SiHa šūnas — jauns skatījums uz dzemdes kakla vēža pētījumiem
SiHa šūnas ir dzemdes kakla vēža šūnas, kuras plaši izmanto biomedicīniskajos pētījumos. Tās ir lieliski transfekcijas saimnieki un tādējādi piemērotas gēnu ekspresijas pētījumiem. Ņemot vērā to cilvēcisko izcelsmi un saistību ar dzemdes kakla vēzi, šīs šūnas galvenokārt izmanto vēža bioloģijas, viroloģijas un zāļu izstrādes pētījumos.
- Augšanas barotne
- SiHa šūnu ideālai augšanai izmanto Eagle minimālo nepieciešamo barotni (EMEM), kas satur 10 % FBS, 2 mM L-glutamīnu, 2,2 g/l NaHCO3 un Earle līdzsvaroto sāļu šķīdumu (EBSS). Barotni nomaina 2–3 reizes nedēļā.
- Dubultošanās laiks
- SiHa šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 17 stundas.
- Augšanas veids
- SiHa ir adhezīva šūnu līnija.
- Bioloģiskās drošības līmenis
- BSL-1
- Piegādātājs
- Cytion — Pasūtīt SiHa
SiHa šūnu vispārējās īpašības un izcelsme
Šajā raksta sadaļā uzzināsiet par SiHa šūnu līnijas izcelsmi, raksturīgajām īpašībām un daudz ko citu: Kas ir SiHa vēža šūnu līnija? Kādas ir SiHa šūnas saistībā ar HPV? Kāda ir SiHa šūnu līnijas izcelsme? Kāda ir SiHa morfoloģija?
- SiHa, dzemdes kakla karcinomas šūnu līnija, tika iegūta no primārās dzemdes biopsijas fragmentiem, kas ņemti 55 gadus vecai Āzijas izcelsmes sievietei ar plakanšūnu vēzi [1].
- SiHa šūnu līnijai ir hipertriploīds kariotips. Lielākajai daļai šūnu vidējais hromosomu skaits ir no 69 līdz 72. Tomēr aptuveni 24 % šūnu modālais hromosomu skaits ir 71.
- SiHa šūnas ir cilvēka papilomas vīrusa 16. tipa pozitīvas. Tās uzrāda apmēram 1–2 HPV genoma kopiju integrāciju katrā šūnā [2].
- Šīm dzemdes kakla vēža šūnām ir epitēlija morfoloģija.
SiHa šūnu līnija: Informācija par kultivēšanu
Šūnu līnijas kultivēšana nav viegla, kamēr nav zināmi visi tās kultivēšanas galvenie aspekti. Jums jāzina: kāds ir SiHa šūnu dubultošanās laiks? Kas ir SiHa šūnu barotne? Kā kultivēt SiHa šūnu līniju?
Galvenie aspekti SiHa šūnu kultivēšanā
Dubultošanās laiks:
SiHa šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 17 stundas.
Adherenta vai suspensijā:
SiHa ir adhezīva šūnu līnija.
Subkultivācijas attiecība:
SiHa šūnu subkultivācijas attiecība ir no 1:2 līdz 1:4. Pārsēšanai adhezīvās šūnas noskalo ar 1x PBS. Pievieno Accutase šķīdumu, un šūnas inkubē 8–10 minūtes istabas temperatūrā. Pēc tam pievieno kultivācijas barotni un šūnas centrifugē. Šūnu nogulsnes atkārtoti suspendē un šūnas pārlej jaunā kolbā turpmākai kultivācijai.
Augšanas barotne:
SiHa šūnu ideālai augšanai izmanto Eagle minimālo nepieciešamo barotni (EMEM), kas satur 10 % FBS, 2 mM L-glutamīnu, 2,2 g/l NaHCO3 un Earle līdzsvaroto sāļu šķīdumu (EBSS). Barotni nomaina 2–3 reizes nedēļā.
Augšanas apstākļi:
SiHa šūnas tiek uzturētas 37 °C mitrinātā inkubatorā ar 5 % CO₂ pievadi.
Uzglabāšana:
Sasaldētās SiHa dzemdes kakla vēža šūnu līnijas flakoni tiek uzglabāti temperatūrā zem -150 °C elektriskajā saldētavā vai ilgākam laikam šķidrā slāpekļa tvaika fāzē.
Sasaldēšanas process un barotne:
SiHa šūnu sasaldēšanai izmanto CM-1 vai CM-ACF sasaldēšanas vidi. Šūnas sasaldē, izmantojot lēnas sasaldēšanas metodi, kas ļauj temperatūrai pazemināties tikai par 1 °C minūtē, lai saglabātu šūnu dzīvotspēju.
Atkausēšanas process:
Sasaldētās šūnas 40–60 sekundes tur 37 °C ūdens vannā, līdz paliek neliels ledus gabaliņš. Pēc tam pievieno svaigu augšanas vidi un šūnas centrifugē, lai atdalītu sasaldēšanas vides sastāvdaļas. Šūnu nogulsnes atkārtoti suspendē un šūnas pārnes kultūras kolbā turpmākai audzēšanai.
Bioloģiskās drošības līmenis:
SiHa šūnu kultūru apstrādei un uzturēšanai ir nepieciešama 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorija.
SiHa šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi
Tāpat kā citām cilvēka karcinomas šūnu līnijām, arī SiHa piemīt dažas raksturīgas īpašības, kas saistītas ar noteiktām priekšrocībām un trūkumiem. Šeit mēs esam apsprieduši dažas nozīmīgākās no tām.
SiHa dzemdes kakla vēža šūnu līnijas priekšrocības
- Dzemdes kakla vēža modelis
- Iegūta no dzemdes kakla plakanšūnu karcinomas.
- Tiek izmantota, lai pētītu dzemdes kakla vēža mehānismus, augšanu un attīstību.
- Ekspresē gēnus p53+ un pRB+, kas ir saistīti ar DNS reparāciju, šūnu cikla regulāciju un audzēju supresiju.
- Tumorogēnais potenciāls
- SiHa šūnas ir audzējveidojošas un var izraisīt vāji diferencētus III pakāpes epidermoīdus audzējus kailajām pelēm.
- Izmanto vēža pētījumiem in vivo un pretvēža terapiju testēšanai.
SiHa šūnu trūkumi
- Proliferācijas ātrums
- SiHa šūnas strauji vairojas, kas izraisa pārmērīgu augšanu.
- Nepieciešama bieža pasāžēšana, kas palielina ģenētiskās nestabilitātes risku, kas laika gaitā var ietekmēt šūnu uzvedību.
SiHa šūnu izmantošana pētniecībā
SiHa šūnu līnija tiek plaši izmantota dzemdes kakla vēža pētījumos. Šeit tiek aprakstīti daži konkrēti šīs šūnu līnijas pielietojumi.
- Pētījumi saistībā ar cilvēka papilomas vīrusu (HPV): SiHa šūnas ir HPV 16 pozitīvas, tādēļ tās ir vērtīgs materiāls cilvēka papilomas vīrusa infekcijas, tās molekulāro mehānismu un tās lomas dzemdes kakla vēža attīstībā un progresēšanā izpētei. Pētnieki šīs šūnas izmanto arī, lai pētītu vīrusa replikāciju, integrāciju un tās ietekmi uz saimniekšūnu procesiem. 2020. gadā veiktajā pētījumā, izmantojot SiHa šūnu līniju, tika pētīta HPV E6/E7 onkoproteīnu loma dzemdes kakla vēža attīstībā, tos mērķtiecīgi ietekmējot ar CRISPR tehnoloģiju. Rezultāti liecināja, ka E6/E7 gēnu ekspresijas nomākšana izraisīja SiHa šūnu augšanas inhibīciju un apoptozi. Tādējādi šie vīrusu gēni var kalpot kā būtiski zāļu mērķi terapiju izstrādē pret HPV saistītu dzemdes kakla vēzi [3].
- Vēža bioloģija: SiHa šūnas kalpo kā nenovērtējams modelis dzemdes kakla vēža bioloģijas pētīšanai, tostarp vēža attīstībai, progresēšanai, metastāzēm un invāzijai. Pētnieki izmanto šīs šūnas, lai izpētītu ģenētiskās mutācijas un pamatā esošos molekulāros ceļus, kas veicina dzemdes kakla vēža attīstību un augšanu; piemēram, vienā pētījumā, izmantojot SiHa šūnas, tika atklāts, ka paaugstināta SEC61G (SEC61 translokona gamma apakšvienība) ekspresija veicina dzemdes kakla vēža šūnu proliferāciju, aktivizējot MAPK kaskādi [4].
- Zāļu skrīningu un testēšanu: SiHa ir plaši izmantota dzemdes kakla vēža šūnu līnija, lai novērtētu potenciālo pretvēža zāļu efektivitāti, kas ir specifiskas HPV saistītam dzemdes kakla vēzim. Pētnieki, izmantojot šīs šūnas, pēta zāļu antiproliferatīvo, apoptozes veicinošo un pretmetastāžu potenciālu. Piemēram, 2019. gadā veiktajā pētījumā tika izpētīts Vatica diospyroides Symington Type SS augļu ekstraktu citotoksiskais potenciāls uz SiHa dzemdes kakla vēža šūnu līniju [5].
SiHa šūnas jūsu pētījumiem!
Zinātniskie raksti, kuros aprakstītas SiHa šūnas
Dažas nozīmīgas un bieži citētas pētniecības publikācijas veltītas SiHa dzemdes kakla plakanšūnu karcinomas šūnu līnijai.
Šajā publikācijā žurnālā „OncoTargets and Therapy” (2019) tika izvirzīts pieņēmums, ka dabīgais savienojums aloe-emodīns izraisa ar HPV E6/E7 un glikozes vielmaiņu saistītu apoptozes efektu SiHa dzemdes kakla vēža šūnās.
Šis raksts tika publicēts žurnālā „Future Journal of Pharmaceutical Sciences” 2022. gadā. Šajā pētījumā tika izpētīta Excoecaria agallocha (L.) auga lapu ekstrakta pretvēža aktivitāte SiHa dzemdes kakla vēža šūnu līnijā.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā „Journal of Sol-Gel Science and Technology” (2022), tika izvirzīts pieņēmums, ka 1,10-fenantrolīna molekula, savienojoties ar cinka sulfāta nanodaļiņām, izraisa ievērojamu antiproliferatīvu iedarbību SiHa šūnās.
Šis pētījums tika publicēts žurnālā „Oncology Reports“ 2019. gadā. Pētījumā tika atklāts, ka dabīgais produkts astragalosīds IV nomāc SiHa šūnu migrāciju un invāziju, modulējot TGF‑β1 mediētos PI3K un MAPK signālceļus.
Šis pētījums, kas publicēts žurnālā „Biomedicine & Pharmacotherapy“ (2020), atklāja, ka IFI16 (interferona-gamma induciblais proteīns 16) regulē PD-L1 gēnu, aktivizējot STING-TBK1-NF-kB ceļu, tādējādi veicinot SiHa dzemdes kakla vēža šūnu augšanu.
Resursi par SiHa šūnu līniju: protokoli, videomateriāli un citi resursi
Šeit ir daži tiešsaistes resursi, kas veltīti SiHa šūnām.
- SiHa šūnu transfekcija: Šajā pētniecības rakstā ir iekļauts protokols par SiHa dzemdes kakla vēža šūnu uzturēšanu un SiHa šūnu transfekciju.
Šajā saitē ir informācija par SiHa šūnu kultivēšanu.
- SiHa šūnu līnija: Šajā tīmekļa vietnē ir daudz vērtīgu datu par SiHa šūnu līniju. Tajā ir iekļauta informācija par augšanas barotnēm, kultivēšanas apstākļiem, SiHa šūnu subkultivēšanas protokoliem, kā arī par to, kā rīkoties ar šūnu proliferatīvajām un kriokonservētajām kultūrām.
Bieži uzdotie jautājumi par SiHa dzemdes kakla vēža šūnām
Atsauces
- Melzer, C., J. von der Ohe un R. Hass, „Īss pārskats: mezenhālās stromas/cilmes šūnu līdzīgo šūnu mijiedarbība ar vēža šūnām piedāvā terapeitisko potenciālu”. Stem cells, 2018. 36(7): 951.–968. lpp.
- Ostrowska, K.M. u.c., Pētījums par augsta riska cilvēka papilomas vīrusa ietekmi uz dzemdes kakla vēža šūnu bioķīmisko sastāvu, izmantojot vibrācijas spektroskopiju. Analyst, 2010. 135(12): 3087.–3093. lpp.
- Chen, Y., et al., Cilvēka dzemdes kakla vēža šūnu augšanas inhibīcija in vitro un in vivo, izmantojot cilvēka papilomas vīrusa E6/E7 mRNS sadalīšanu ar CRISPR/Cas13a sistēmu. Antiviral Research, 2020. 178: 104794. lpp.
- Fan, Y., et al., SEC61G veicina dzemdes kakla vēža šūnu proliferāciju, aktivizējot MAPK signālceļu. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A., et al., Vatica diospyroides symington tipa SS augļu ekstraktu pretvēža potenciāls un to ietekme uz dzemdes kakla vēža šūnu līniju programmēto šūnu nāvi. The Scientific World Journal, 2019. 2019.