NCI-H295R-cellen
Algemene informatie
Beschrijving | H295R werd aangepast van de NCI-H295 pluripotente adrenocorticale carcinoomcellijn die door A.F. Gazdar en medewerkers (1990) werd gemaakt van een carcinoom van de bijnierschors. De oorspronkelijke cellen werden aangepast aan een kweekmedium dat de verdubbelingstijd van de populatie terugbracht van 5 dagen naar 2 dagen. De aangepaste cellen werden geselecteerd om in een monolaag te groeien, in tegenstelling tot de oorspronkelijke cellen die in suspensie groeiden. Deze cellijn behoudt het vermogen om bijnier androgenen te produceren. Ze reageert op angiotensine II en kaliumionen. |
---|---|
Organisme | Mens |
Weefsel | Bijnier |
Ziekte | Carcinoom |
Synoniemen | NCI-H295R, NCI H295R, NCIH295R, H-295R, H295R-S1 |
Kenmerken
Leeftijd | 48 jaar |
---|---|
Geslacht | Vrouw |
Etniciteit | Kaukasisch |
Morfologie | Epitheelachtig |
Groei eigenschappen | Monolaag, adherent |
Identificatiemiddelen / Bioveiligheid / Citeren
Citeren | NCI-H295R (Cytion catalogusnummer 300483) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Expressie / Mutatie
Producten | Aldosteron, cortisol, C19 steroïden |
---|
Omgaan met
Kweekmedium | Je kunt ons kant-en-klare NCI-H295R celgroeimedium (820402) kopen of ervoor kiezen om DMEM:Ham's F12, w: 3,1 g/L glucose, w: 1,6 mM L-glutamine, w: 15 mM HEPES, w: 1,0 mM natriumpyruvaat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820400a) aan te vullen met de volgende additieven |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 5% FBS, 0,00625 mg/ml insuline, 0,00625 mg/ml transferrine, 6,25 ng/ml selenium, 1,25 mg/ml runderserumalbumine, 0,00535 mg/ml linolzuur |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Subcultuur | Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten. |
Splitsingsverhouding | Een verhouding van 1:3 tot 1:4 wordt aanbevolen |
Vloeistofvernieuwing | 2 tot 3 keer per week |
Herstel door bevriezing | 48 uur |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole / Genetisch profiel / HLA
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,x
CSF1PO: 10,12
D13S317: 13
D16S539: 11
D5S818: 12
D7S820: 9,12
TH01: 9.3
TPOX: 8
vWA: 17,18
D3S1358: 15,16
D21S11: 32.2
D18S51: 17
Penta E: 5,12
Penta D: 8
D8S1179: 13
FGA: 19.2,24
|
HLA-allelen |
A*: 02:01:01
B*: 15:10:01
C*: 03:04:02
DRB1*: 01:01:01
DQA1*: 01:01:01
DQB1*: 05:01:01
DPB1*: 04:02:01
E: 01:03:02
|
Benodigde producten
Ontdek het geavanceerde NCI-H295R celgroeimedium, een deskundig samengestelde voedingsoplossing die speciaal is ontworpen om de groei en het onderhoud van zoogdiercellijnen te bevorderen, waaronder de gespecialiseerde NCI-H295R cellen. Dit medium onderscheidt zich door zijn unieke mix van Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) en Ham's F-12 (Nutrient Mixture F-12) in een nauwkeurige 1:1 verhouding, verrijkt met essentiële supplementen om te voldoen aan de ingewikkelde behoeften van celkweek.
Verbeterde formulering voor superieure celcultuurprestaties
Aangevulde basis: Het basismedium is al rijk en combineert de hoge aminozuur
- en vitamineconcentraties van DMEM met de diverse voedingsstoffen van Ham's F-12. Aan deze krachtige mix hebben we de voedingsstoffen van Ham's F-12 toegevoegd. Aan deze krachtige mix hebben we 5% foetaal runderserum (FBS) toegevoegd, dat cruciale groeifactoren, hormonen en eiwitten levert.
Toevoegingen op maat: Naast FBS is dit medium verrijkt met cruciale supplementen, waaronder insuline, transferrine, boviene serumalbumine, seleniumzuur en linolzuur. Deze toevoegingen komen tegemoet aan specifieke cellulaire behoeften en bevorderen een verbeterde celgroei, metabolische functie en algehele gezondheid.
L-Glutamine Boost: De aanwezigheid van L-glutamine versterkt de werkzaamheid van het medium, ondersteunt essentiële metabolische processen en stimuleert robuuste celproliferatie.
Geoptimaliseerd voor celkweek
pH-gecontroleerde omgeving: Het medium bevat een bicarbonaat-buffersysteem en fenolroodindicator en zorgt voor een stabiele pH-omgeving. Het is geoptimaliseerd voor een 5% CO2 atmosfeer, waardoor pH nauwkeurig gecontroleerd en aangepast kan worden.
Kwaliteit en zuiverheid: Elke partij basismedium wordt streng getest op steriliteit, mycoplasma en bacteriën, waardoor de integriteit van het medium wordt gegarandeerd. Met een medium dat op pH wordt gehouden, kunt u vertrouwen op de consistente kwaliteit en prestaties van dit medium.
Behandeling en opslag
Behoud de kwaliteit van het medium door het gekoeld te bewaren bij +2°C tot +8°C, uit de buurt van licht. Vermijd extreme temperaturen, zoals bevriezing of oververhitting, om de werkzaamheid te behouden. Voor gedeeltelijk gebruik, verwarm zachtjes de benodigde hoeveelheid op kamertemperatuur en zorg ervoor dat het medium in de juiste conditie wordt gebracht zonder de componenten aan te tasten.
Houdbaarheid
Met een houdbaarheid van 8 weken vanaf de productiedatum is het NCI-H295R celgroeimedium een betrouwbare keuze voor uw celkweekbehoeften, die de vitaliteit en productiviteit van uw onderzoek garandeert.
Deze unieke formulering combineert Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) en Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) in een nauwkeurige 1:1 verhouding. De toevoeging van L-glutamine verbetert de samenstelling nog verder.
DMEM, afgeleid van Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), biedt een verhoogde concentratie aminozuren en vitaminen vergeleken met zijn voorganger. Ham's F-12 daarentegen is gebaseerd op Ham's F-10 medium en biedt een aanvullende set essentiële componenten.
Om optimale celgroei te ondersteunen, is het gebruikelijk om DMEM:Ham's F12 aan te vullen met FBS in een typische concentratie van 5-10%. Deze toevoeging is nodig omdat het medium geen groeihormonen, lipiden en eiwitten bevat die cruciaal zijn voor de ontwikkeling van cellen.
DMEM:Ham's F12 bevat een pH-buffersysteem en wordt vaak aangevuld met fenolrood, een pH-indicator. Voor het kweken van cellen in DMEM:Ham's F12, of elk medium dat het bicarbonaat-buffersysteem gebruikt, is een gecontroleerde CO2-omgeving van 5-10% nodig om de juiste pH-niveaus te handhaven. Fenolrood maakt het mogelijk om pH-veranderingen van 6,2 (geel) tot 8,2 (rood) te controleren.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elk lot is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37°C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetrons).
Als slechts een deel van het medium moet worden gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2H2O
154,45
IJzer(III)nitraat x 9H2O
0,05
IJzer(II)-sulfaat x 7H2O
0,42
Kaliumchloride
311,83
Koper(II)-sulfaat x 5H2O
0.001
Watervrij magnesiumchloride
28,57
Magnesiumsulfaat
48,85
Natriumchloride
6,999.50
Natriumdiwaterstoffosfaat watervrij
54,35
dinatriumwaterstoffosfaat
70,98
Zinksulfaat x 7H2O
0,43
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
3,151.00
HEPES
3,574.50
Hypoxanthine
2,04
Linolzuur
0,04
DL-68 liponzuur
0.103
Natriumpyruvaat
110,00
Fenol rood
8,10
Putrescine x 2HCl
0.081
Thymidine
0,36
Aminozuren
L-Alanine
4,45
L-Arginine x HCl
147,35
L-Asparagine x H2O
7,50
L-Asparaginezuur
6,65
L-Cystine x 2HCl
31,29
L-Cysteïne x HCl x H2O
17,56
L-Glutamine
365,00
L-Glutaminezuur
7,35
Glycine
18,75
L-Histidine x HCl x H2O
31,48
L-Isoleucine
54,37
L-Leucine
58,96
L-Lysine x HCl
91,37
L-Methionine
17,24
L-Fenylalanine
35,48
L-proline
17,27
L-Serine
26,25
L-Threonine
53,55
L-Tryptofaan
9,02
L-Tyrosine x 2Na x 2H2O
55,81
L-Valine
52,66
Vitaminen
D-(+)-Biotine
0,004
D-Calcium pantothenaat
2,12
Choline chloride
8,98
Foliumzuur
2,66
myo-Inositol
12,51
Nicotinamide
2,02
Pyridoxine x HCl
2,03
Riboflavine
0,22
Thiamine x HCl
2,17
Vitamine B12
0,68
NaHCO3
1,200.00
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij minder dan -130°C in een mechanische diepvriezer. Het invriesmedium CM-1 maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en er geen tijdrovende en veeleisende invriesprocessen met gecontroleerde snelheid meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium op, resuspendeer in CM-1, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-1 is een serumbevattend, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde celvriesmedium CM-1 is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talrijke publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde ingrediënten
CM-1 bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums beschermen de cellen optimaal tijdens het invriezen en hebben het voordeel van hoge recovery rates. Aangezien CM-1 is getest met een groot aantal cellijnen, kun je er zeker van zijn dat je cellen altijd goed herstellen.
Bevat FBS, DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-1 vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij -130°C in een mechanische diepvriezer. Het vriesmedium CM-ACF maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en tijdrovende en veeleisende vriesprocessen met gecontroleerde snelheid niet meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium af, resuspendeer in CM-ACF, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-ACF is een serumvrij, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde, serumvrije celvriesmedium CM-ACF is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talloze publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde serumvrije ingrediënten
CM-ACF bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums hebben het nadeel van fluctuerende recovery rates en een onduidelijke samenstelling. Aangezien de samenstelling en concentratie van eiwitten en andere biologische componenten in serum varieert van batch tot batch, kan de reproduceerbaarheid van experimenten met cellen die werden ingevroren in een serumbevattend medium in het gedrang komen. Aangezien elk bestanddeel van CM-ACF zorgvuldig gedefinieerd is, kun je er zeker van zijn dat cellen altijd op identieke wijze herstellen.
Bevat DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Universeel
- zelfs voor stamcelpreservatie
Alle gangbare cellijnen kunnen worden ingevroren en ontdooid om veel levensvatbare cellen op te leveren. Vergeleken met standaardmedia is de mate van herstel van zelfs de meest kwetsbare cellen aanzienlijk hoger. Met CM-ACF bewaren we meer dan 1000 verschillende cellijnen met uitstekend succes.
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-ACF vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
- een zacht alternatief voor trypsine
Accutase is een oplossing voor celdissociatie die een revolutie teweegbrengt in de celkweekindustrie. Het is een mix van proteolytische en collagenolytische enzymen die de werking van trypsine en collagenase nabootst. In tegenstelling tot trypsine bevat Accutase geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is het veel zachter voor cellen, waardoor het een ideale oplossing is voor het routinematig losmaken van cellen van standaard weefselkweekplastiek en plastic met adhesiecoating. In deze blogpost verkennen we de voordelen en toepassingen van Accutase en hoe het de celkweekwereld verandert.
Voordelen van Accutase
Accutase heeft verschillende voordelen ten opzichte van traditionele trypsineoplossingen. Ten eerste kan het worden gebruikt wanneer zachte en efficiënte onthechting van een aanhangende cellijn nodig is, waardoor het een directe vervanging is voor trypsine. Ten tweede werkt Accutase uitstekend op embryonale en neuronale stamcellen en is aangetoond dat het de levensvatbaarheid van deze cellen behoudt na passage. Ten derde behoudt Accutase de meeste epitopen voor daaropvolgende flowcytometrie-analyse, waardoor het ideaal is voor celoppervlakmarkeranalyse.
Bovendien hoeft Accutase niet te worden geneutraliseerd wanneer adherente cellen worden gepasseerd. De toevoeging van meer media nadat de cellen zijn gesplitst, verdunt Accutase zodat het niet langer in staat is om cellen los te maken. Hierdoor is er geen inactiveringsstap nodig en besparen celkweektechnici tijd. Tot slot hoeft Accutase niet te worden gealiquoteerd en is een flesje 2 maanden stabiel in de koelkast.
Toepassingen van Accutase
Accutase is een directe vervanging voor trypsine-oplossing en kan worden gebruikt voor het passeren van cellijnen. Daarnaast presteert Accutase goed bij het losmaken van cellen voor de analyse van veel celoppervlakmarkers met flowcytometrie en voor celsortering. Andere downstreamtoepassingen van de behandeling met Accutase zijn analyse van celoppervlakmarkers, virusgroeitests, celproliferatie, migratie van tumorcellen, routinematige celpassage, opschalen van de productie (bioreactor) en flowcytometrie.
Samenstelling van Accutase
Accutase bevat geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is een natuurlijk enzymmengsel met proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit. Het is geformuleerd in een veel lagere concentratie dan trypsine en collagenase, waardoor het minder giftig en zachter is, maar net zo effectief.
Werkzaamheid van Accutase
Het is aangetoond dat Accutase efficiënt is in het losmaken van primaire en stamcellen en een hoge levensvatbaarheid van de cellen behoudt in vergelijking met enzymen van dierlijke oorsprong zoals trypsine. 100% van de cellen is na 10 minuten hersteld en het kan geen kwaad om cellen tot 45 minuten in Accutase te laten, dankzij de autodigestie van Accutase.
Samengevat
Samengevat is Accutase een krachtige oplossing die het spel in de celkweek verandert. Met zijn zachte aard, efficiëntie en veelzijdigheid is Accutase het ideale alternatief voor trypsine. Als u op zoek bent naar een betrouwbare en efficiënte oplossing voor het losmaken van cellen, dan is Accutase de oplossing voor u.