KC šūnas
Vispārīga informācija
| Apraksts | KC (Kc167) ir Drosophila melanogaster embriju šūnu līnija, kas iegūta no mātītes embrija dorsālās slēgšanās stadijā un reģistrēta Cellosaurus datu bāzē ar nosaukumu CVCL_Z833. Šī līnija sākotnēji tika izveidota un ir plaši izmantota Drosophila šūnu bioloģijā, ģenētiskajos skrīningos un funkcionālajā genomikā. Kc167 šūnas ir imortalizētas ar SV40 un aug daļēji adhezīvi, veidojot jauktu populāciju no piestiprinātām un brīvi peldošām šūnām. Tās ir vienas no vislabāk raksturotajām Drosophila šūnu līnijām un ir pilnībā piemērotas RNSi-mediētai gēnu klusināšanai, tādējādi padarot tās par pamata modeli genomam plašiem RNSi skrīningiem bezmugurkaulnieku bioloģijā. KC šūnas ir piemērotas Drosophila šūnu bioloģijā, genomā plaša mēroga RNAi un CRISPR skrīningos, signālu pārneses ceļu pētījumos (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB), iedzimtas imunitātes pētījumos un evolūcijas gaitā saglabājušos ceļu salīdzinošajos pētījumos. Pilnībā sekvencētais un anotētais Drosophila genoms, apvienots ar plašām publiski pieejamām RNAi reaģentu datu bāzēm (piem., DRSC/TRiP), padara KC šūnas īpaši efektīvas objektīviem funkcionālās genomikas atklājumiem. Sakarā ar SV40 imortalizāciju tām piemēro BSL-2 klasifikāciju. KC šūnas tiek kultivētas Schneider’s Drosophila barotnē, kam pievienots 2 mM glutamīns un 10 % FBS. Būtiski, ka Drosophila šūnu līnijas tiek kultivētas 25 °C temperatūrā gaisā bez CO₂ (nevis 37 °C / 5 % CO₂, kā tas ir zīdītāju šūnu gadījumā). Šūnas pārstāda, tās maigi atkārtoti suspendējot un atšķaidot (daļēji adhezīva augšana). Barotni nomaina vai šūnas atšķaida ik pēc 2–3 dienām. |
|---|---|
| Organisms | Drosophila melanogaster (augļu muša) |
| Audu | Embrijs |
| Slimība | Parasts |
| Metastāzes vieta | Embrijs (mugurējās slēgšanās stadija) |
| Pieteikumi | Drosophila šūnu bioloģija; genomiska mēroga RNAi skrīningi; CRISPR skrīningi; signālu pārnese (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB); iedzimta imunitāte; bezmugurkaulnieku funkcionālā genomika |
| Sinonīmi | KC, K C |
Raksturojums
| Vecums | Mugurējās slēgšanās posms |
|---|---|
| Dzimums | Sievietes |
| Morfoloģija | Daļēji piekļāvušs, epitēlijam līdzīgs |
| Šūnas tips | Embrionālās šūnas |
| Augšanas īpašības | daļēji piekļaujošs |
Normatīvie dati
| Citāts | KC (Cytion kataloga numurs 300604) |
|---|---|
| Bioloģiskās drošības līmenis | 2 |
| NCBI_TaxID | 7227 |
| CellosaurusAccession | CVCL_Z833 |
| ĢMO statuss | GMO-S2: Šī Drosophila šūnu līnija satur stabili integrētu SV40 imortalizācijas kaseti. Nepieciešama BSL-2 drošības pakāpes ievērošana. Šī klasifikācija attiecas tikai uz Vāciju un citās valstīs var atšķirties. |
Biomolekulārie dati
| Jutība pret vīrusiem | SV40 ir iegūstis nemirstību |
|---|
Darbs ar
| Kultūras barotne | Šneidera Drosophila barotne + 2 mM glutamīns + 10 % teļa embriju serums (FBS). |
|---|---|
| Papildinājumi | Papildiniet barotni ar 2 mM glutamīnu un 10 % FBS |
| Disociācijas reaģents | Nav nepieciešams (daļēji pielipis; viegli atkārtoti suspendējiet) |
| Dubultošanās laiks | aptuveni 24 līdz 48 stundas |
| Subkultivēšana | Ar pipeti uzmanīgi pārlej kultūru, lai atkal suspendētu daļēji piekļāvušās šūnas. Pārlejiet atbilstošu tilpumu jaunā kolbā un pievienojiet svaigu, iepriekš uzsildītu Šneidera barotni. Atšķaidiet līdz blīvumam 5 × 10⁵ līdz 1 × 10⁶ šūnu/ml. Inkubējiet 25 °C temperatūrā gaisā bez CO₂. |
| Sadalījuma attiecība | no 1 līdz 3 |
| Sēšanas blīvums | no 5 × 10⁵ līdz 1 × 10⁶ šūnu/ml |
| Šķidruma atjaunošana | Ik pēc 2 līdz 3 dienām |
| Vidēja sasaldēšanas pakāpe | Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu. |
| Šūnu atkausēšana un kultivēšana |
|
| Inkubācijas atmosfēra | 25 °C, apkārtējā gaisa temperatūra (CO₂ nav nepieciešams). |
| Nosūtīšanas nosacījumi | Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu. |
| Uzglabāšanas apstākļi | Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli. |
Kvalitātes kontrole un molekulārā analīze
Materiālu nodošanas līgums
Ja plānojat izmantot Cytion šūnu līnijas tikai iekšējiem pētījumiem vienā pētniecības vietā, lūdzu, aizpildiet un parakstiet mūsu Materiālu nodošanas līgumu (MTA) un iesniedziet to kopā ar savu pasūtījumu.
Jebkādiem komerciāliem mērķiem, tostarp, bet ne tikai, maksas pakalpojumiem, kvalitātes kontroles testēšanai, produktu laišanai tirgū, diagnostikai vai regulatīviem pētījumiem, lūdzu, aizpildiet paredzētās izmantošanas veidlapu, lai mēs varētu sagatavot jūsu projektam piemērotu līgumu.
Lūdzu, ņemiet vērā: MTA attiecas tikai uz noteiktām šūnu līnijām. Ja šis paziņojums un MTA dokuments ir redzams produkta lapā, līgums ir piemērojams. Šūnu līnijām, uz kurām neattiecas MTA, atsauce uz līgumu netiks parādīta. MTA nav spēkā klientiem Amerikas kontinentā, Ķīnā vai Taivānā. Lūdzu, sazinieties ar mūsu ASV pārstāvniecību, lai saņemtu atbilstošo līgumu.