Celice U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1
800,00 €*
Izdelki se pošiljajo zamrznjeni v suhem ledu v kriotubah. Vsaka kriotuba običajno vsebuje 3 × 10 6 celic za adhezivne linije ali 5 × 106 celic za suspenzijske linije (podrobnosti so navedene v certifikatu o analizi serije).
Splošne informacije
| Opis | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 je genomsko spremenjena človeška osteosarkomska celična linija, pridobljena iz celic U2OS, v kateri je bil endogeni gen SEH1L (SEH1) spremenjen s tehnologijo CRISPR/Cas9, da kodira SNAPf oznako v okviru. SEH1 je sestavni del Y-kompleksa (znanega tudi kot NUP107-160 kompleks), osnovnega strukturne modula jedrskega por kompleksa (NPC), ki prispeva k sestavi in stabilnosti por. Z vstavitvijo kodirne sekvence SNAPf v endogeni lokus se označeni protein SEH1 izraža pod naravnim regulativnim nadzorom, kar ohranja fiziološke ravni izražanja in zmanjšuje motnje v sestavi jedrskih por. Oznaka SNAPf je inženirsko zasnovana, hitro reagirajoča različica oznake SNAP, ki se kovalentno veže na bencilguanin-konjugirane substrata, kar omogoča selektivno in stabilno fluorescenčno označevanje v živih ali fiksiranih celicah. V celicah U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 se fuzijski protein lokalizira v jedrski ovojnici v pikastem vzorcu, značilnem za porazdelitev NPC. Ker se označevanje odvija na ravni endogenih proteinov, je ta sistem primeren za kvantitativno fluorescenčno mikroskopijo, slikanje z visoko ločljivostjo in analize sledenja posameznih delcev, namenjene razčlenitvi organizacije in stehiometrije NPC. Ploščata morfologija in velika jedra celic U2OS dodatno olajšujejo vizualizacijo struktur jedrske ovojnice z visoko ločljivostjo. SEH1 sodeluje v biogenezi NPC in je vpleten tudi v procese, povezane s kinetokori, med mitozo. Skladno s tem ta celična linija zagotavlja robustno platformo za preučevanje sestavljanja in razstavljanja NPC, odvisnega od celičnega cikla, prostorske organizacije Y-kompleksa znotraj porešne ogrodje in potencialnih dvojnih vlog SEH1 na jedrski ovojnici in mitotičnih kinetokorih. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 omogoča mehanistične študije arhitekture in dinamike jedrskih por pod fiziološko relevantnimi pogoji izražanja. |
|---|---|
| Organizem | Človek |
| Tkivo | Kosti |
| Bolezen | Osteosarkom |
Značilnosti
| Starost | 15 let |
|---|---|
| Spol | Ženske |
| Etnična pripadnost | Kavkaški |
| Morfologija | Epitelijam podobni |
| Lastnosti rasti | Pripadajoče |
Regulativni podatki
| Citiranje | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (kataloška številka Cytion 300664) |
|---|---|
| Raven biološke varnosti | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| Vlagatelj | Laboratorij Ellenberg (EMBL) |
| Status GSO | GSO-S1: Ta celična linija človeškega osteosarkoma (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) vsebuje s CRISPR posredovano sintezo SNAPf-SEH1, ki omogoča selektivno označevanje nukleoporina SEH1. Modifikacija je stabilno prisotna. Ta razvrstitev velja samo v Nemčiji in se lahko drugje razlikuje. |
Biomolekularni podatki
| Izražanje beljakovin | SEH1, oznaka SNAPf |
|---|
Ravnanje s spletno stranjo
| Medij za gojenje | McCoys 5a, w: 3,0 g/L glukoze, w: stabilen glutamin, w: 2,0 mM natrijevega piruvata, w: 2,2 g/L NaHCO3 (številka izdelka Cytion 820200a) |
|---|---|
| Dodatki | Gojišče dopolnite z 10 % FBS, 3,0 g/L glukoze, stabilnim glutaminom, 2,0 mM natrijevega piruvata, 2,2 g/L NaHCO3, 1 % NEAA |
| Reagent za disociacijo | Accutase |
| Subkultiviranje | Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče. |
| Sredstvo za zamrzovanje | Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom. |
| Odmrzovanje in gojenje celic |
|
| Inkubacijska atmosfera | 37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje. |
| Prevleka za bučke | Za optimalno pritrditev in sposobnost preživetja po odmrznitvi priporočamo uporabo s kolagenom prevlečenih bučk ali plošč. |
| Postopek zamrzovanja | Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče. |
| Pogoji pošiljanja | Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče. |
| Pogoji shranjevanja | Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik. |
Nadzor kakovosti / Genetski profil / HLA
| Sterilnost | Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence. Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo. |
|---|