Komórki HROHep03

Cytion's Freeze Medium CM-1 to najnowocześniejsza pożywka do kriokonserwacji zaprojektowana w celu zapewnienia najwyższego poziomu żywotności i funkcjonalności komórek po rozmrożeniu. Ta wszechstronna pożywka jest odpowiednia dla szerokiego spektrum typów komórek, w tym zarówno ludzkich, jak i zwierzęcych, co czyni ją niezbędnym narzędziem do różnorodnych zastosowań badawczych. Dzięki starannie zbilansowanej kombinacji krioprotektantów i niezbędnych składników odżywczych, Freeze Medium CM-1 minimalizuje tworzenie się kryształków lodu i stres komórkowy podczas procesu zamrażania, zachowując w ten sposób integralność komórek.
Kluczowe cechy Freeze Medium CM-1 obejmują:

Szeroka kompatybilność: Skuteczny dla szerokiej gamy typów komórek, w tym komórek pierwotnych, komórek macierzystych i ustalonych linii komórkowych.
Wysoka żywotność: Zoptymalizowany w celu maksymalizacji odzysku i żywotności komórek po rozmrożeniu, zapewniając wiarygodne wyniki eksperymentów.
Gotowy do użycia: Wygodnie przygotowany i wysterylizowany do natychmiastowego zastosowania, skracając czas przygotowania i zmniejszając ryzyko zanieczyszczenia.
Zwiększona stabilność: Utrzymuje stałą wydajność w standardowych warunkach kriokonserwacji, zapewniając powtarzalne wyniki.
Długi okres trwałości: CM-1 to zawierająca surowicę, gotowa do użycia pożywka do kriokonserwacji, którą można przechowywać w lodówce przez okres do jednego roku.


Używanie CM-1 do zamrażania komórek

Aby użyć CM-1 do zamrażania zarówno komórek adherentnych, jak i zawiesinowych, należy wykonać następujące kroki

W przypadku komórek przylegających należy je umyć i oddzielić od podłoża hodowlanego. W przypadku komórek w zawiesinie przejdź bezpośrednio do następnego kroku.
Policzyć komórki, aby upewnić się, że mają odpowiednie stężenie.
Odwirować komórki, aby je osuszyć, a następnie ponownie zawiesić w pożywce do zamrażania CM-1.
Przenieś ponownie zawieszone komórki do fiolek.
Użyj metody powolnego zamrażania przed przeniesieniem komórek do długoterminowego przechowywania





Metoda
Opis
Kroki





❄️
Ręczne zamrażanie

Metoda krok po kroku polegająca na stopniowym obniżaniu temperatury w celu zapewnienia żywotności komórek

1️⃣ Umieścić komórki w pożywce do zamrażania w temperaturze 4°C na 40 minut.
2️⃣ Przenieść do zamrażarki o temperaturze -80°C na 24 godziny.
3️⃣ Przechowywać komórki w ciekłym azocie w celu długotrwałego przechowywania



❄️
Korzystanie z Mr. Frosty

Wygodne urządzenie umożliwiające kontrolowane zamrażanie bez zasilania elektrycznego

1️⃣ Przygotować komórki w kriofiolach z pożywką do zamrażania.
2️⃣ Umieścić kriofiole w pojemniku Mr. Frosty.
3️⃣ Przechowywać w temperaturze -80°C przez 24 godziny przed przeniesieniem do ciekłego azotu



❄️
Zamrażarka o kontrolowanej prędkości

Precyzyjna zamrażarka firmy Thermo Fisher lub innych producentów przeznaczona do kontrolowanego obniżania temperatury

1️⃣ Zaprogramuj urządzenie tak, aby stopniowo obniżało temperaturę.
2️⃣ Umieść przygotowane komórki w zamrażarce.
3️⃣ Po cyklu zamrażania przenieś komórki do ciekłego azotu









Przechowywać kriofiole w temperaturze poniżej -130°C lub w ciekłym azocie w celu długotrwałego przechowywania.


Składniki

Zawiera FBS, DMSO, glukozę, sole
Zdolność buforowania: pH = 7,2 do 7,6


Cytion's Freeze Medium CM-1 oferuje niezawodne rozwiązanie do kriokonserwacji, zapewniając wysoką żywotność komórek i funkcjonalność po rozmrożeniu w szerokim zakresie zastosowań badawczych.

DMEM:Ham's F12 to powszechnie uznana i szeroko stosowana pożywka bazowa w hodowli komórek do badań biologicznych. Stanowi ona podstawowe źródło składników odżywczych niezbędnych do wzrostu różnych linii komórek ssaków, zwłaszcza w połączeniu z surowicą płodową bydlęcą (FBS).

Ta unikalna formuła łączy w sobie pożywkę Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) oraz Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) w precyzyjnym stosunku 1:1. Dodatek L-glutaminy dodatkowo wzbogaca jej skład.

DMEM, wywodzące się z minimalnej pożywki niezbędnej Eagle'a (EMEM), oferuje zwiększone stężenie aminokwasów i witamin w porównaniu ze swoim poprzednikiem. Natomiast Ham's F-12 opiera się na pożywce Ham's F-10, zapewniając uzupełniający zestaw niezbędnych składników.

Aby wspierać optymalny wzrost komórek, powszechną praktyką jest uzupełnianie DMEM:Ham's F12 surowicą płodową (FBS) w typowym stężeniu 5–10%. Dodatek ten jest konieczny, ponieważ pożywce brakuje hormonów wzrostu, lipidów i białek niezbędnych do rozwoju komórek.

DMEM:Ham's F12 zawiera system buforujący pH i często jest uzupełniane fenolo-czerwienią, wskaźnikiem pH. Komórki hodowane w DMEM:Ham's F12 lub w dowolnej pożywce wykorzystującej system buforowy wodorowęglanowy wymagają kontrolowanego środowiska CO2 na poziomie 5–10%, aby utrzymać odpowiedni poziom pH. 


Kontrola jakości

Filtrowane sterylnie


Przechowywanie i okres przydatności

Przechowywać w temperaturze od +2°C do +8°C, chroniąc przed światłem.
Po otwarciu przechowywać w temperaturze 4°C i zużyć w ciągu 6–8 tygodni.


Warunki transportu

Temperatura otoczenia


Przechowywanie

Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C w ciemności. Unikać zamrażania i częstego ogrzewania do +37°C, ponieważ obniża to jakość produktu.
Nie podgrzewać pożywki powyżej 37°C ani nie używać niekontrolowanych źródeł ciepła, takich jak kuchenki mikrofalowe.
Jeśli ma zostać wykorzystana tylko część pożywki, należy pobrać wymaganą ilość i ogrzać ją do temperatury pokojowej przed użyciem.


Skład



Kategoria
Składniki
Stężenie (mg/l)


Kwasy aminowe
Glicyna
18,75


L-alanina
4,45


L-arginina HCl
147,50


L-asparagina H₂O
7,50


Kwas L-asparaginowy
6,65


L-cysteina HCl H₂O
17,56


L-cystyna 2 HCl
31,29


Kwas L-glutaminowy
7,35


L-glutamina
365,00


L-histydyna HCl H₂O
31,48


L-izoleucyna
54,47


L-leucyna
59,05


L-lizyna HCl
91,25


L-metionina
17,24


L-fenyloalanina
35,48


L-prolina
17,25


L-seryna
26,25


L-treonina
53,45


L-tryptofan
9,02


L-tyrozyna 2 Na 2 H2O
55,79


L-walina
52,85


Witaminy
D-biotyna
0,0035


Chlorek choliny
8,98


D-pantotenian wapnia
2,24


Kwas foliowy
2,66


mio-inozytol
12,60


Nikotynamid
2,02


Chlorowodorek pirydoksyny
0,031


Chlorowodorek pirydoksalu
2,00


Ryboflawina
0,219


Chlorowodorek tiaminy
2,17


Witamina B12
0,68



Sole nieorganiczne
CaCl2·2H2O
154,50


CuSO4 5 H2O
0,0013


Fe(NO₃)₃·9H₂O
0,05


FeSO4 7 H2O
0,417


KCl
311,80


MgCl2 6 H2O
61,20


MgSO4 7 H2O
100,00


NaCl
6996,00


NaHCO3
1200,00


Na₂HPO₄
71,02


NaH2PO4 2 H2O
70,87


ZnSO4 7 H2O
0,432



Inne składniki
D-glukoza
3151,00


Hipotoksantyna
2,40


HEPES
3574,50


Kwas linolowy
0,042


Kwas liponowy
0,105


Sól sodowa czerwieni fenolowej
8,63


Putrescyna 2 HCl
0,081


Pirowinian sodu
55,00


Tymidyna
0,365

Roztwór do oddzielania komórek Accutase z EDTA i czerwienią fenolową – 100 ml

Accutase to gotowy do użycia, sterylnie filtrowany roztwór do oddzielania komórek, zaprojektowany jako delikatna alternatywa dla trypsyny/EDTA do rozdzielania przylegających komórek ssaków ze standardowych plastikowych naczyń do hodowli tkankowej i powierzchni pokrytych powłoką adhezyjną. Łączy on aktywność enzymów proteolitycznych i kolagenolitycznych w zrównoważonym roztworze soli, zapewniając skuteczne, ale kontrolowane rozdzielanie, zachowując białka powierzchniowe komórek oraz wspierając wysoką żywotność po pasażowaniu i szybkie ponowne przyleganie.

Formuła Accutase opiera się na buforowanym roztworze soli fizjologicznej Dulbecco (DPBS) z dodatkiem EDTA i czerwieni fenolowej jako wizualnego wskaźnika pH. Enzymy są pochodzenia nie-ssaczego i nie-bakteryjnego, co sprawia, że Accutase szczególnie dobrze nadaje się do badań nad komórkami macierzystymi, procesów związanych ze szczepionkami oraz wszelkich zastosowań, w których należy zminimalizować zanieczyszczenia pochodzenia zwierzęcego lub mikrobiologicznego. Roztwór ulega samoczynnej inhibicji w temperaturze 37 °C, więc po oddzieleniu komórek nie jest wymagany odczynnik neutralizujący ani pożywka zawierająca surowicę – komórki można przenieść bezpośrednio do świeżej pożywki.

Najważniejsze cechy

Gotowy do użycia 1x sterylnie filtrowany płyn – nie wymaga rozcieńczania ani rekonstytucji
Połączona aktywność enzymów proteolitycznych i kolagenolitycznych zapewnia delikatną dysocjację
Każda partia jest standaryzowana pod kątem określonej aktywności dysocjacyjnej, co zapewnia spójność między partiami
Enzymy pochodzenia nie-ssaczego i nie-bakteryjnego
Samoczynnie hamuje się w temperaturze 37 °C – nie jest potrzebny roztwór neutralizujący
Opracowany na bazie PBS Dulbecco z EDTA
Zawiera czerwień fenolową jako wizualny wskaźnik pH
pH 6,8–7,8


Typowe zastosowania
Accutase delikatnie rozdziela szeroką gamę przylegających i wrażliwych typów komórek, w tym ludzkie embrionalne komórki macierzyste (hESCs), ludzkie indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste (iPSCs), komórki macierzyste układu nerwowego, pierwotne neurony oraz rutynowo hodowane linie przylegające, takie jak HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 i A549. Typowe zastosowania obejmują:

Rutynową subkulturę i pasażowanie przylegających komórek ssaków
Delikatną dysocjację pojedynczych komórek hESCs, iPSCs i innych wrażliwych linii
Przygotowanie próbek do cytometrii przepływowej i analizy FACS
Analiza markerów powierzchniowych komórek, w przypadku których istotna jest integralność epitopu
Testy migracji, proliferacji i apoptozy komórek
Testy spoczynku komórkowego poprzez pozbawienie surowicy oraz badania transfekcji onkogenów
Testy migracji komórek nowotworowych i komórek grzebienia nerwowego
Zwiększanie skali produkcji w procesach bioreaktorowych

W przypadku rutynowych prac należy zastosować około 10 ml preparatu Accutase na 75 cm2 powierzchni hodowli i inkubować przez 5–10 minut w temperaturze pokojowej. Optymalny czas inkubacji należy określić dla każdej linii komórkowej i nie powinien on przekraczać jednej godziny. Przed dodaniem preparatu należy przepłukać warstwę komórek roztworem soli wolnym od Ca2+/Mg2+, takim jak DPBS bez wapnia i magnezu, w celu usunięcia resztek surowicy i kationów dwuwartościowych.

Postępowanie i przechowywanie
Nieotwartą butelkę należy przechowywać w stanie zamrożonym w temperaturze -15 °C lub niższej. Rozmrażać w temperaturze pokojowej lub przez noc w temperaturze od +2 °C do +8 °C. Nie rozmrażać preparatu Accutase w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C, ponieważ podwyższona temperatura zmniejsza aktywność enzymu. Po rozmrożeniu roztwór można przechowywać do 2 miesięcy w temperaturze od +2 °C do +8 °C; nie przechowywać w temperaturze pokojowej. Nie należy wstępnie ogrzewać odczynnika do temperatury 37 °C przed zastosowaniem – należy go dodać bezpośrednio do przemytych komórek w temperaturze pokojowej. W celu zapewnienia długiego okresu przydatności do użycia zaleca się podział na porcje jednorazowego użytku, aby uniknąć powtarzających się cykli rozmrażania. Zawsze należy pracować w warunkach aseptycznych.

Jakość
Wyprodukowany zgodnie z rygorystycznymi normami jakości. Każda partia preparatu Accutase jest filtrowana sterylnie i badana pod kątem sterylności, pH, wyglądu i aktywności dysocjacyjnej w celu zapewnienia spójnej, powtarzalnej wydajności w poszczególnych partiach.

Specyfikacja produktu



Specyfikacja
Szczegóły



Rodzaj produktuOdczynnik do oddzielania/dysocjacji komórek
PojemnośćPłyn przefiltrowany sterylnie, gotowy do użycia
Pojemność100 ml
Stężenie robocze1x (gotowy do użycia)
Aktywność enzymatycznaPołączone działanie proteolityczne i kolagenolityczne
Pochodzenie enzymówNiepochodzące od ssaków i bakterii
Układ buforowyPBS Dulbecco z EDTA
Wskaźnik pHCzerwień fenolowa
Zakres pH6,8 – 7,8
WyglądPrzezroczysty roztwór o barwie od jasnoczerwonej do pomarańczowej
Temperatura przechowywania-15 °C lub niższa
Stabilność po rozmrożeniuDo 2 miesięcy w temperaturze od +2 °C do +8 °C
Zalecana objętość stosowania~10 ml na 75 cm² powierzchni hodowli
Typowy czas inkubacji5–10 minut w temperaturze pokojowej
Warunki transportuZamrożone w suchym lodzie
PrzeznaczenieWyłącznie do celów badawczych i dalszej produkcji



Skład (skład na litr)



Składnik
Stężenie (mg/l)




Sole nieorganiczne

Chlorek sodu (NaCl)8000,00
Wodorofosforan disodowy (Na₂HPO₄)1150,00
Chlorek potasu (KCl)200,00
Dihydrofosforan potasu (KH2PO4)200,00

Inne składniki

EDTA · 4Na (EDTA tetrasodowy)220,00
Czerwień fenolowa3,00
Zastrzeżona mieszanka enzymów (aktywność proteolityczna i kolagenolityczna)1x



Accutase jest zastrzeżonym znakiem towarowym firmy Innovative Cell Technologies, Inc.

Przegląd produktów
Pojemność: 100 ml Przechowywanie: ≤-15°C Sterylność: Sterylnie filtrowany
Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) to sterylny, gotowy do użycia koncentrat zaprojektowany w celu zmniejszenia ryzyka skażenia mikrobiologicznego w hodowli komórkowej i powiązanych zastosowaniach laboratoryjnych. Roztwór 100x zawiera dobrze znane połączenie penicyliny, streptomycyny i amfoterycyny B, zapewniając szerokie spektrum działania przeciwdrobnoustrojowego przeciwko bakteriom Gram-dodatnim i Gram-ujemnym, drożdżom i grzybom nitkowatym. Preparat nadaje się do stosowania w hodowlach komórek eukariotycznych, pożywkach bakteryjnych i innych systemach wrażliwych na zanieczyszczenia, wspierając czyste i spójne operacje laboratoryjne.
Zastosowanie i korzyści Rozwiązanie to, zoptymalizowane pod kątem rutynowych protokołów badawczych, jest szeroko stosowane do utrzymywania aseptycznych warunków w procesach hodowli komórkowych. Zapewnia niezawodne działanie w środowiskach wrażliwych na zanieczyszczenia, pomagając naukowcom zmniejszyć ryzyko przerostu drobnoustrojów bez uszczerbku dla zdrowia komórek lub powtarzalności eksperymentów. Sterylnie filtrowana formuła eliminuje potrzebę dodatkowych etapów solubilizacji, wspierając usprawnione przygotowanie mediów i zmniejszając zmienność w codziennych procedurach laboratoryjnych.
Zastosowanie i kompatybilność Aby uzyskać standardowe stężenia robocze, należy rozcieńczyć roztwór w stosunku 1:100 w pełnym podłożu hodowlanym. Produkt jest kompatybilny z szeroką gamą linii komórkowych ssaków i pożywek podstawowych. Dzięki stałej dostępności produktu, badacze mogą korzystać z niezawodnej ciągłości dostaw i uproszczonego planowania logistycznego. Roztwór należy przechowywać w temperaturze ≤ -15 °C i chronić przed powtarzającymi się cyklami zamrażania i rozmrażania w celu zachowania stabilności. Wyłącznie do użytku badawczego. Nie stosować w procedurach diagnostycznych lub terapeutycznych. Nie stosować u ludzi ani zwierząt.

Roztwór soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS)
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS) jest szeroko stosowanym roztworem buforowym w badaniach biologicznych i chemicznych. Odgrywa kluczową rolę w utrzymywaniu równowagi pH i osmolarności podczas różnych procedur eksperymentalnych, w tym przetwarzania tkanek i hodowli komórkowej. Nasz roztwór PBS jest starannie opracowany ze składników o wysokiej czystości, aby zapewnić stabilność i niezawodność w każdym eksperymencie. Osmolarność i stężenia jonów naszego PBS ściśle naśladują te występujące w ludzkim organizmie, dzięki czemu jest on izotoniczny i nietoksyczny dla większości komórek.

Skład naszego roztworu PBS
Nasz roztwór PBS to dostosowana pod względem pH mieszanka ultraczystych buforów fosforanowych i roztworów soli fizjologicznej. W stężeniu roboczym 1X zawiera:

8000 mg/l chlorku sodu (NaCl)
200 mg/l chlorku potasu (KCl)
1150 mg/L Bezwodny dwuzasadowy fosforan sodu (Na2HPO4)
200 mg/L Fosforan potasu jednozasadowy bezwodny (KH2PO4)

Taki skład zapewnia optymalne pH i równowagę jonową, odpowiednie do szerokiego zakresu zastosowań biologicznych.

Zastosowania naszego roztworu PBS
Nasz roztwór PBS jest idealny do różnych zastosowań w badaniach biologicznych. Jego izotoniczne i nietoksyczne właściwości sprawiają, że nadaje się do rozcieńczania substancji i płukania pojemników z komórkami. Roztwory PBS zawierające EDTA są skuteczne w odłączaniu przyczepionych i zbrylonych komórek. Do PBS nie należy jednak dodawać metali dwuwartościowych, takich jak cynk, ponieważ może to spowodować wytrącanie się osadów. W takich przypadkach zalecane są bufory Good's. Ponadto nasz roztwór PBS jest akceptowalną alternatywą dla wirusowego podłoża transportowego do transportu i przechowywania wirusów RNA, w tym SARS-CoV-2.

Kontrola jakości

Sterylnie filtrowany


Przechowywanie i okres trwałości

Przechowywać w temperaturze od +2°C do +25°C, chronić przed światłem.
Po otwarciu przechowywać w temperaturze od 2°C do 25°C i zużyć w ciągu 24 miesięcy.


Warunki wysyłki

Temperatura otoczenia


Konserwacja

Przechowywać w lodówce w temperaturze od +2°C do +8°C w ciemności. Unikać zamrażania i częstego podgrzewania do temperatury +37°C, ponieważ obniża to jakość produktu.
Nie podgrzewać nośnika powyżej 37°C ani nie używać niekontrolowanych źródeł ciepła, takich jak urządzenia mikrofalowe.
Jeśli ma być użyta tylko część pożywki, należy usunąć wymaganą ilość i ogrzać ją do temperatury pokojowej przed użyciem.

Skład



Kategoria
Składniki
Stężenie (mg/L)


Sole
Chlorek potasu
200



Fosforan potasu jednozasadowy bezwodny
200



Chlorek sodu
8000



Bezwodny dwuzasadowy fosforan sodu
1150