Caco-2-cellen
€ 540,00*
Prijzen excl. btw plus verzendkosten Deze cellijn is in licentie gegeven aan CLS door een universiteit of instituut. Voor de verkoop van dit artikel moet een Material Transfer Agreement (MTA) worden afgesloten. Neem contact met ons op voor meer informatie.
Inleiding tot Caco-2 cellen
Beschrijving | Caco-2 cellen dienen als een geavanceerd in vitro model voor de menselijke darmbarrière, voornamelijk door hun differentiatie tot een celmonolaag die sterk lijkt op de enterocyten die de dunne darm bekleden. Bij het kweken van de Caco2-cellijn op weefselkweekfilterinzetstukken met polycarbonaatfilters ondergaan Caco-2-cellen spontane differentiatie. De differentiatie van Caco2-cellen resulteert in de expressie van gespecialiseerde celtypen, compleet met microvilli, enzymen en transporters, die de complexe kenmerken en mechanismen van een in vivo situatie benaderen. In de context van intestinale absorptiestudiemodellen zijn Caco-2 cellen, die afkomstig zijn van een menselijke colorectale adenocarcinoma-patiënt, essentieel vanwege hun vermogen om hoge TEER-waarden te ontwikkelen, wat duidt op intacte tight junctions en epitheliale barrièrefunctie. Deze eigenschappen zijn cruciaal voor assays zoals de cholesterol efflux assay en onderzoeken naar cellulair transport, inclusief de beweging van lipide nanodeeltjes en de detectie van eiwit interacties. Caco-2 cellen zijn cruciaal voor intestinale absorptiestudies en bieden een betrouwbare in vitro benadering van het intestinale epitheel. Deze cellen bootsen enterocyten in de darm na en vergemakkelijken analyses van orale absorptie van geneesmiddelen door de darmbarrière na te bootsen. Onderzoekers gebruiken Caco-2 cellen om te voorspellen hoe stoffen het darmslijmvlies passeren, wat essentieel is voor de farmacokinetische profilering van orale geneesmiddelen. Bovendien zijn ze een belangrijk hulpmiddel bij het onderzoeken van de intestinale cholesterolopname, homeostase en transport, wat vitale processen zijn voor het begrijpen van het vetmetabolisme en gerelateerde ziekten. Caco-2 cellen blijven een hoeksteen in het onderzoek naar coloncarcinomen en toxicologie, niet alleen vanwege hun relevantie voor onderzoek naar het menselijk maag-darmkanaal, maar ook vanwege hun rol in het verschaffen van gedetailleerde inzichten in de biliary pathway, het metabolisme van xenobiotica in het colon, kanker en toxicologisch onderzoek. |
---|---|
Organisme | Mens |
Weefsel | Kolon |
Ziekte | Adenocarcinoom |
Toepassingen | Model van het GI (gastro-intestinaal) kanaal, meting van de Trans-Epitheliale/Endotheliale Eletrische Weerstand (TEER). Caco-2 cellen ontwikkelen hoge TEER-waarden tot 2000 cm2 (zoals gemeten door CLS met de CellZscope, nanoAnalytics, M?nster, Duitsland). |
Synoniemen | CaCo-2, CACO-2, Caco 2, CACO 2, CACO2, CaCo2, CaCO2, Caco2, Caco-II |
Details
Leeftijd | 72 jaar |
---|---|
Geslacht | Mannelijk |
Etniciteit | Kaukasisch |
Morfologie | Epitheelachtig |
Groei eigenschappen | Aanhangend |
Documentatie
Citeren | CaCo-2 (Cytion catalogusnummer 300137) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Genetische samenstelling van de Caco-2 cellijn
Uitgedrukte receptoren | Hittestabiel enterotoxine (Sta, E. coli), epidermale groeifactor (EGF), retinoïnezuurbindend proteïne I en retinolbindend proteïne II, keratine positief. |
---|---|
Antigeenexpressie | Bloedgroep O, Rh+, HLA klasse II negatief |
Isoenzymen | Me-2, 1, PGM3, 1, PGM1, 1, ES-D, 1, AK-1, 1, GLO-1, 1, G6PD, B. |
Tumorigeen | Ja, in naakte muizen. Vormt matig goed gedifferentieerde adenocarcinomen consistent met colon primaire (graad II) |
Virusresistentie | Humaan immunodeficiëntievirus (HIV, LAV) |
Ploidiestatus | (P14), hypertetraploïde |
Omgaan met
Kweekmedium | EMEM, w: 2 mM L-Glutamine, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: EBSS, w: 1 mM natriumpyruvaat, w: NEAA (Cytion artikelnummer 820100c) |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Verdubbelingstijd | 60 tot 70 uur |
Subcultuur | Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten. |
Splitsingsverhouding | Een verhouding van 1:2 tot 1:3 wordt aanbevolen |
Dichtheid zaaien | 1 x 10^4 cellen/cm ^ 2 zal resulteren in een 90% confluente monolaag in ongeveer 4 dagen |
Herstel door bevriezing | Plaats de cellen na het ontdooien bij 5 x 10 ^ 4 cellen/cm ^ 2 en laat de cellen herstellen van het vriesproces en zich minstens 24 uur hechten. |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitscontrole
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|---|
STR profiel |
Amelogenine: x,x
CSF1PO: 11
D13S317: 11, 13, 14
D16S539: 12, 13
D5S818: 12, 13
D7S820: 11, 12
TH01: 6
TPOX: 9, 11
vWA: 16, 18
D3S1358: 14, 17
D21S11: 30, 32
D18S51: 12
D8S1179: 12, 14
FGA: 19
D1S1656: 15, 16
D2S1338: 17, 25
D12S391: 17, 23
D19S433: 15
|
HLA-allelen |
A*: 02:01:01
B*: 15:01:01
C*: 04:01:01
DRB1*: 04:04:01
DQA1*: 03:01:01
DQB1*: 03:02:01
DPB1*: 04:01:01
E: 01:03:02
|
Benodigde producten
In biologisch onderzoek is de cryopreservatie van cellen van zoogdieren een hulpmiddel van onschatbare waarde. Succesvolle preservatie van cellen is een topprioriteit, aangezien het verlies van een cellijn door contaminatie of onjuiste opslagomstandigheden leidt tot tijd
- en geldverlies en uiteindelijk tot vertraging van onderzoeksresultaten. Zodra de cellen zijn overgebracht van een celgroeimedium naar een vriesmedium, worden de cellen meestal op een gereguleerde snelheid ingevroren en opgeslagen in vloeibare stikstofdamp of bij -130°C in een mechanische diepvriezer. Het vriesmedium CM-ACF maakt cryopreservatie van cellen bij temperaturen onder -130°C (of in vloeibare stikstof) mogelijk, waardoor er in wezen geen extra, dure ultralage vriezer nodig is en tijdrovende en veeleisende vriesprocessen met gecontroleerde snelheid niet meer nodig zijn. Verzamel de cellen, zuig het groeimedium af, resuspendeer in CM-ACF, breng ze over in een cryoflacon en bewaar de flacon bij temperaturen onder -130 °C.
Lange houdbaarheid
CM-ACF is een serumvrij, gebruiksklaar cryoconserveringsmedium dat tot een jaar in de koelkast kan worden bewaard.
Vertrouwd door honderden onderzoekers
Ons geavanceerde, serumvrije celvriesmedium CM-ACF is een marktleider in Duitsland en Europa en onderscheidt zich door talloze publicaties met honderden verschillende cellijnen wereldwijd. We hebben het getest met meer dan 1000 cellijnen uit onze eigen celbank.
Geoptimaliseerde serumvrije ingrediënten
CM-ACF bevat geen serumproducten. Serumbevattende cryoconserveringsmediums hebben het nadeel van fluctuerende recovery rates en een onduidelijke samenstelling. Aangezien de samenstelling en concentratie van eiwitten en andere biologische componenten in serum varieert van batch tot batch, kan de reproduceerbaarheid van experimenten met cellen die werden ingevroren in een serumbevattend medium in het gedrang komen. Aangezien elk bestanddeel van CM-ACF zorgvuldig gedefinieerd is, kun je er zeker van zijn dat cellen altijd op identieke wijze herstellen.
Bevat DMSO, glucose, zouten
Buffercapaciteit pH = 7,2 tot 7,6
Universeel
- zelfs voor stamcelpreservatie
Alle gangbare cellijnen kunnen worden ingevroren en ontdooid om veel levensvatbare cellen op te leveren. Vergeleken met standaardmedia is de mate van herstel van zelfs de meest kwetsbare cellen aanzienlijk hoger. Met CM-ACF bewaren we meer dan 1000 verschillende cellijnen met uitstekend succes.
Toepassingen en validatie
De cellen die bewaard worden in ons CM-ACF vriesmedium kunnen gebruikt worden voor celtelling, levensvatbaarheid en cryopreservatie, celkweek, zoogdiercelcultuur, genexpressieanalyse en genotypering, in vitro transcriptie en polymerasekettingreacties. De werkzaamheid van elke batch wordt geëvalueerd met CHO-K1-cellen. Elke batch wordt getest op pH, osmolaliteit, steriliteit en endotoxinen om een hoge kwaliteit te garanderen.
Dit EMEM-medium bestaat uit 2 mM L-glutamine, 1,5 g/L NaHCO3, EBSS, 1 mM natriumpyruvaat en NEAA.
Wat zit er in EMEM?
EMEM is een aangepaste versie van Eagle's minimaal essentiële medium en bevat Earle's Balanced Salt Solution, niet-essentiële aminozuren, L-glutamine, natriumpyruvaat en natriumbicarbonaat. Het is belangrijk om te weten dat dit verlaagde gehalte aan natriumbicarbonaat (NaHCO3, 1,5 g/L) bedoeld is voor gebruik bij 5% CO2 in de lucht. Om de effectiviteit te behouden, wordt aanbevolen om het medium in het donker te bewaren bij 2 °C tot 8 °C als het niet wordt gebruikt.
Waar wordt EMEM voor gebruikt?
Eagle's minimaal essentieel medium (EMEM) is een celkweekmedium dat cellen in weefselkweek kan onderhouden. Het medium bevat hogere concentraties aminozuren, waardoor de eiwitsamenstelling van gekweekte zoogdiercellen nauwkeuriger kan worden benaderd. EMEM kan worden gebruikt om verschillende cellen te kweken, waaronder fibroblasten, menselijke leverkankercellijn (HepG2) cellen en menselijke foetale hersenprogenitor-afgeleide astrocytcellen (PDA). Het wordt meestal gebruikt in aanwezigheid van foetaal runderserum (FBS), kalfs
- of paardensera.
Waarin verschilt EMEM van andere celkweekmedia?
Hoewel EMEM en Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) enkele overeenkomsten hebben, verschillen ze ook. Beide media hebben geen eiwitten en bevatten de aminozuren, zouten, glucose en vitaminen die nodig zijn om een cel van energie te voorzien en in stand te houden in de weefselkweek. De DMEM-formulering is echter aangepast om tot vier keer meer vitaminen en aminozuren en twee tot vier keer meer glucose te bevatten dan EMEM. Het is vermeldenswaard dat EMEM ook verschilt van de originele MEM formulering.
Kwaliteitscontrole
pH = 7,2 +/
- 0,02 bij 20-25°C.
Elke partij is getest op steriliteit en afwezigheid van mycoplasma en bacteriën.
Onderhoud
Gekoeld bewaren bij +2°C tot +8°C in het donker. Invriezen en opwarmen tot +37°C minimaliseren de kwaliteit van het product.
Verwarm het medium niet tot meer dan 37° C en gebruik geen oncontroleerbare warmtebronnen (bijv. magnetronapparatuur).
Als slechts een deel van het medium wordt gebruikt, haal dan deze hoeveelheid uit de fles en warm het op bij kamertemperatuur.
Houdbaarheid voor elk medium, behalve het basismedium, is 8 weken vanaf de productiedatum.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Calciumchloride x 2H2O
264,92
Magnesiumsulfaat
97,67
Kaliumchloride
400,00
Natriumchloride
6,800.00
Natriumdiwaterstoffosfaat x H2O
140,00
Andere componenten
D(+)-Glucose
1,000.00
Fenol rood
10,00
Natriumpyruvaat
110,00
NaHCO3
1,500.00
Aminozuren
L-Alanine
8,90
L-Arginine x HCl
126,00
L-Asparagine x H2O
13,20
L-Asparaginezuur
13,30
L-Cystine
24,00
L-Glutamine
292,30
L-Glutaminezuur
14,70
Glycine
7,50
L-Histidine x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucine
52,00
L-Leucine
52,00
L-Lysine x HCl
72,50
L-Methionine
15,00
L-Fenylalanine
32,00
L-Proline
11,50
L-Serine
10,50
L-Threonine
48,00
L-Tryptofaan
10,00
L-Tyrosine
36,00
L-Valine
46,00
Vitaminen
D-Calcium pantothenaat
1,00
Choline chloride
1,00
Foliumzuur
1,00
myo-Inositol
2,00
Nicotinamide
1,00
Pyridoxal x HCl
1,00
Riboflavine
0,10
Thiamine x HCl
1,00
- een zacht alternatief voor trypsine
Accutase is een oplossing voor celdissociatie die een revolutie teweegbrengt in de celkweekindustrie. Het is een mix van proteolytische en collagenolytische enzymen die de werking van trypsine en collagenase nabootst. In tegenstelling tot trypsine bevat Accutase geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is het veel zachter voor cellen, waardoor het een ideale oplossing is voor het routinematig losmaken van cellen van standaard weefselkweekplastiek en plastic met adhesiecoating. In deze blogpost verkennen we de voordelen en toepassingen van Accutase en hoe het de celkweekwereld verandert.
Voordelen van Accutase
Accutase heeft verschillende voordelen ten opzichte van traditionele trypsineoplossingen. Ten eerste kan het worden gebruikt wanneer zachte en efficiënte onthechting van een aanhangende cellijn nodig is, waardoor het een directe vervanging is voor trypsine. Ten tweede werkt Accutase uitstekend op embryonale en neuronale stamcellen en is aangetoond dat het de levensvatbaarheid van deze cellen behoudt na passage. Ten derde behoudt Accutase de meeste epitopen voor daaropvolgende flowcytometrie-analyse, waardoor het ideaal is voor celoppervlakmarkeranalyse.
Bovendien hoeft Accutase niet te worden geneutraliseerd wanneer adherente cellen worden gepasseerd. De toevoeging van meer media nadat de cellen zijn gesplitst, verdunt Accutase zodat het niet langer in staat is om cellen los te maken. Hierdoor is er geen inactiveringsstap nodig en besparen celkweektechnici tijd. Tot slot hoeft Accutase niet te worden gealiquoteerd en is een flesje 2 maanden stabiel in de koelkast.
Toepassingen van Accutase
Accutase is een directe vervanging voor trypsine-oplossing en kan worden gebruikt voor het passeren van cellijnen. Daarnaast presteert Accutase goed bij het losmaken van cellen voor de analyse van veel celoppervlakmarkers met flowcytometrie en voor celsortering. Andere downstreamtoepassingen van de behandeling met Accutase zijn analyse van celoppervlakmarkers, virusgroeitests, celproliferatie, migratie van tumorcellen, routinematige celpassage, opschalen van de productie (bioreactor) en flowcytometrie.
Samenstelling van Accutase
Accutase bevat geen zoogdier
- of bacteriële componenten en is een natuurlijk enzymmengsel met proteolytische en collagenolytische enzymactiviteit. Het is geformuleerd in een veel lagere concentratie dan trypsine en collagenase, waardoor het minder giftig en zachter is, maar net zo effectief.
Werkzaamheid van Accutase
Het is aangetoond dat Accutase efficiënt is in het losmaken van primaire en stamcellen en een hoge levensvatbaarheid van de cellen behoudt in vergelijking met enzymen van dierlijke oorsprong zoals trypsine. 100% van de cellen is na 10 minuten hersteld en het kan geen kwaad om cellen tot 45 minuten in Accutase te laten, dankzij de autodigestie van Accutase.
Samengevat
Samengevat is Accutase een krachtige oplossing die het spel in de celkweek verandert. Met zijn zachte aard, efficiëntie en veelzijdigheid is Accutase het ideale alternatief voor trypsine. Als u op zoek bent naar een betrouwbare en efficiënte oplossing voor het losmaken van cellen, dan is Accutase de oplossing voor u.
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) is een veelzijdige bufferoplossing die wordt gebruikt in veel biologische en chemische toepassingen en bij weefselverwerking. Onze PBS-oplossing is geformuleerd met ingrediënten van hoge kwaliteit om een constante pH te garanderen tijdens experimenten. De osmolariteit en ionenconcentraties van onze PBS-oplossing zijn afgestemd op die van het menselijk lichaam, waardoor het isotoon is en niet giftig voor de meeste cellen.
Samenstelling van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is een op pH aangepast mengsel van ultrazuivere fosfaatbuffers en zoutoplossingen. Bij een 1X werkconcentratie bevat het 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 en 2 mM KH2PO4. We hebben deze samenstelling gekozen op basis van CSHL protocollen en Molecular cloning by Sambrook, wat gevestigde standaarden zijn in de onderzoeksgemeenschap.
Toepassingen van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing is ideaal voor een breed scala aan toepassingen in biologisch onderzoek. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het perfect voor het verdunnen van stoffen en het spoelen van celcontainers. Onze PBS-oplossing met EDTA kan ook gebruikt worden om vastzittende en samengeklonterde cellen los te maken. Het is echter belangrijk op te merken dat tweewaardige metalen zoals zink niet aan PBS kunnen worden toegevoegd, omdat dit tot precipitatie kan leiden. In dergelijke gevallen worden Good's buffers aanbevolen. Bovendien is aangetoond dat onze PBS-oplossing een aanvaardbaar alternatief is voor virale transportmedia voor het transport en de opslag van RNA-virussen, zoals SARS-CoV-2.
Opslag van onze PBS-oplossing
Onze PBS-oplossing kan worden bewaard bij kamertemperatuur, waardoor het gemakkelijk te gebruiken en te gebruiken is.
Samengevat
Samengevat is onze PBS-oplossing een essentieel onderdeel van veel biologische en chemische experimenten. De isotone en niet-toxische eigenschappen maken het geschikt voor talloze toepassingen, van celkweek tot virale transportmedium. Door te kiezen voor onze PBS-oplossing van hoge kwaliteit kunnen onderzoekers hun experimenten optimaliseren en nauwkeurige en betrouwbare resultaten garanderen.
Samenstelling
Bestanddelen
mg/L
Anorganische zouten
Kaliumchloride
200,00
Kaliumdiwaterstoffosfaat
200,00
Natriumchloride
8,000.00
natriumwaterstoffosfaat watervrij
1,150.00