HCT116-cellen
Essentiële feiten over HCT116 cellen
Beschrijving | HCT116 cellen, geïsoleerd uit een darmkankerpatiënt, spelen een cruciale rol bij therapeutische studies en het screenen van geneesmiddelen, met name bij onderzoek naar darmkanker. HCT-116 cellen worden herkend voor een mutatie in codon 13 van het proto-oncogen KRAS, wat hun nut voor gentherapie-onderzoek benadrukt, vooral omdat ze gemakkelijk te transfecteren zijn met virale vectoren. In apoptoseonderzoek zijn HCT116 cellen cruciaal voor het bestuderen van de mechanismen van apoptose en celdood. De effecten van butyraat, een vetzuur met een korte keten, zijn uitgebreid bestudeerd in HCT116 cellen, waaruit bleek dat butyraat de proliferatie van dikke darmkanker remt door apoptose te induceren, wat de complexe kanker-cel interactie en de bredere implicaties voor kankeronderzoek benadrukt. De rol van butyraat in het moduleren van genexpressie veranderingen en het induceren van endoplasmatische reticulum stressrespons in HCT116 cellen onderstreept de cellulaire complexiteit in colorectale kanker cellijnen. De interactie tussen HCT116 darmkankercellen en therapeutische middelen zoals metformine, bekend om zijn legeringseffect en potentieel om het risico op kanker te verminderen, is van groot belang. De invloed van metformine op de proliferatie van HCT116 dikke darmcellen, de modulatie van het p21 eiwitniveau en de bredere implicaties op proliferatie en groei bieden inzicht in het beheer van primaire tumoren en de preventie van tumoren en uitzaaiingen. HCT116 cellen zijn van onschatbare waarde voor oncologisch onderzoek en bieden kritisch inzicht in de werkzaamheid van therapeutica en de moleculaire dynamiek van kankerprogressie. Met een opmerkelijke KRAS-mutatie en gevoeligheid voor transfectie vergemakkelijken deze cellen gentherapiestudies, apoptoseanalyse en behandel- en preventiestrategieën voor dikkedarmkanker. |
---|---|
Organisme | Mens |
Weefsel | Colorectaal |
Ziekte | Adenocarcinoom |
Synoniemen | HCT-116, HCT.116, HCT_116, HCT 116, CoCL2 |
Kenmerken van de colorectale carcinoomcellijn HCT116
Leeftijd | 48 jaar |
---|---|
Geslacht | Mannelijk |
Etniciteit | Kaukasisch |
Morfologie | Epitheelachtig |
Groei eigenschappen | Aanhangend |
Documentatie
Citeren | HCT116 (Cytion catalogusnummer 300195) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Genomica van HCT116 darmkankercellen
Antigeenexpressie | De cellen zijn positief voor keratine door immunoperoxidase kleuring. HCT 116 cellen zijn positief voor de expressie van transformerende groeifactor bèta 1 (TGF bèta 1) en bèta 2 (TGF bèta 2). |
---|---|
Tumorigeen | Ja, in naakte muizen (inoculum van 5-10 x 106 cellen) |
Ploidiestatus | Aneuploïde |
Karyotype | Het karyotype van HCT116 cellen is bijna diploïd, met 70% van de cellen met 45 chromosomen, vaak met een oververtegenwoordiging van chromosomen 8, 10, 16 en 17 op de lange armen, samen met de afwezigheid van het Y-chromosoom. |
Richtlijnen voor kweken
Kweekmedium | McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucose, w: stabiel Glutamine, w: 2,0 mM Natriumpyruvaat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820200a) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Verdubbelingstijd | 25 tot 35 uur |
Subcultuur | Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten. |
Splitsingsverhouding | Een verhouding van 1:3 tot 1:5 wordt aanbevolen |
Dichtheid zaaien | 2 x 10^4 cellen/cm^2 |
Vloeistofvernieuwing | 1 tot 2 keer per week |
Herstel door bevriezing | 3 dagen |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Celzuiverheid en -identiteit
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,y
CSF1PO: 7,10
D13S317: 10,12
D16S539: 11,13
D5S818: 10,11
D7S820: 11,12
TH01: 8,9
TPOX: 8,9
vWA: 17,22
|
HLA-allelen |
A*: 01:01:01, 02:01:01
B*: 18:01:01, 21:01:01
C*: 05:01:01, 07:01:01
DRB1*: 03:01:01, 11:02:01
DQA1*: 05:01:01, 05:05:01
DQB1*: 02:01:01, 03:19:01
DPB1*: 03:01:01G, 04:02:01G
E: 01:01, 01:03
|
Benodigde producten
Een prominente toepassing van McCoy's 5A Medium is het gebruik in de kweek van menselijke coloncarcinoom cellijnen. Specifiek werd het gebruikt in de studie van de leucinerijke repeat-bevattende G-proteïne gekoppelde receptor (LGR5) en zijn rol in de metastase van darmkanker. Dit medium is effectief gebruikt voor de kweek van verschillende coloncarcinoomcellijnen, waaronder HCT116, RKO, FET, CBS, HCT116b en TENN, waardoor onderzoekers dieper kunnen ingaan op de mechanismen die ten grondslag liggen aan de uitzaaiing van colonkanker.
Naast de toepassing in kankeronderzoek, heeft McCoy's 5A Medium bewezen onmisbaar te zijn in de studie van osteoblasten. Onderzoekers die de ionenreactiviteit van calciumdeficiënt hydroxyapatiet in standaard celkweekmedia onderzoeken, hebben dit medium gebruikt om osteoblasten te kweken. Deze toepassing heeft geleid tot een beter begrip van de interacties tussen osteoblasten en calciumdeficiënt hydroxyapatiet, wat bijdraagt aan de vooruitgang op het gebied van botonderzoek.
Met name McCoy's 5A Medium is zorgvuldig geformuleerd door de aminozuren in Basal Medium Eagle te wijzigen om optimale ondersteuning te bieden aan levertumorcellen. Deze verrijkte formulering maakt het geschikt voor een breed scala van gevestigde cellijnen, evenals primaire cellen, waardoor de veelzijdigheid en toepasbaarheid in verschillende onderzoekssettings verder wordt verbeterd.
Bovendien breidt McCoy's 5A Medium zijn biochemische en fysiologische effecten uit tot buiten levertumorcellen. Het is met succes gebruikt om groei te ondersteunen in primaire culturen van beenmerg, huid, tandvlees, nieren, omentum, bijnieren, longen, milt, rattenembryo en andere celtypes. Deze brede waaier van toepassingen getuigt van het brede nut van McCoy's 5A Medium in de ondersteuning van de groei en het onderhoud van verschillende celtypes voor uitgebreid biologisch onderzoek.
Formulering
Dit McCoy's 5A medium (gemodificeerd) bevat 3,0 g/L glucose, stabiele glutamine, 2,0 mM natriumpyruvaat en 2,2 g/L NaHCO3.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elke partij is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Gekoeld bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2H2O
132,46
Magnesiumsulfaat x 7H2O
200,00
Kaliumchloride
400,00
Natriumchloride
6,460.00
Natriumdiwaterstoffosfaat x H2O
580,00
Andere componenten
D(+)-Galactose watervrij
3,000.00
Glutathion (rood.)
0,50
Bacto-pepton
600,00
Fenol rood
10,00
Aminozuren
L-Alanine
13,36
L-Arginine x HCl
42,10
L-Asparagine x H2O
45,00
L-Asparaginezuur
19,97
L-Cysteïne
24,24
L-Glutamine stabiel
326,61
L-Glutaminezuur
22,10
Glycine
7,50
L-Histidine x HCl x H2O
20,76
L-Hydroxyproline
19,70
L-Isoleucine
39,36
L-Leucine
39,36
L-Lysine x HCl
36,50
L-Methionine
14,90
L-Fenylalanine
16,50
L-Proline
17,30
L-Serine
26,30
L-Threonine
17,90
L-Tryptofaan
3,10
L-Tyrosine
18,10
L-Valine
17,60
Vitaminen
p-Aminobenzoëzuur
1,00
Ascorbinezuur
0,50
D(+)-Biotine
0,20
D-Calcium pantothenaat
0,20
Choline chloride
5,00
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij minder dan -130°C in een mechanische diepvriezer. Het invriesmedium CM-1 maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en er geen tijdrovende en veeleisende invriesprocessen met gecontroleerde snelheid meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium op, resuspendeer in CM-1, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-1 is een serumbevattend, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde celvriesmedium CM-1 is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talrijke publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde ingrediënten
CM-1 bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums beschermen de cellen optimaal tijdens het invriezen en hebben het voordeel van hoge recovery rates. Aangezien CM-1 is getest met een groot aantal cellijnen, kun je er zeker van zijn dat je cellen altijd goed herstellen.
Bevat FBS, DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-1 vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
- een zacht alternatief voor trypsine
Accutase is een oplossing voor celdissociatie die een revolutie teweegbrengt in de celkweekindustrie. Het is een mix van proteolytische en collagenolytische enzymen die de werking van trypsine en collagenase nabootst. In tegenstelling tot trypsine bevat Accutase geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is het veel zachter voor cellen, waardoor het een ideale oplossing is voor het routinematig losmaken van cellen van standaard weefselkweekplastiek en plastic met adhesiecoating. In deze blogpost verkennen we de voordelen en toepassingen van Accutase en hoe het de celkweekwereld verandert.
Voordelen van Accutase
Accutase heeft verschillende voordelen ten opzichte van traditionele trypsineoplossingen. Ten eerste kan het worden gebruikt wanneer zachte en efficiënte onthechting van een aanhangende cellijn nodig is, waardoor het een directe vervanging is voor trypsine. Ten tweede werkt Accutase uitstekend op embryonale en neuronale stamcellen en is aangetoond dat het de levensvatbaarheid van deze cellen behoudt na passage. Ten derde behoudt Accutase de meeste epitopen voor daaropvolgende flowcytometrie-analyse, waardoor het ideaal is voor celoppervlakmarkeranalyse.
Bovendien hoeft Accutase niet te worden geneutraliseerd wanneer adherente cellen worden gepasseerd. De toevoeging van meer media nadat de cellen zijn gesplitst, verdunt Accutase zodat het niet langer in staat is om cellen los te maken. Hierdoor is er geen inactiveringsstap nodig en besparen celkweektechnici tijd. Tot slot hoeft Accutase niet te worden gealiquoteerd en is een flesje 2 maanden stabiel in de koelkast.
Toepassingen van Accutase
Accutase is een directe vervanging voor trypsine-oplossing en kan worden gebruikt voor het passeren van cellijnen. Daarnaast presteert Accutase goed bij het losmaken van cellen voor de analyse van veel celoppervlakmarkers met flowcytometrie en voor celsortering. Andere downstreamtoepassingen van de behandeling met Accutase zijn analyse van celoppervlakmarkers, virusgroeitests, celproliferatie, migratie van tumorcellen, routinematige celpassage, opschalen van de productie (bioreactor) en flowcytometrie.
Samenstelling van Accutase
Accutase bevat geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is een natuurlijk enzymmengsel met proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit. Het is geformuleerd in een veel lagere concentratie dan trypsine en collagenase, waardoor het minder giftig en zachter is, maar net zo effectief.
Werkzaamheid van Accutase
Het is aangetoond dat Accutase efficiënt is in het losmaken van primaire en stamcellen en een hoge levensvatbaarheid van de cellen behoudt in vergelijking met enzymen van dierlijke oorsprong zoals trypsine. 100% van de cellen is na 10 minuten hersteld en het kan geen kwaad om cellen tot 45 minuten in Accutase te laten, dankzij de autodigestie van Accutase.
Samengevat
Samengevat is Accutase een krachtige oplossing die het spel in de celkweek verandert. Met zijn zachte aard, efficiëntie en veelzijdigheid is Accutase het ideale alternatief voor trypsine. Als u op zoek bent naar een betrouwbare en efficiënte oplossing voor het losmaken van cellen, dan is Accutase de oplossing voor u.
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) is een veelzijdige bufferoplossing die wordt gebruikt in veel biologische en chemische toepassingen en bij weefselverwerking. Onze PBS-oplossing is geformuleerd met ingrediënten van hoge kwaliteit om een constante pH te garanderen tijdens experimenten. De osmolariteit en ionenconcentraties van onze PBS-oplossing zijn afgestemd op die van het menselijk lichaam, waardoor het isotoon is en niet giftig voor de meeste cellen.
Samenstelling van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is een op pH aangepast mengsel van ultrazuivere fosfaatbuffers en zoutoplossingen. Bij een 1X werkconcentratie bevat het 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 en 2 mM KH2PO4. We hebben deze samenstelling gekozen op basis van CSHL protocollen en Molecular cloning by Sambrook, wat gevestigde standaarden zijn in de onderzoeksgemeenschap.
Toepassingen van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is ideaal voor een breed scala aan toepassingen in biologisch onderzoek. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het perfect voor het verdunnen van stoffen en het spoelen van celcontainers. Onze PBS-oplossing met EDTA kan ook gebruikt worden om vastzittende en samengeklonterde cellen los te maken. Het is echter belangrijk op te merken dat tweewaardige metalen zoals zink niet aan PBS kunnen worden toegevoegd, omdat dit tot precipitatie kan leiden. In dergelijke gevallen worden Good's buffers aanbevolen. Bovendien is aangetoond dat onze PBS-oplossing een aanvaardbaar alternatief is voor virale transportmedia voor het transport en de opslag van RNA-virussen, zoals SARS-CoV-2.
Opslag van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing kan worden bewaard bij kamertemperatuur, waardoor het gemakkelijk te gebruiken en te gebruiken is.
Samengevat
Samengevat is onze PBS-oplossing een essentieel onderdeel van veel biologische en chemische experimenten. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het geschikt voor talloze toepassingen, van celkweek tot virale transportmedium. Door te kiezen voor onze PBS-oplossing van hoge kwaliteit kunnen onderzoekers hun experimenten optimaliseren en nauwkeurige en betrouwbare resultaten garanderen.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Kaliumchloride
200,00
Kaliumdiwaterstoffosfaat
200,00
Natriumchloride
8,000.00
natriumwaterstoffosfaat watervrij
1,150.00