LLC-PK1-cellen
Algemene informatie
Beschrijving | LLC-PK1-cellen zijn een gevestigde en veelgebruikte cellijn in biomedisch onderzoek. Deze cellen zijn afkomstig van een gezonde mannelijke varkensnier en vertonen een typische epitheliale morfologie. De LLC-PK1 lijn is gepolariseerd en bevat tight junctions, waardoor het een ideaal model is voor epitheelweefsel. Een van de belangrijkste eigenschappen van LLC-PK1 cellen is hun vermogen om plasminogeen activator te produceren, een stof die fibrinolyse stimuleert. Deze eigenschap heeft LLC-PK1 cellen bijzonder waardevol gemaakt in tromboseonderzoek. De afgelopen jaren is plasminogeenactivator opgenomen in medicijnen die gebruikt worden bij trombosetherapieën, omdat het het oplossen van kleine bloedstolsels vergemakkelijkt. LLC-PK1 cellen produceren niet alleen plasminogeenactivatoren, maar ook grote hoeveelheden cytokeratine. Deze eigenschap heeft ze populair gemaakt voor verschillende farmacologische en metabole onderzoeksonderzoeken. De LLC-PK1 lijn is gebruikt voor onderzoek naar het metabolisme, transport, toxiciteit en interactie van medicijnen. LLC-PK1 cellen worden ook vaak gebruikt in permeabiliteitstests. Het mechanisme van uracil transport verschilt per cellijn, met een Na+-onafhankelijk systeem op het basolaterale membraan in Caco-2 cellen en zowel Na+-afhankelijke als Na+-onafhankelijke systemen op het apicale membraan in LLC-PK1 cellen. Vergeleken met andere cellijnen hebben LLC-PK1 cellen veel kenmerken van proximale tubulaire cellen in vivo, waaronder apicale membraan microvilli, hoge activiteiten van apicale membraan enzymen en expressie van parathyroïd hormoon receptoren en natriumafhankelijke glucose transporters. Dit maakt LLC-PK1 cellen tot een waardevol instrument in niertoxicologische studies. Een andere cellijn die vaak gebruikt wordt voor onderzoek naar niertoxiciteit is de MDCK-cellijn. Net als LLC-PK1 cellen zijn MDCK cellen epitheelcellen, maar ze hebben kenmerken die meer typisch zijn voor distale tubulaire cellen. Ze brengen vasopressine, oxytocine en prostaglandinereceptoren tot expressie, die bij stimulatie adenylaatcyclase activeren. LLC-PK1 en MDCK cellijnen vermenigvuldigen zich snel en kunnen gemakkelijk vele generaties lang gepasseerd worden in monolaagculturen. LLC-PK1 cellen zijn ook in staat om 'koepels' te vormen, met vloeistof gevulde blaren als gevolg van transport van water en opgeloste stoffen, tight junctions en hechting van de cellen aan het substraat. Concluderend is de LLC-PK1 cellijn een veelzijdig en waardevol hulpmiddel voor biomedisch onderzoek. De lijn is op grote schaal gebruikt in verschillende onderzoeken naar het metabolisme van geneesmiddelen, het transport van geneesmiddelen, de toxiciteit van geneesmiddelen, interacties tussen geneesmiddelen en geneesmiddelen, niertoxicologie en permeabiliteitsbepalingen. Dankzij de gevestigde epitheliale morfologie en de productie van plasminogeenactivator en cytokeratine zijn LLC-PK1 cellen een ideaal model voor epitheelweefsel. |
---|---|
Organisme | Sus Scrofa |
Weefsel | Nieren |
Toepassingen | Geneesmiddelenmetabolisme, permeabiliteitstests, toxiciteit en interactiestudies. |
Synoniemen | LLC-PK(1), LLC-PK-1, LLC PK-1, LLc-PK1, LLC PK1, LLCPK1, Lilly Laboratories Cell-Porcine Kidney 1 |
Kenmerken
Leeftijd | 3-4 weken |
---|---|
Geslacht | Mannelijk |
Morfologie | Epitheelachtig |
Groei eigenschappen | Adherent/suspensie. Het duurt een paar dagen voordat de cellen uitgroeien tot adherente kolonies. |
Identificatiemiddelen / Bioveiligheid / Citeren
Citeren | LLC-PK1 (Cytion catalogusnummer 607264) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Expressie / Mutatie
Producten | plasminogeen activator |
---|
Omgaan met
Kweekmedium | DMEM:Ham's F12, w: 3,1 g/L Glucose, w: 1,6 mM L-Glutamine, w: 15 mM HEPES, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820400a) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Subcultuur | Verzamel de suspensiecellen in een buis van 15 ml en was de aanhangende cellen voorzichtig met PBS zonder calcium en magnesium (gebruik 3-5 ml voor T25-flesjes en 5-10 ml voor T75-flesjes). Breng Accutase aan (1-2 ml voor T25-flesjes, 2,5 ml voor T75-flesjes) en zorg dat de cellaag volledig bedekt wordt. Laat de cellen 10 minuten bij kamertemperatuur incuberen. Na de incubatie zowel de suspensie als de aanhangende cellen combineren en centrifugeren. Na het centrifugeren de celpellet voorzichtig resuspenderen en de celsuspensie overbrengen in nieuwe kolven met vers medium. |
Splitsingsverhouding | Een verhouding van 1:3 tot 1:8 wordt aanbevolen |
Dichtheid zaaien | 1 tot 3 x 10^6 cellen/cm^2 |
Vloeistofvernieuwing | Om de 3 dagen |
Herstel door bevriezing | Plaats de cellen na het ontdooien bij 5 x 10 ^ 4 cellen/cm ^ 2 en laat de cellen herstellen van het vriesproces en zich minstens 24 uur hechten. |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole / Genetisch profiel / HLA
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|
Benodigde producten
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij -130°C in een mechanische diepvriezer. Het vriesmedium CM-ACF maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en tijdrovende en veeleisende vriesprocessen met gecontroleerde snelheid niet meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium af, resuspendeer in CM-ACF, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-ACF is een serumvrij, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde, serumvrije celvriesmedium CM-ACF is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talloze publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde serumvrije ingrediënten
CM-ACF bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums hebben het nadeel van fluctuerende recovery rates en een onduidelijke samenstelling. Aangezien de samenstelling en concentratie van eiwitten en andere biologische componenten in serum varieert van batch tot batch, kan de reproduceerbaarheid van experimenten met cellen die werden ingevroren in een serumbevattend medium in het gedrang komen. Aangezien elk bestanddeel van CM-ACF zorgvuldig gedefinieerd is, kun je er zeker van zijn dat cellen altijd op identieke wijze herstellen.
Bevat DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Universeel
- zelfs voor stamcelpreservatie
Alle gangbare cellijnen kunnen worden ingevroren en ontdooid om veel levensvatbare cellen op te leveren. Vergeleken met standaardmedia is de mate van herstel van zelfs de meest kwetsbare cellen aanzienlijk hoger. Met CM-ACF bewaren we meer dan 1000 verschillende cellijnen met uitstekend succes.
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-ACF vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
Deze unieke formulering combineert Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) en Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) in een nauwkeurige 1:1 verhouding. De toevoeging van L-glutamine verbetert de samenstelling nog verder.
DMEM, afgeleid van Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), biedt een verhoogde concentratie aminozuren en vitaminen vergeleken met zijn voorganger. Ham's F-12 daarentegen is gebaseerd op Ham's F-10 medium en biedt een aanvullende set essentiële componenten.
Om optimale celgroei te ondersteunen, is het gebruikelijk om DMEM:Ham's F12 aan te vullen met FBS in een typische concentratie van 5-10%. Deze toevoeging is nodig omdat het medium geen groeihormonen, lipiden en eiwitten bevat die cruciaal zijn voor de ontwikkeling van cellen.
DMEM:Ham's F12 bevat een pH-buffersysteem en wordt vaak aangevuld met fenolrood, een pH-indicator. Voor het kweken van cellen in DMEM:Ham's F12, of elk medium dat het bicarbonaat-buffersysteem gebruikt, is een gecontroleerde CO2-omgeving van 5-10% nodig om de juiste pH-niveaus te handhaven. Fenolrood maakt het mogelijk om pH-veranderingen van 6,2 (geel) tot 8,2 (rood) te controleren.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elk lot is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Koel bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37°C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetrons).
Als slechts een deel van het medium moet worden gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2H2O
154,45
IJzer(III)nitraat x 9H2O
0,05
IJzer(II)-sulfaat x 7H2O
0,42
Kaliumchloride
311,83
Koper(II)-sulfaat x 5H2O
0.001
Watervrij magnesiumchloride
28,57
Magnesiumsulfaat
48,85
Natriumchloride
6,999.50
Natriumdiwaterstoffosfaat watervrij
54,35
dinatriumwaterstoffosfaat
70,98
Zinksulfaat x 7H2O
0,43
Andere componenten
D(+)-Glucose watervrij
3,151.00
HEPES
3,574.50
Hypoxanthine
2,04
Linolzuur
0,04
DL-68 liponzuur
0.103
Natriumpyruvaat
110,00
Fenol rood
8,10
Putrescine x 2HCl
0.081
Thymidine
0,36
Aminozuren
L-Alanine
4,45
L-Arginine x HCl
147,35
L-Asparagine x H2O
7,50
L-Asparaginezuur
6,65
L-Cystine x 2HCl
31,29
L-Cysteïne x HCl x H2O
17,56
L-Glutamine
365,00
L-Glutaminezuur
7,35
Glycine
18,75
L-Histidine x HCl x H2O
31,48
L-Isoleucine
54,37
L-Leucine
58,96
L-Lysine x HCl
91,37
L-Methionine
17,24
L-Fenylalanine
35,48
L-proline
17,27
L-Serine
26,25
L-Threonine
53,55
L-Tryptofaan
9,02
L-Tyrosine x 2Na x 2H2O
55,81
L-Valine
52,66
Vitaminen
D-(+)-Biotine
0,004
D-Calcium pantothenaat
2,12
Choline chloride
8,98
Foliumzuur
2,66
myo-Inositol
12,51
Nicotinamide
2,02
Pyridoxine x HCl
2,03
Riboflavine
0,22
Thiamine x HCl
2,17
Vitamine B12
0,68
NaHCO3
1,200.00
- een zacht alternatief voor trypsine
Accutase is een oplossing voor celdissociatie die een revolutie teweegbrengt in de celkweekindustrie. Het is een mix van proteolytische en collagenolytische enzymen die de werking van trypsine en collagenase nabootst. In tegenstelling tot trypsine bevat Accutase geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is het veel zachter voor cellen, waardoor het een ideale oplossing is voor het routinematig losmaken van cellen van standaard weefselkweekplastiek en plastic met adhesiecoating. In deze blogpost verkennen we de voordelen en toepassingen van Accutase en hoe het de celkweekwereld verandert.
Voordelen van Accutase
Accutase heeft verschillende voordelen ten opzichte van traditionele trypsineoplossingen. Ten eerste kan het worden gebruikt wanneer zachte en efficiënte onthechting van een aanhangende cellijn nodig is, waardoor het een directe vervanging is voor trypsine. Ten tweede werkt Accutase uitstekend op embryonale en neuronale stamcellen en is aangetoond dat het de levensvatbaarheid van deze cellen behoudt na passage. Ten derde behoudt Accutase de meeste epitopen voor daaropvolgende flowcytometrie-analyse, waardoor het ideaal is voor celoppervlakmarkeranalyse.
Bovendien hoeft Accutase niet te worden geneutraliseerd wanneer adherente cellen worden gepasseerd. De toevoeging van meer media nadat de cellen zijn gesplitst, verdunt Accutase zodat het niet langer in staat is om cellen los te maken. Hierdoor is er geen inactiveringsstap nodig en besparen celkweektechnici tijd. Tot slot hoeft Accutase niet te worden gealiquoteerd en is een flesje 2 maanden stabiel in de koelkast.
Toepassingen van Accutase
Accutase is een directe vervanging voor trypsine-oplossing en kan worden gebruikt voor het passeren van cellijnen. Daarnaast presteert Accutase goed bij het losmaken van cellen voor de analyse van veel celoppervlakmarkers met flowcytometrie en voor celsortering. Andere downstreamtoepassingen van de behandeling met Accutase zijn analyse van celoppervlakmarkers, virusgroeitests, celproliferatie, migratie van tumorcellen, routinematige celpassage, opschalen van de productie (bioreactor) en flowcytometrie.
Samenstelling van Accutase
Accutase bevat geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is een natuurlijk enzymmengsel met proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit. Het is geformuleerd in een veel lagere concentratie dan trypsine en collagenase, waardoor het minder giftig en zachter is, maar net zo effectief.
Werkzaamheid van Accutase
Het is aangetoond dat Accutase efficiënt is in het losmaken van primaire en stamcellen en een hoge levensvatbaarheid van de cellen behoudt in vergelijking met enzymen van dierlijke oorsprong zoals trypsine. 100% van de cellen is na 10 minuten hersteld en het kan geen kwaad om cellen tot 45 minuten in Accutase te laten, dankzij de autodigestie van Accutase.
Samengevat
Samengevat is Accutase een krachtige oplossing die het spel in de celkweek verandert. Met zijn zachte aard, efficiëntie en veelzijdigheid is Accutase het ideale alternatief voor trypsine. Als u op zoek bent naar een betrouwbare en efficiënte oplossing voor het losmaken van cellen, dan is Accutase de oplossing voor u.
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) is een veelzijdige bufferoplossing die wordt gebruikt in veel biologische en chemische toepassingen en bij weefselverwerking. Onze PBS-oplossing is geformuleerd met ingrediënten van hoge kwaliteit om een constante pH te garanderen tijdens experimenten. De osmolariteit en ionenconcentraties van onze PBS-oplossing zijn afgestemd op die van het menselijk lichaam, waardoor het isotoon is en niet giftig voor de meeste cellen.
Samenstelling van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is een op pH aangepast mengsel van ultrazuivere fosfaatbuffers en zoutoplossingen. Bij een 1X werkconcentratie bevat het 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 en 2 mM KH2PO4. We hebben deze samenstelling gekozen op basis van CSHL protocollen en Molecular cloning by Sambrook, wat gevestigde standaarden zijn in de onderzoeksgemeenschap.
Toepassingen van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is ideaal voor een breed scala aan toepassingen in biologisch onderzoek. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het perfect voor het verdunnen van stoffen en het spoelen van celcontainers. Onze PBS-oplossing met EDTA kan ook gebruikt worden om vastzittende en samengeklonterde cellen los te maken. Het is echter belangrijk op te merken dat tweewaardige metalen zoals zink niet aan PBS kunnen worden toegevoegd, omdat dit tot precipitatie kan leiden. In dergelijke gevallen worden Good's buffers aanbevolen. Bovendien is aangetoond dat onze PBS-oplossing een aanvaardbaar alternatief is voor virale transportmedia voor het transport en de opslag van RNA-virussen, zoals SARS-CoV-2.
Opslag van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing kan worden bewaard bij kamertemperatuur, waardoor het gemakkelijk te gebruiken en te gebruiken is.
Samengevat
Samengevat is onze PBS-oplossing een essentieel onderdeel van veel biologische en chemische experimenten. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het geschikt voor talloze toepassingen, van celkweek tot virale transportmedium. Door te kiezen voor onze PBS-oplossing van hoge kwaliteit kunnen onderzoekers hun experimenten optimaliseren en nauwkeurige en betrouwbare resultaten garanderen.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Kaliumchloride
200,00
Kaliumdiwaterstoffosfaat
200,00
Natriumchloride
8,000.00
natriumwaterstoffosfaat watervrij
1,150.00