hücreleri yıkayın ve kültür substratından ayırın. Süspansiyon hücreleri için doğrudan bir sonraki adıma geçin.
Uygun konsantrasyonda olduklarından emin olmak için hücreleri sayın.
Hücreleri santrifüjleyerek peletleyin, ardından CM-1 dondurma ortamında yeniden süspanse edin.
Yeniden süspanse edilen hücreleri kriyoviyallere aktarın.
Hücreleri uzun süreli depolamaya aktarmadan önce yavaş dondurma yöntemi kullanın





Yöntem
Açıklama
Adımlar





❄️
Manuel Dondurma

Hücre canlılığını sağlamak için kademeli sıcaklık düşüşünü içeren adım adım bir yöntem

1️⃣ Hücreleri 40 dakika boyunca 4°C dondurucuda dondurma ortamına yerleştirin.
2️⃣ 24 saat boyunca -80°C dondurucuya aktarın.
3️⃣ Uzun süreli koruma için hücreleri sıvı nitrojen içinde saklayın



❄️
Bay Frosty'yi Kullanmak

Elektrik gücü olmadan kontrollü dondurma oranlarına izin veren kullanışlı bir cihaz

1️⃣ Hücreleri dondurma ortamı ile kriyoviyallerde hazırlayın.
2️⃣ Kriyoviyalleri Mr. Frosty kabına yerleştirin.
3️⃣ Sıvı nitrojene aktarmadan önce -80°C'de 24 saat saklayın



❄️
Kontrollü Fiyatlı Dondurucu

Thermo Fisher veya diğer üreticiler tarafından kontrollü sıcaklık düşürme için tasarlanmış yüksek hassasiyetli bir dondurucu

1️⃣ Cihazı sıcaklığı kademeli olarak düşürecek şekilde programlayın.
2️⃣ Hazırlanan hücreleri dondurucuya yerleştirin.
3️⃣ Dondurma döngüsünden sonra hücreleri sıvı nitrojene aktarın









Kriyoviyalleri -130°C'nin altındaki sıcaklıklarda veya uzun süreli muhafaza için sıvı nitrojen içinde saklayın.


İçindekiler

FBS, DMSO, Glikoz, Tuzlar içerir
Tamponlama kapasitesi: pH = 7,2 ila 7,6


Cytion Freeze Medium CM-1, kriyoprezervasyon için güvenilir bir çözüm sunarak çok çeşitli araştırma uygulamaları için çözülme sonrası yüksek hücre canlılığı ve işlevselliği sağlar.

RPMI ortamı olarak da bilinen RPMI 1640 Ortamı, çeşitli memeli hücrelerini yetiştirmek için biyolojik araştırmalarda yaygın olarak kullanılan çok yönlü bir hücre kültürü ortamıdır. George E. Moore, Robert E. Gerner ve H. Addison Franklin tarafından 1966 yılında ünlü Roswell Park Kapsamlı Kanser Merkezi'nde geliştirilen bu besiyeri, adını Roswell Park Memorial Enstitüsü'ndeki (RPMI) kökeninden almıştır.
Başlangıçta hem süspansiyon hem de tek tabakalı kültürlerde insan lösemik hücrelerinin büyümesini desteklemek için tasarlanan RPMI 1640 Besiyeri, araştırmacılar ve ticari tedarikçiler tarafından yapılan modifikasyonlarla çok çeşitli memeli hücreleri için uygun hale gelmiştir. HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrositler ve karsinomlar gibi hücre hatlarıyla son derece uyumludur.
RPMI 1640 Medium, benzersiz bileşimi nedeniyle diğer hücre kültürü ortamlarından ayrılır. Önemli miktarda fosfat, amino asit ve vitamin içerir. Özellikle, Eagle's Minimal Essential Medium veya Dulbecco's Modified Eagle Medium'da bulunmayan biyotin, B12 vitamini ve PABA içerir. Ayrıca, RPMI 1640 Medium önemli ölçüde yüksek konsantrasyonlarda inositol ve kolin vitaminleri sergiler. Ancak protein, lipid veya büyüme faktörü içermez. Sonuç olarak, hücre büyümesi için en uygun koşulları sağlamak üzere genellikle %10 Fetal Sığır Serumu (FBS) ile takviye gereklidir.
RPMI 1640 Medium'un tamponlama sistemi sodyum bikarbonata dayanır ve fizyolojik olarak uygun bir pH'ı korumak için %5-10 CO2 ortamı gerektirir. İndirgeyici ajan glutatyonun dahil edilmesi, bu ortamı diğerlerinden daha da ayırır.
Kalite Kontrol

Steril filtreli


Depolama ve Raf Ömrü

2°C ila +8°C arasında, ışıktan koruyarak saklayın.
Açıldıktan sonra 4°C'de saklayın ve 6-8 hafta içinde kullanın.


Nakliye Koşulları

Ortam sıcaklığı


Bakım

2°C ila +8°C arasında karanlıkta buzdolabında saklayın. Ürün kalitesini düşürdüğü için dondurmaktan ve sık sık +37°C'ye kadar ısıtmaktan kaçının.
Besiyerini 37°C'nin üzerinde ısıtmayın veya mikrodalga cihazlar gibi kontrolsüz ısı kaynakları kullanmayın.
Ortamın sadece bir kısmı kullanılacaksa, gerekli miktarı çıkarın ve kullanmadan önce oda sıcaklığına kadar ısıtın.



Kompozisyon




Kategori
Bileşenler
Konsantrasyon (mg/L)


Amino Asitler
Glisin
10.00



L-Alanil-L-Glutamin
434.40



L-Arginin
200.00



L-AsparaginH2O
56.82



L-Aspartik Asit
20.00



L-Sistin 2HCl
65.20



L-Glutamik Asit
20.00



L-Histidin HClH2O
20.27



L-Hidroksi-L-Prolin
20.00



L-İzolösin
50.00



L-Lösin
50.00



L-Lizin HCl
40.00



L-Metiyonin
15.00



L-Fenilalanin
15.00



L-Proline
20.00



L-Serin
30.00



L-Threonine
20.00



L-Triptofan
5.00



L-Tirozin 2Na 2H2O
28.83



L-Valine
20.00


Vitaminler
p-Amino Benzoik Asit
1.00



D-Biotin
0.20



Kolin Klorür
3.00



D-Kalsiyum Pantotenat
0.25



Folik Asit
1.00



miyo-İnositol
35.00



Nikotinamid
1.00



Piridoksin HCl
1.00



Riboflavin
0.20



Tiamin HCl
1.00



B12 Vitamini
0.005


İnorganik Tuzlar
Ca(NO3)2 4H2O
100.00



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
100.00



NaCl
6000.00



NaHCO3
2000.00



Na2HPO4
800.00


Diğer Bileşenler
D-Glikoz
2000.00



İndirgenmiş L-Glutatyon
1.00



Fenol Kırmızı Sodyum Tuzu
5.30

EDTA ve Fenol Kırmızısı İçeren Accutase Hücre Ayrıştırma Çözeltisi – 100 ml

Accutase, yapışkan memeli hücrelerini standart doku kültürü plastik kaplarından ve yapışma kaplı yüzeylerden ayırmak için tripsin/EDTA'ya nazik bir alternatif olarak tasarlanmış, kullanıma hazır, steril filtrelenmiş bir hücre ayırma çözeltisidir. Dengeli bir tuz çözeltisi içinde proteolitik ve kollajenolitik enzim aktivitesini birleştirerek etkili ancak kontrollü bir ayrışma sağlar, hücre yüzeyi proteinlerini korur ve yüksek pasaj sonrası canlılık ve hızlı yeniden yapışmayı destekler.

Accutase formülasyonu, görsel pH göstergesi olarak EDTA ve fenol kırmızısı içeren Dulbecco fosfat tamponlu salin (DPBS) bazlıdır. Enzimler memeli ve bakteriyel kökenli değildir, bu da Accutase'i kök hücre araştırmaları, aşı iş akışları ve hayvan veya mikrobiyal kaynaklı kontaminantların en aza indirilmesi gereken tüm uygulamalar için özellikle uygun hale getirir. Çözelti 37 °C'de kendiliğinden inhibe olur, bu nedenle ayrılma işleminden sonra nötralize edici reaktif veya serum içeren ortam gerekmez – hücreler doğrudan taze ortama aktarılabilir.

Temel Özellikler

Kullanıma hazır 1x steril filtrelenmiş sıvı – seyreltme veya sulandırma gerekmez
Nazik ayrışma için birleşik proteolitik ve kollajenolitik enzim aktivitesi
Partiler arası tutarlılık için her parti, tanımlanmış bir ayrışma aktivitesine göre standartlaştırılmıştır
Memeli ve bakteri kaynaklı olmayan enzim
37 °C'de kendiliğinden inhibe olur – nötralize edici çözeltiye gerek yoktur
EDTA içeren Dulbecco’s PBS içinde formüle edilmiştir
Görsel pH göstergesi olarak fenol kırmızısı içerir
pH 6,8 – 7,8


Tipik Uygulamalar
Accutase, insan embriyonik kök hücreleri (hESC'ler), insan indüklenmiş pluripotent kök hücreleri (iPSC'ler), nöral kök hücreler, birincil nöronlar ve HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 ve A549 gibi rutin olarak kültürlenen yapışkan hücre hatları dahil olmak üzere çok çeşitli yapışkan ve hassas hücre tiplerini nazikçe ayrıştırır. Tipik kullanım örnekleri şunlardır:

Yapışkan memeli hücrelerinin rutin alt kültürü ve pasajlanması
hESC'lerin, iPSC'lerin ve diğer hassas hatların nazik tek hücre ayrıştırması
Akış sitometrisi ve FACS analizi için numune hazırlığı
Epitop bütünlüğünün önemli olduğu hücre yüzeyi belirteçlerinin analizi
Hücre göçü, proliferasyon ve apoptoz testleri
Serum açlığı ve onkogen transfeksiyon çalışmaları ile durgunluk testleri
Tümör hücresi ve nöral kret hücresi göç testleri
Biyoreaktör iş akışlarında üretim ölçeğinin büyütülmesi

Rutin çalışmalar için, 75 cm2 kültür yüzeyi başına yaklaşık 10 ml Accutase uygulayın ve oda sıcaklığında 5–10 dakika inkübe edin. Optimum inkübasyon süresi her hücre hattı için ayrı ayrı belirlenmelidir ve bir saati geçmemelidir. İlave etmeden önce, kalıntı serum ve iki değerlikli katyonları gidermek için hücre tabakasını kalsiyum ve magnezyum içermeyen DPBS gibi Ca2+/Mg2+ içermeyen bir tuz çözeltisiyle durulayın.

Kullanım ve Saklama
Açılmamış şişeyi -15 °C veya altında dondurulmuş olarak saklayın. Oda sıcaklığında veya +2 °C ile +8 °C arasında bir gece boyunca çözdürün. Yüksek sıcaklıklar enzim aktivitesini azalttığından, Accutase'i 37 °C'lik su banyosunda çözdürmeyin. Çözdürme işleminden sonra, çözelti +2 °C ile +8 °C arasında 2 aya kadar saklanabilir; oda sıcaklığında saklamayın. Uygulamadan önce reaktifi 37 °C'ye önceden ısıtmayın – oda sıcaklığında yıkanmış hücrelere doğrudan ekleyin. Uzun süreli raf ömrü için, tekrarlanan çözme döngülerinden kaçınmak amacıyla tek kullanımlık alıkoyma önerilir. Her zaman aseptik koşullar altında çalışın.

Kalite
Sıkı kalite standartları altında üretilmiştir. Accutase'in her partisi, partiden partiye tutarlı ve tekrarlanabilir performans sağlamak için steril filtreden geçirilir ve sterilite, pH, görünüm ve ayrışma aktivitesi açısından test edilir.

Ürün Özellikleri



Özellik
Ayrıntı



Ürün türüHücre ayrıştırma / disosiyasyon reaktifi
BiçimSteril filtrelenmiş sıvı, kullanıma hazır
Hacim100 ml
Çalışma konsantrasyonu1x (kullanıma hazır)
Enzim aktivitesiKombine proteolitik ve kollajenolitik
Enzim kaynağıMemeli ve bakteri kaynaklı olmayan
Tampon sistemiEDTA içeren Dulbecco’s PBS
pH göstergesiFenol kırmızısı
pH aralığı6,8 – 7,8
GörünümBerrak, soluk kırmızı ila turuncu renkli çözelti
Saklama sıcaklığı-15 °C veya altında
Çözüldükten sonra stabilite+2 °C ila +8 °C arasında 2 aya kadar
Önerilen kullanım hacmi75 cm2 kültür yüzeyi başına ~10 ml
Tipik inkübasyon süresiOda sıcaklığında 5 – 10 dakika
Nakliye koşullarıKuru buzda dondurulmuş
Kullanım amacıYalnızca araştırma amaçlı ve ileri üretim için



Formülasyon (Litre Başına Bileşim)



Bileşen
Konsantrasyon (mg/L)




İnorganik Tuzlar

Sodyum klorür (NaCl)8000,00
Disodyum hidrojen fosfat (Na2HPO4)1150,00
Potasyum klorür (KCl)200,00
Potasyum dihidrojen fosfat (KH2PO4)200,00

Diğer Bileşenler

EDTA · 4Na (tetrasodyum EDTA)220,00
Fenol kırmızısı3,00
Özel enzim karışımı (proteolitik ve kollajenolitik aktivite)1x



Accutase, Innovative Cell Technologies, Inc. şirketinin tescilli ticari markasıdır.

Ürüne Genel Bakış
Hacim: 100 ml Depolama: ≤-15°C Sterilite: Steril filtrelenmiş
Antibiyotik/Antimikotik Solüsyon (100x), hücre kültürü ve ilgili laboratuvar uygulamalarında mikrobiyal kontaminasyon risklerini azaltmak için tasarlanmış steril, kullanıma hazır bir konsantredir. Bu 100x çözelti, Gram-pozitif ve Gram-negatif bakterilere, mayalara ve filamentli mantarlara karşı geniş spektrumlu antimikrobiyal aktivite sağlayan iyi bilinen bir penisilin, streptomisin ve amfoterisin B kombinasyonu içerir. Formülasyon, ökaryotik hücre kültürlerinde, bakteriyel besiyerlerinde ve kontaminasyona duyarlı diğer sistemlerde kullanıma uygundur ve temiz ve tutarlı laboratuvar işlemlerini destekler.
Uygulama ve Faydaları Rutin araştırma protokolleri için optimize edilen bu çözüm, hücre kültürü iş akışlarında aseptik koşulları korumak için yaygın olarak kullanılmaktadır. Kontaminasyona duyarlı ortamlarda güvenilir performans sunarak araştırmacıların hücre sağlığından veya deneysel tekrarlanabilirlikten ödün vermeden mikrobiyal aşırı büyüme riskini azaltmalarına yardımcı olur. Steril filtreli formülasyon, ek çözündürme adımlarına olan ihtiyacı ortadan kaldırarak kolaylaştırılmış besiyeri hazırlığını destekler ve günlük laboratuvar prosedürlerindeki değişkenliği azaltır.
Kullanım ve Uyumluluk Standart çalışma konsantrasyonları elde etmek için çözeltiyi 1:100 oranında tam kültür ortamınızda seyreltin. Ürün çok çeşitli memeli hücre hatları ve bazal besiyerleri ile uyumludur. Tutarlı stok mevcudiyeti sayesinde araştırmacılar güvenilir tedarik sürekliliğinden ve basitleştirilmiş lojistik planlamasından faydalanır. Çözelti ≤ -15 °C'de saklanmalı ve stabiliteyi korumak için tekrarlanan dondurma-çözme döngülerinden korunmalıdır. Yalnızca araştırma amaçlı kullanım içindir. Tanısal veya terapötik prosedürlerde kullanım için değildir. İnsanlarda veya hayvanlarda kullanım için değildir.

Fosfat Tamponlu Salin (PBS) Çözeltisi
Fosfat tamponlu salin (PBS) biyolojik ve kimyasal araştırmalarda yaygın olarak kullanılan bir tampon çözeltisidir. Doku işleme ve hücre kültürü dahil olmak üzere çeşitli deneysel prosedürler sırasında pH dengesinin ve ozmolaritenin korunmasında çok önemli bir rol oynar. PBS çözeltimiz, her deneyde stabilite ve güvenilirlik sağlamak için yüksek saflıkta bileşenlerle titizlikle formüle edilmiştir. PBS'mizin ozmolaritesi ve iyon konsantrasyonları insan vücudundakileri yakından taklit eder, bu da onu izotonik ve çoğu hücre için toksik olmayan hale getirir.

PBS Solüsyonumuzun Bileşimi
PBS çözeltimiz, ultra saf dereceli fosfat tamponları ve tuzlu su çözeltilerinin pH ayarlı bir karışımıdır. 1X çalışma konsantrasyonunda şunları içerir:

8000 mg/L Sodyum klorür (NaCl)
200 mg/L Potasyum klorür (KCl)
1150 mg/L Sodyum fosfat dibazik susuz (Na2HPO4)
200 mg/L Potasyum fosfat monobazik susuz (KH2PO4)

Bu bileşim, çok çeşitli biyolojik uygulamalar için uygun optimum pH ve iyonik denge sağlar.

PBS Çözeltimizin Uygulamaları
PBS solüsyonumuz biyolojik araştırmalarda çeşitli uygulamalar için idealdir. İzotonik ve toksik olmayan özellikleri onu madde seyreltme ve hücre kabı durulama için uygun hale getirir. EDTA içeren PBS çözeltileri bağlı ve kümelenmiş hücrelerin ayrılması için etkilidir. Ancak, çinko gibi iki değerlikli metaller çökelmeye neden olabileceğinden PBS'ye eklenmemelidir. Bu gibi durumlarda Good's tamponları tavsiye edilir. Ayrıca, PBS solüsyonumuz SARS-CoV-2 dahil olmak üzere RNA virüslerinin taşınması ve saklanması için viral taşıma ortamına kabul edilebilir bir alternatiftir.

Kalite Kontrol

Steril filtreli


Depolama ve Raf Ömrü

2°C ila +25°C arasında, ışıktan koruyarak saklayın.
Açıldıktan sonra 2°C ila 25°C'de saklayın ve 24 ay içinde kullanın.


Nakliye Koşulları

Ortam sıcaklığı


Bakım

2°C ila +8°C arasında karanlıkta buzdolabında saklayın. Ürün kalitesini düşürdüğü için dondurmaktan ve sık sık +37°C'ye kadar ısıtmaktan kaçının.
Besiyerini 37°C'nin üzerinde ısıtmayın veya mikrodalga fırın gibi kontrolsüz ısı kaynakları kullanmayın.
Ortamın sadece bir kısmı kullanılacaksa, gerekli miktarı çıkarın ve kullanmadan önce oda sıcaklığına kadar ısıtın.

Kompozisyon



Kategori
Bileşenler
Konsantrasyon (mg/L)


Tuzlar
Potasyum klorür
200



Potasyum fosfat monobazik susuz
200



Sodyum klorür
8000



Sodyum fosfat dibazik susuz
1150