HMC3-cellen
Algemene informatie
Beschrijving | De humane microgliale kloon 3 (HMC3) cellijn werd in 1995 ontwikkeld door het team van professor Tardieu door middel van SV40-afhankelijke immortalisatie van microgliale cellen uit menselijk ruggenmerg en corticaal weefsel, verkregen uit embryo's van 8 tot 12 weken oud. Deze primaire cellen, gekenmerkt door een langzame deling en een complexe morfologie, werden eerst 10-15 dagen gekweekt voordat ze geïmmortaliseerd werden. De HMC3 cellen behielden verschillende belangrijke kenmerken van primaire microglia, zoals een diverse expressie van myeloïde markers zoals CD68, CD11b en CD14, hoewel de expressieniveaus sterk varieerden met de keuze van het primaire antilichaam, vooral voor CD68. Na immortalisatie vertoonden de HMC3 cellen een verhoogde proliferatie, met verdubbeltijden tussen 24 en 48 uur, terwijl ze veel fenotypische en morfologische kenmerken van hun primaire tegenhangers behielden. Er was met name een hoger aandeel CD68 EBM/11-positieve cellen en een vermindering in fagocytische activiteit vergeleken met de primaire cellen. Stabiliteit in antigenexpressie werd bevestigd over 35 passages, waarbij de cellen positief bleven voor NSE, CD68 en CD11b, maar negatief voor CD14, MHCII en CD4 onder basiscondities. Blootstelling aan interferon-γ (IFNγ) verhoogde echter de MHCII-expressie, wat beter overeenkomt met de reacties van primaire culturen op dezelfde behandeling. Functioneel onderscheidde de HMC3-lijn zich door hogere niveaus van interleukine-6 (IL-6) te produceren onder basale omstandigheden in vergelijking met andere klonen. Desondanks blijft een directe vergelijking met de cytokineproductie van primaire microgliacellen lastig vanwege methodologische verschillen. De respons op lipopolysaccharide (LPS) stimulatie in deze geïmmortaliseerde lijnen bleek verminderd ten opzichte van primaire culturen. In overeenstemming met de kenmerken van primaire microglia produceerden de HMC3- en andere gekloonde lijnen geen tumornecrosefactor-alfa (TNFα), noch spontaan noch na pro-inflammatoire stimulatie, wat een specifieke eigenschap van menselijke embryonale microglia benadrukt. |
---|---|
Organisme | Mens |
Weefsel | Foetale hersenen |
Toepassingen | 3D celkweek, Neurowetenschappen, Neuroinflamatie |
Synoniemen | Menselijke microglia kloon 3, CHME-3, CHME3 |
Kenmerken
Leeftijd | Foetus |
---|---|
Geslacht | Ongespecificeerd |
Morfologie | Macrofaag |
Celtype | Microgliale cel |
Groei eigenschappen | Aanhangend |
Identificatiemiddelen / Bioveiligheid / Citeren
Citeren | HMC3 (Cytion catalogusnummer 300651) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Expressie / Mutatie
Virussen | Het genetisch materiaal van SV40 is stabiel geïntegreerd in het celgenoom. Er vindt geen actieve productie of afgifte van complete virusdeeltjes plaats, wat mogelijke zorgen over bioveiligheid vermindert. |
---|
Omgaan met
Kweekmedium | DMEM:Ham's F12, w: 3,1 g/L Glucose, w: 1,6 mM L-Glutamine, w: 15 mM HEPES, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820400a) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Verdubbelingstijd | 24 en 48 uur |
Subcultuur | Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten. |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole / Genetisch profiel / HLA
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,x
CSF1PO: 10,11
D13S317: 11
D16S539: 12,13
D5S818: 11,12
D7S820: 9,11
TH01: 6
TPOX: 8,9
vWA: 17,19
D3S1358: 16,18
D21S11: 30,31.2
D18S51: 18
Penta E: 7,13
Penta D: 10,14
D8S1179: 13,14
FGA: 21,25
D6S1043: 11
D2S1338: 17,25
D12S391: 16,21
D19S433: 15,15.2
|