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HepG2 세포 - 간암 연구 자원

Hep-G2는 간세포암을 앓고 있던 15세 백인 남성의 간 조직에서 유래한 인간 간암 세포주입니다. 이 세포는 약물 대사 및 간독성 연구에 자주 활용됩니다. HepG2 세포는 증식 속도가 빠르고 상피세포와 유사한 외관을 가지고 있지만, 종양 형성 능력이 없으며 다양한 분화된 간 기능을 수행합니다. 1975년 연구자들은 간세포암종에서 HepG2 세포를 분화시켜, 간세포의 핵심적 특성을 나타내는 최초의 간 세포주로서 확립했습니다. 필수적인 간세포 표지자가 결여된 기존 SK-Hep1 세포주와 달리, HepG2 세포는 다양한 혈장 단백질을 분비할 수 있으며, 인간 간세포의 세포 표면 영역 내 세포 내 역학을 연구하는 데 유용한 모델을 제공합니다. 이 세포들은 상피세포와 유사한 형태를 보이며, 모달 염색체 수는 55개이고, 인간 성장 호르몬에 의해 자극받을 수 있습니다.

📋 HepG2 세포주 — 주요 정보
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증식 유형
부착형
생물안전 등급
BSL-1

남성의 간에 발생한 악성 종양을 묘사한 3D 렌더링 의료 애니메이션.

HepG2의 특징

1차 간세포의 전형적인 형태는 입방형이며, 대개 두 개의 핵을 가지고 있습니다. 반면, HepG2 세포는 상피세포와 유사한 형태를 띠며, 하나의 핵을 가지고 있고 세포당 염색체 수는 48~54개입니다. HepG2 세포는 전체 세포 단백질의 최대 25%를 차지할 수 있지만, 크기는 정상 간세포보다 커서 세포 내 전체 단백질의 약 10%를 차지합니다. 세포 단백질은 세포 내에서 유전자가 지정한 기능을 수행하는 핵심적인 역할을 합니다.

염색체 수가 비정상적인 세포를 포함한 종양 세포는 종종 세포당 최대 7개에 달하는 핵 수의 증가를 나타냅니다. 체외에서 높은 분화도를 보이는 HepG2 세포는 인간 간세포 내 담관 소관, 사인소이드 막 단백질 및 지질의 세포 내 수송과 역학을 연구하는 데 이상적인 모델을 제공합니다.

HepG2 세포의 평균 직경은 약 10-20 µm로, 직경 15 µm인 간세포보다는 작지만 10-20 µm 범위의 간모세포종(HB) 종양 세포와 유사합니다.

HepG2 유전학

Hep-G2 세포주는 염색체 1번과 21번의 짧은 팔 사이의 전좌, 염색체 2, 16, 17번의 삼염색체증, 염색체 20번의 사염색체증 등 여러 전좌를 나타냅니다. 또한 간모세포종(HB)에서 흔히 관찰되는 전좌 t(1;4) 및 2번과 20번 염색체 삼염색체증과 같은 기타 염색체 이상과 관련된 4번 염색체 q3 영역의 결손도 관찰됩니다. HepG2 세포의 염색체 수는 50~60개로, 과이배체 핵형을 나타내지만, 일부 사례에서는 100개 이상의 염색체를 나타내며 4배체 비대로 특징지어집니다. HepG2 세포는 약 7.5 pg의 DNA를 포함하고 있으며, 이는 평균적인 체세포보다 15% 더 많은 양이다. 이에 비해, 1차 간세포는 입방형 세포 모양을 띠며 일반적으로 두 개의 핵을 포함한다 [1].

HepG2 세포의 돌연변이 프로파일

HepG2 세포주는 간세포암종(HCC) 및 간모세포종(HB)에서도 발견되는 TERT 프로모터 영역의 C228T 돌연변이를 가지고 있습니다. 이 돌연변이는 암세포의 텔로미어를 보호함으로써 불멸화에 기여합니다. 또한, HepG2 세포는 세포 주기 정지, 세포 사멸 및 노화에 관여하여 인간 암을 억제하는 데 중요한 역할을 하는 야생형 TP53 유전자를 나타냅니다. 이 유전자의 돌연변이는 세포 증식을 촉진할 수 있습니다.

HepG2 세포는 세포 성장의 조절 이상, 태아 및 배아 HB와 같은 생존 경로, Wnt/β-catenin 경로를 포함한 여러 경로에 관여합니다. 또한, 이 세포주는 상피형 간세포암에서 관찰되는 것과 동일한 CTNNB1 유전자의 제3 엑손 결실을 특징으로 한다 [2,3].

HepG2 cells at high and low confluence

20배 및 10배 배율로 관찰한 섬 구조 내에서 증식 중인 HepG2 세포.

간 연구에서 HepG2 간세포암 세포주의 개요

인간 간암에서 유래한 HepG2 세포는 간세포암을 포함한 간 기능 및 질환 연구에 있어 매우 귀중한 도구로 자리 잡았습니다. 이 간 세포주는 다양한 실험 조건 하에서 인간 간세포의 세포 반응에 대한 통찰력을 제공합니다. HepG2 세포에서 루시페라제 리포터 플라스미드를 사용하는 것은 유전자 발현 및 세포 내 형질 도입을 추적하는 데 특히 효과적이며, 이는 에탄올이 간세포에 미치는 영향 연구와 같은 대사 연구의 기초가 됩니다.

HepG2 세포를 이용한 바이러스 감염 및 간 질환 연구

HepG2 및 Huh7과 같은 불멸화된 간 종양 세포주는 바이러스 감염 연구에 필수적이며, B형 간염 바이러스(HBV)의 발현과 D형 간염 바이러스(HDV)의 완전한 세포주기 복제를 입증합니다 [5,6]. 이와 함께, HepaRG 세포주는 HBV 침입 메커니즘을 규명하는 데 중요한 역할을 합니다 [7]. HepG2 세포는 또한 진행성 가족성 간내 담즙 정체증(PFIC) 및 두빈-존슨 증후군과 같은 유전적 질환부터 세포 독성 및 유전 독성 물질과 관련된 환경 및 식이 연구, 약물 표적화 및 간암 발병 연구에 이르기까지 다양한 인간 간 질환을 조사하는 데에도 사용됩니다 [8,9]. 이 세포의 사용은 생체 인공 간 장치에 대한 임상 시험으로까지 확대되고 있습니다.

조직 공학에서 HepG2 세포와 생체 재료의 상호 작용

HepG2 세포와 다양한 생체 재료 간의 상호 작용은 조직 공학에서 매우 중요합니다. 콜로이드 프로브 기법과 같은 기술은 세포 접착 특성을 측정하여 이러한 상호 작용을 이해하는 데 도움이 되며, 이는 스캐폴드 및 정확한 간 조직 모델 개발을 위한 세포 생존력을 결정하는 데 필수적입니다.

HepG2 기반 모델에서의 세포 행동 및 혁신

HepG2 기반 모델에서 세포 행동을 연구하는 것은 간 질환 연구에 매우 중요합니다. 3차원 구형 세포 배양 기술의 발전으로 HepG2 세포 구형체가 만들어졌으며, 이는 정상 간세포를 매우 유사하게 반영하는 생리학적으로 더 관련성 높은 모델을 제공합니다. 대사 활동이 증가한 이러한 3D 모델은 HepG2 세포가 간모세포종 모델로 활용될 수 있는 잠재력을 보여주며, 특히 간 종양 시뮬레이션 및 새로운 치료법 시험을 위한 암 치료 연구에서 중요한 의미를 갖습니다 [10-12].

다른 종양 세포주와 비교한 HepG2의 특징

HepG2는 가장 널리 사용되는 간 종양 세포주 중 하나로, 약 40여 종의 기존 간 종양 세포주 중에서 과학 연구에 폭넓게 활용될 수 있다는 점 때문에 선정되었습니다 [13]. 정상 간세포에 비해 특정 시토크롬 P450 효소의 발현이 약하거나 없는 spite에도 불구하고, HepG2의 대사 프로파일은 더 나은 약물 대사 연구를 위해 이 세포주를 변형하려는 노력을 이끌어 왔습니다 [13]. MCF7, PC3, 143B 및 HEK293과 같은 종양 세포주와 비교할 때, HepG2 세포는 단백질 합성 및 분비에 상당한 영향을 미치는 독특한 아미노산 함량 프로파일을 나타내며, 이는 이 세포주의 독특한 대사 경로를 강조합니다 [14].

HepG2를 활용한 간 질환 연구 탐구

HepG2 세포의 재배양

Accutase를 사용하여 세포 배양 플라스크에서 부착 세포를 제거하는 5단계는 다음과 같습니다:

  1. 세포 배양 플라스크에서 배지를 제거하고, 칼슘과 마그네슘이 포함되지 않은 PBS를 사용하여 부착 세포를 씻어냅니다. T25 플라스크에는 3~5ml, T75 플라스크에는 5~10ml의 PBS를 사용합니다.
  2. 세포 배양 플라스크에 Accutase를 첨가합니다. T25 플라스크당 1~2ml, T75 플라스크당 2.5ml를 사용합니다. Accutase가 세포층 전체를 덮도록 합니다.
  3. 플라스크를 실온에서 8~10분간 배양합니다.
  4. 10ml의 신선한 배지를 사용하여 세포를 조심스럽게 재현탁시킵니다.
  5. 재현탁된 세포를 300xg에서 5분간 원심 분리하고, 신선한 배지에 재현탁한 후 신선한 배지가 들어 있는 새로운 플라스크에 분주합니다.

HepG2 세포의 미래 전망

시토크롬 발현을 증가시키는 획기적인 진전과 함께 HepG2 세포주의 잠재력을 최대한 끌어내려는 노력은 계속되고 있습니다. 연구자들은 또한 생리학적으로 더 관련성이 높은 시스템을 제공하는 3차원 구형 세포 배양의 가능성도 탐구하고 있습니다. 시토크롬을 포함한 대사 활성은 2차원 세포보다 3차원 구형 HepG2 모델에서 현저히 높아, 정상 간세포를 반영하는 모델 구축에 한 걸음 더 가까워졌습니다. 또한, 세포 표면 단백질의 비정상적인 분포에 기인하는 역동적 과정을 규명하는 것은 간 질환에 대한 더 깊은 이해로 이어질 수 있습니다.

HepG2 세포: 생의학 연구에서의 역할과 특징 이해 - 자주 묻는 질문

예, HepG2는 간세포암종(HCC)에서 유래한 암 세포주입니다. 간암, 간 기능, 약물 및 독소의 대사를 연구하는 연구에 일반적으로 사용됩니다
HepG2와 Hep3B는 모두 간세포암 세포주이지만 서로 다른 개체에서 유래했으며 유전적 배경이 뚜렷합니다. Hep3B 세포는 B형 간염 양성이고 기능적인 p53 유전자가 없는 반면, HepG2 세포는 온전한 p53 유전자를 가지고 있어 p53 매개 세포 반응을 연구하는 데 유용하다는 점이 특징입니다
HepG2 세포는 인간 간암종에서 유래한 것으로 주로 간 기능 및 질병과 관련된 연구에 사용됩니다. 반면 HEK293 세포는 인간 배아 신장 세포에서 유래한 것으로, 높은 감염성으로 인해 유전자 발현 및 바이러스 복제 연구를 비롯한 다양한 생물학적 연구에 자주 사용됩니다
HepG2 세포는 무한한 성장 잠재력을 가진 불멸의 암세포로 실험실에서 배양 및 유지가 용이합니다. 원발성 간세포는 간 조직에서 직접 분리한 비암성 간세포로, 수명이 유한하며 기능 및 유전자 발현 측면에서 생체 내 간 환경과 더 유사합니다. 그러나 원발성 간세포는 배양 시 간 특유의 기능을 빠르게 잃을 수 있습니다
HepG2 세포는 약물을 대사할 수 있지만 일반적으로 일차 간세포에 비해 낮은 수준입니다. 이는 HepG2 세포가 사이토크롬 P450 효소와 같은 주요 약물 대사 효소의 발현이 낮고 가변적이기 때문입니다
예, HepG2 세포는 암 연구, 특히 간세포암종에 초점을 맞춘 연구에서 널리 사용됩니다. 이 세포는 암 생물학, 약물 내성, 잠재적인 항암 화합물의 효능을 조사하는 모델을 제공합니다
HepG2 세포는 특정 간염 바이러스에 감염되기 쉬우므로 바이러스 수명 주기, 숙주-바이러스 상호작용, 항바이러스 약물 테스트, 특히 B형 및 D형 간염의 맥락에서 유용한 도구가 될 수 있습니다
HepG2 세포는 다양한 물질의 세포독성 및 유전독성을 평가하기 위해 독성학 연구에 자주 사용됩니다. 독성 물질에 대한 세포의 반응은 간 독성과 간 손상의 근본적인 메커니즘에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다
HepG2 세포는 다양한 응용 분야에 유용하지만, 원발성 간세포에서 발견되는 일부 간 특이적 기능과 효소 활동이 부족하다는 한계가 있습니다. 또한 암 세포주로서 정상 간 세포의 생리를 완전히 복제하지 못할 수도 있습니다
예, HepG2 세포를 배양하여 3차원(3D) 스페로이드를 형성할 수 있습니다. 이러한 3D 배양은 생체 내 종양 환경을 더 잘 모방하여 세포 행동, 약물 효능 및 암 진행을 연구하는 데 더 생리적으로 관련성이 높은 모델을 제공합니다

참고문헌

  1. Vyas, R.C., Darroudi, F., Natarajan, A.T. 인간 림프구의 간기-중기 염색체에서 방사선 유발 염색체 파열 및 재결합, Mutat Res, 1991; 249(1):29-35.
  2. Woodfield, S.E., Shi, Y., Patel, R.H., Chen, Z., Shah, A.P., Srivastava, R.K., Whitlock, R.S., Ibarra, A.M., Larson, S.R., 사라비아, S.F., 외. MDM4 억제: 간모세포종에서 p53을 재활성화하기 위한 새로운 치료 전략. Sci. Rep. 2021, 11, 2967.
  3. Hussain, S.P., Schwank, J., Staib, F., Wang, X.W., Harris, C.C. TP53 돌연변이와 간세포암: 간암의 병인 및 발병 기전에 대한 통찰. Oncogene 2004.
  4. Schicht, G., Seidemann, L., Haensel, R., Seehofer, D., Damm, G. 절제 가능한 간세포암의 대사적 표현을 위한 모델로서 간암 세포주 HepG2 및 Huh7의 유용성에 대한 비판적 고찰. Cancers 2022, 14(17), 4227.
  5. Verrier, E.R., Colpitts, C.C., Schuster, C., Zeisel, M.B., Baumert, T.F. B형 및 D형 간염 바이러스 감염 연구를 위한 세포 배양 모델. Viruses 2016, 8, 261.
  6. Verrier, E.R., Colpitts, C.C., Bach, C., Heydmann, L., Weiss, A., Renaud, M., Durand, S.C., Habersetzer, F., Durantel, D., AbouJaoudé, G., 외. 표적 기능성 RNA 간섭 스크리닝을 통해 B형 및 D형 간염 바이러스의 침입 인자로 글리피칸 5를 규명. Hepatology 2016, 63, 35–48.
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  14. Arbus, C., Benyamina, A., Llorca, P.-M., Baylé, F., Bromet, N., Massiere, F., Garay, R.P., Hameg, A. 시아메마진 대사에 관여하는 인간 시토크롬 P450 효소의 특성 분석. Eur J Pharm Sci. 2007년 12월;32(4-5):357-66.

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