MDCK-cellen (NBL-2)
Algemene informatie over MDCK cellen
Beschrijving | MDCK-cellen (Madin-Darby Canine Kidney) dienen als een centraal vitromodel in de farmaceutische wetenschappen, in het bijzonder in de studie van epitheliaal transport, epitheliale permeabiliteit en als een instrument voor de evaluatie van membraanpermeabiliteit. Deze cellen, oorspronkelijk afgeleid van niertubulecellen van een hond, vertonen eigenschappen die verwant zijn aan enterocyten, waardoor ze een uitstekend absorptiescreeningmodel en een betrouwbare cellijn voor het evalueren van drugtransportmechanismen vormen. MDCK cellen worden gebruikt om vertakkingsmorfogenese te onderzoeken, een proces dat cruciaal is voor het begrijpen van orgaanontwikkeling en celdifferentiatie. Dit vermogen tot complexe organisatie onderstreept hun relevantie voor het bestuderen van epitheliale weefselarchitectuur en cellulaire accumulatie. MDCK-cellen staan bekend om hun vermogen om hechte, gepolariseerde epitheellagen te vormen, waardoor ze een waardevol model zijn voor het bestuderen van epitheliale barrièrefunctie en celpolariteit, waardoor ze een onmisbaar model zijn voor medicijndragersystemen en het bestuderen van intrinsieke membraanpermeabiliteit. De aanwezigheid van apicale membranen en goed gedefinieerde celverbindingen in MDCK celmonolagen vergemakkelijkt gedetailleerde permeabiliteitsexperimenten, waardoor we meer inzicht krijgen in transepitheliale secretie en de transport- en metabolische functies die inherent zijn aan epitheelcellen. In de virologie zijn MDCK-cellen cruciaal voor het bestuderen van humane influenzavirussen, zoals de H3N2-stam, omdat ze receptoren tot expressie brengen die compatibel zijn met deze virussen. Hierdoor zijn ze een belangrijke bron voor het onderzoeken van de fijne kneepjes van virale infecties, waarbij onderzocht wordt hoe epitheelcellen reageren op virale uitdagingen. Hun nut strekt zich uit tot het evalueren van antivirale middelen en vaccins, wat hun belang voor onderzoek naar infectieziekten en therapeutische ontwikkeling verder benadrukt. Samengevat zijn MDCK-cellen van onschatbare waarde in farmaceutisch en virologisch onderzoek vanwege hun epitheliale eigenschappen, transportstudies en hun nut in modellen voor virale infecties, met name voor influenzavirussen, waardoor ze onmisbaar zijn voor een beter begrip van de toediening van medicijnen, epitheliale biologie en infectieziekten. |
---|---|
Organisme | Hoektand |
Weefsel | Nieren |
Synoniemen | MDCK, NBL-2, Madin-Darby Canine Kidney, Madin Darby Canine Kidney |
Eigenschappen van de Darby canine niercellijn MDCK
Leeftijd | Volwassen |
---|---|
Geslacht | Vrouw |
Morfologie | Epitheelachtig |
Celtype | Epitheel |
Groei eigenschappen | Monolaag, adherent |
Documentatie
Citeren | MDCK (NBL-2) (Cytion catalogusnummer 602280) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Genetica
Virusgevoeligheid | Vesiculaire stomatitis (Indiana), vaccinia, coxsackievirus B5, reovirus 2, 3, adenovirus 4, 5, vesiculair exantheem bij varkens, infectieuze canine hepatitis |
---|---|
Virusresistentie | Poliovirus 2, coxsackievirus B3, B4 |
Omgekeerde transcriptase | negatief |
Producten | Keratine |
Onderhoudstechnieken
Kweekmedium | DMEM:Ham's F12, w: 3,1 g/L Glucose, w: 1,6 mM L-Glutamine, w: 15 mM HEPES, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820400a) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Subcultuur | Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten. |
Splitsingsverhouding | Een zaaidichtheid van 10.000 cellen/cm2 wordt aanbevolen Als de cellen worden gesplitst zonder celtelling, wordt een splitsingsverhouding van 1:4 door de MDCK-cellen getolereerd |
Dichtheid zaaien | 1 x 10^4 cellen/cm^2 |
Vloeistofvernieuwing | Om de 3 dagen |
Herstel door bevriezing | Plaats de cellen na het ontdooien bij 5 x 10 ^ 4 cellen/cm ^ 2 en laat de cellen herstellen van het vriesproces en zich minstens 24 uur hechten. |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole op de MDCK-cellijn
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,x
|
Benodigde producten
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij minder dan -130°C in een mechanische diepvriezer. Het invriesmedium CM-1 maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en er geen tijdrovende en veeleisende invriesprocessen met gecontroleerde snelheid meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium op, resuspendeer in CM-1, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-1 is een serumbevattend, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde celvriesmedium CM-1 is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talrijke publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde ingrediënten
CM-1 bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums beschermen de cellen optimaal tijdens het invriezen en hebben het voordeel van hoge recovery rates. Aangezien CM-1 is getest met een groot aantal cellijnen, kun je er zeker van zijn dat je cellen altijd goed herstellen.
Bevat FBS, DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-1 vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
Deze unieke formulering combineert Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) en Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) in een nauwkeurige 1:1 verhouding. De toevoeging van L-glutamine verbetert de samenstelling nog verder.
DMEM, afgeleid van Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), biedt een verhoogde concentratie aminozuren en vitaminen vergeleken met zijn voorganger. Ham's F-12 daarentegen is gebaseerd op Ham's F-10 medium en biedt een aanvullende set essentiële componenten.
Om optimale celgroei te ondersteunen, is het gebruikelijk om DMEM:Ham's F12 aan te vullen met FBS in een typische concentratie van 5-10%. Deze toevoeging is nodig omdat het medium geen groeihormonen, lipiden en eiwitten bevat die cruciaal zijn voor de ontwikkeling van cellen.
DMEM:Ham's F12 bevat een pH-buffersysteem en wordt vaak aangevuld met fenolrood, een pH-indicator. Voor het kweken van cellen in DMEM:Ham's F12, of elk medium dat het bicarbonaat-buffersysteem gebruikt, is een gecontroleerde CO2-omgeving van 5-10% nodig om de juiste pH-niveaus te handhaven. Fenolrood maakt het mogelijk om pH-veranderingen van 6,2 (geel) tot 8,2 (rood) te controleren.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elk lot is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37°C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetrons).
Als slechts een deel van het medium moet worden gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2H2O
154,45
IJzer(III)nitraat x 9H2O
0,05
IJzer(II)-sulfaat x 7H2O
0,42
Kaliumchloride
311,83
Koper(II)-sulfaat x 5H2O
0.001
Watervrij magnesiumchloride
28,57
Magnesiumsulfaat
48,85
Natriumchloride
6,999.50
Natriumdiwaterstoffosfaat watervrij
54,35
dinatriumwaterstoffosfaat
70,98
Zinksulfaat x 7H2O
0,43
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
3,151.00
HEPES
3,574.50
Hypoxanthine
2,04
Linolzuur
0,04
DL-68 liponzuur
0.103
Natriumpyruvaat
110,00
Fenol rood
8,10
Putrescine x 2HCl
0.081
Thymidine
0,36
Aminozuren
L-Alanine
4,45
L-Arginine x HCl
147,35
L-Asparagine x H2O
7,50
L-Asparaginezuur
6,65
L-Cystine x 2HCl
31,29
L-Cysteïne x HCl x H2O
17,56
L-Glutamine
365,00
L-Glutaminezuur
7,35
Glycine
18,75
L-Histidine x HCl x H2O
31,48
L-Isoleucine
54,37
L-Leucine
58,96
L-Lysine x HCl
91,37
L-Methionine
17,24
L-Fenylalanine
35,48
L-proline
17,27
L-Serine
26,25
L-Threonine
53,55
L-Tryptofaan
9,02
L-Tyrosine x 2Na x 2H2O
55,81
L-Valine
52,66
Vitaminen
D-(+)-Biotine
0,004
D-Calcium pantothenaat
2,12
Choline chloride
8,98
Foliumzuur
2,66
myo-Inositol
12,51
Nicotinamide
2,02
Pyridoxine x HCl
2,03
Riboflavine
0,22
Thiamine x HCl
2,17
Vitamine B12
0,68
NaHCO3
1,200.00
- een zacht alternatief voor trypsine
Accutase is een oplossing voor celdissociatie die een revolutie teweegbrengt in de celkweekindustrie. Het is een mix van proteolytische en collagenolytische enzymen die de werking van trypsine en collagenase nabootst. In tegenstelling tot trypsine bevat Accutase geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is het veel zachter voor cellen, waardoor het een ideale oplossing is voor het routinematig losmaken van cellen van standaard weefselkweekplastiek en plastic met adhesiecoating. In deze blogpost verkennen we de voordelen en toepassingen van Accutase en hoe het de celkweekwereld verandert.
Voordelen van Accutase
Accutase heeft verschillende voordelen ten opzichte van traditionele trypsineoplossingen. Ten eerste kan het worden gebruikt wanneer zachte en efficiënte onthechting van een aanhangende cellijn nodig is, waardoor het een directe vervanging is voor trypsine. Ten tweede werkt Accutase uitstekend op embryonale en neuronale stamcellen en is aangetoond dat het de levensvatbaarheid van deze cellen behoudt na passage. Ten derde behoudt Accutase de meeste epitopen voor daaropvolgende flowcytometrie-analyse, waardoor het ideaal is voor celoppervlakmarkeranalyse.
Bovendien hoeft Accutase niet te worden geneutraliseerd wanneer adherente cellen worden gepasseerd. De toevoeging van meer media nadat de cellen zijn gesplitst, verdunt Accutase zodat het niet langer in staat is om cellen los te maken. Hierdoor is er geen inactiveringsstap nodig en besparen celkweektechnici tijd. Tot slot hoeft Accutase niet te worden gealiquoteerd en is een flesje 2 maanden stabiel in de koelkast.
Toepassingen van Accutase
Accutase is een directe vervanging voor trypsine-oplossing en kan worden gebruikt voor het passeren van cellijnen. Daarnaast presteert Accutase goed bij het losmaken van cellen voor de analyse van veel celoppervlakmarkers met flowcytometrie en voor celsortering. Andere downstreamtoepassingen van de behandeling met Accutase zijn analyse van celoppervlakmarkers, virusgroeitests, celproliferatie, migratie van tumorcellen, routinematige celpassage, opschalen van de productie (bioreactor) en flowcytometrie.
Samenstelling van Accutase
Accutase bevat geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is een natuurlijk enzymmengsel met proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit. Het is geformuleerd in een veel lagere concentratie dan trypsine en collagenase, waardoor het minder giftig en zachter is, maar net zo effectief.
Werkzaamheid van Accutase
Het is aangetoond dat Accutase efficiënt is in het losmaken van primaire en stamcellen en een hoge levensvatbaarheid van de cellen behoudt in vergelijking met enzymen van dierlijke oorsprong zoals trypsine. 100% van de cellen is na 10 minuten hersteld en het kan geen kwaad om cellen tot 45 minuten in Accutase te laten, dankzij de autodigestie van Accutase.
Samengevat
Samengevat is Accutase een krachtige oplossing die het spel in de celkweek verandert. Met zijn zachte aard, efficiëntie en veelzijdigheid is Accutase het ideale alternatief voor trypsine. Als u op zoek bent naar een betrouwbare en efficiënte oplossing voor het losmaken van cellen, dan is Accutase de oplossing voor u.
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) is een veelzijdige bufferoplossing die wordt gebruikt in veel biologische en chemische toepassingen en bij weefselverwerking. Onze PBS-oplossing is geformuleerd met ingrediënten van hoge kwaliteit om een constante pH te garanderen tijdens experimenten. De osmolariteit en ionenconcentraties van onze PBS-oplossing zijn afgestemd op die van het menselijk lichaam, waardoor het isotoon is en niet giftig voor de meeste cellen.
Samenstelling van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is een op pH aangepast mengsel van ultrazuivere fosfaatbuffers en zoutoplossingen. Bij een 1X werkconcentratie bevat het 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 en 2 mM KH2PO4. We hebben deze samenstelling gekozen op basis van CSHL protocollen en Molecular cloning by Sambrook, wat gevestigde standaarden zijn in de onderzoeksgemeenschap.
Toepassingen van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is ideaal voor een breed scala aan toepassingen in biologisch onderzoek. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het perfect voor het verdunnen van stoffen en het spoelen van celcontainers. Onze PBS-oplossing met EDTA kan ook gebruikt worden om vastzittende en samengeklonterde cellen los te maken. Het is echter belangrijk op te merken dat tweewaardige metalen zoals zink niet aan PBS kunnen worden toegevoegd, omdat dit tot precipitatie kan leiden. In dergelijke gevallen worden Good's buffers aanbevolen. Bovendien is aangetoond dat onze PBS-oplossing een aanvaardbaar alternatief is voor virale transportmedia voor het transport en de opslag van RNA-virussen, zoals SARS-CoV-2.
Opslag van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing kan worden bewaard bij kamertemperatuur, waardoor het gemakkelijk te gebruiken en te gebruiken is.
Samengevat
Samengevat is onze PBS-oplossing een essentieel onderdeel van veel biologische en chemische experimenten. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het geschikt voor talloze toepassingen, van celkweek tot virale transportmedium. Door te kiezen voor onze PBS-oplossing van hoge kwaliteit kunnen onderzoekers hun experimenten optimaliseren en nauwkeurige en betrouwbare resultaten garanderen.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Kaliumchloride
200,00
Kaliumdiwaterstoffosfaat
200,00
Natriumchloride
8,000.00
natriumwaterstoffosfaat watervrij
1,150.00