661w Hücreler

661W, insan interfotoreceptor retinoid bağlayıcı protein (IRBP) promotörünün kontrolü altında simian virüs 40 (SV40) büyük T antijenini eksprese eden transgenik bir farede ortaya çıkan retina tümöründen elde edilen, fare koni fotoreseptöründen türetilmiş bir hücre hattıdır. Bu hat, doğum sonrası retina eksplantlarından üretilmiştir ve ölümsüzleştirilmiş koni fotoreseptör öncüllerini temsil eder. 661W hücreleri yapışkan büyüme gösterir ve standart kültür koşullarında fetal sığır serumu ile takviye edilmiş Dulbecco'nun modifiye Eagle ortamı içinde rutin olarak muhafaza edilir. Bu hücreler, özellikle ışık kaynaklı hasar, oksidatif stres, apoptoz ve retina dejeneratif mekanizmaları ile ilgili çalışmalarda koni fotoreseptörlerinin in vitro modeli olarak yaygın olarak kullanılmaktadır.

Moleküler ve transkriptomik karakterizasyon, 661W hücrelerinin koni opsini ve fototransdüksiyonla ilişkili genler dahil olmak üzere koni fotoreseptör belirteçlerinin çoğunu eksprese ettiğini doğrulamaktadır. Yüksek çözünürlüklü görüntüleme çalışmaları, bu hücrelerin fotoreseptör bağlantı kirpikleri ve dış segmentleri anımsatan yapısal özelliklere sahip birincil kirpikler oluşturduğunu göstermektedir. İmmünositokimyasal ve ultrastrüktürel analizler, siliyer proteinlerin aksonem, membran ve geçiş bölgesinde lokalize olduğunu ortaya koyarak, bunların retina siliyopatilerini araştırmada yararlı olduğunu desteklemektedir. Fonksiyonel çalışmalar, Ift88 gibi intraflagellar transport genlerinin siRNA aracılı knockdown'ının siliyaların kaybına yol açtığını göstererek, 661W'nin siliyer biyolojisinin mekanistik çalışmaları için işlenebilir bir sistem olduğunu doğrulamıştır.

661W hücreleri, fotooksidatif strese karşı oldukça duyarlıdır. Görünür ışığa maruz kalma, NF-κB aktivitesinin aşağı regülasyonu ve kaspaz yolaklarının aktivasyonu ile ilişkili apoptotik hücre ölümünü indükler. Bcl-2 gibi anti-apoptotik proteinlerin aşırı ekspresyonu, ışıkla indüklenen apoptoza direnç kazandırır, NF-κB nükleer aktivitesini korur ve hücre sağkalımını iyileştirir. Bu özellikler, 661W'yi fotoreseptör dejenerasyonunun altında yatan moleküler yolakları incelemek için sağlam bir model haline getirir. 661W hattının, RGC-5 hattı ile çapraz kontaminasyon dahil olmak üzere, tarihsel hücre hattı yanlış tanımlama olaylarında da rol oynadığına dikkat etmek önemlidir; bu da, bu modeli kullanırken titiz bir doğrulama yapılmasının gerekliliğini vurgulamaktadır. Toplamda, 661W, retina dejenerasyonu, oksidatif stres tepkileri, siliyer fonksiyon ve koni hayatta kalmasını hedefleyen terapötik müdahaleleri incelemek için iyi karakterize edilmiş bir murin koni fotoreseptör platformu sağlar.