Sf9細胞
一般情報
| 説明 | Sf9細胞は、Spodoptera frugiperda Sf21細胞株(IPLB-Sf-21-AE)に由来するクローン分離株である。昆虫細胞培養では、バキュロウイルス発現系を用いた組換えタンパク質の生産によく用いられる。Sf9細胞は上皮性形態で、秋蚕の蛹卵巣組織からクローニングされた。 Sf9細胞の主な特徴の一つは、単層やプラークの形成に理想的な、小さく規則的なサイズである。また、トランスフェクション、プラークアッセイ/精製、高力価ストックの増幅、組換えタンパク質の発現にも適している。Sf9昆虫細胞株は、付着培養および浮遊培養で維持することができ、増殖に血清やCO2を必要としない。 バイオセーフティーレベル1とみなされ、通常26~28度のインキュベーターで培養される。Sf9細胞/バキュロウイルス発現系は、高水準のタンパク質発現に広く使用されており、多くの場合精製のために使用されるが、タンパク質は定義されたSf9細胞環境で機能的に発現されることもある。感染したSf9細胞の大きさは、一般的に直径17-30ミクロンである。 Sf9細胞株とSf21細胞株は、Sf21細胞がより不規則な単層やプラークを形成するのに対し、Sf9細胞株はより小さく規則的な大きさのクローン分離株であるという点で異なっている。 一部のSf9細胞株は、SfRV(Spodoptera frugiperda rhabdovirus)と呼ばれるネガティブセンスのラブドウイルスを保有している可能性があるが、検査したすべてのSf9細胞がこのウイルスに感染しているわけではないようである。Sf9のゲノムサイズは451 Mbp、G+C含量は36.53%と推定されている。 |
|---|---|
| 生物 | 秋の夜盗虫 |
| 組織 | 卵巣 |
| アプリケーション | トランスフェクション、プラークアッセイ/精製、高力価ストックの増幅、組換えタンパク質の発現 |
| 同義語 | SF9、sf9、SF-9、Sf-9、sf-9、Sf 9、Spodoptera frugiperdaクローン9、Sfクローン9、IPLB-Sf-9AE、IPLB-SF-9AE、IPLB-SF-9、IPLB-Sf-9、IPLB-Sf9 |
特徴
| 年齢 | 蛹化期 |
|---|---|
| 性別 | 女性 |
| 形態学 | 円形、付着、上皮 |
| 成長特性 | 単分子膜、付着性 |
規制データ
| 引用 | Sf9 (Cytion カタログ番号 604328) |
|---|---|
| バイオセーフティレベル | 1 |
| NCBI_TaxID | 7108 |
| セロサウルス・アクセション | CVCL_0549 |
生体分子データ
| ウイルス感受性 | バキュロウイルス、Autographa californica(MNPV)、セントルイス脳炎(SLE) |
|---|
ハンドリング
| 培地 | スポドパン(PANバイオテック) |
|---|---|
| サプリメント | 必要であれば、増殖を促進するために培地に2%FBSを添加する。 |
| 解離試薬 | アキュターゼ |
| サブカルチャー | セルスクレーパーによる細胞の剥離を推奨する。剥離した細胞の入った培地を15ml遠心チューブに集める。フラスコに培地を5mlほど加え、数回すすいで残った細胞を集め、チューブ内の残りの細胞と合わせる。300xgで3分間遠心し、上清を取り除き、細胞を新鮮な冷培地に懸濁し、新しいフラスコに分注する。 |
| 播種密度 | 1 x 10^4 cells/cm^2。インキュベーターで26~30℃の間で培養する。フィルターキャップ付きの細胞培養フラスコを使用するか、酸素交換ができるようにキャップを緩める。 |
| フルード更新 | 週2~3回 |
| フリーズ・ミディアム | 凍結保存培地としては、融解後の生存率を十分に保つために完全増殖培地(FBSを含む)+10%DMSO、または回復を促進し凍結によるストレスを軽減するために最適化された浸透保護剤と代謝安定剤を含むCM-1(Cytionカタログ番号800100)を使用する。 |
| 細胞の解凍と培養 |
|
| インキュベーションの雰囲気 | 27°C, 0% CO2, humidified atmosphere. |
| 配送条件 | Cryopreserved cell lines are shipped on dry ice in validated, insulated packaging with sufficient refrigerant to maintain approximately −78 °C throughout transit. On receipt, inspect the container immediately and transfer vials without delay to appropriate storage. |
| 保管条件 | For long-term preservation, place vials in vapor-phase liquid nitrogen at about −150 to −196 °C. Storage at −80 °C is acceptable only as a short interim step before transfer to liquid nitrogen. |
品質管理/遺伝子プロファイル/HLA
| 不妊症 | マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。 細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査を受けている。 |
|---|
資材譲渡契約
サイシオンの細胞株を単一の研究施設における内部研究のみに使用される場合は、Material Transfer Agreement(MTA)にご記入・ご署名の上、ご注文と一緒にご提出ください。
商業目的(有償サービス、品質管理試験、製品リリース、診断用途、規制当局による研究など)の場合は、お客様のプロジェクトに合わせた適切な契約書を作成いたしますので、使用目的フォームにご記入ください。
ご注意:MTAは特定の細胞株のみに適用されます。本通知とMTA文書が製品ページに記載されている場合、本契約が適用されます。MTAが適用されない細胞株については、契約書への言及は表示されません。MTAは南北アメリカ、中国、台湾のお客様には適用されません。適切な契約書を入手するには、米国法人にお問い合わせください。
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必要な製品
必要な製品
凍結培地 CM-1 - 50 ml凍結保存培地のバリエーション: 50ミリリットルCytion's Freeze Medium CM-1 は、融解後の細胞の生存率と機能性を最高レベルに保つように設計された最先端の凍結保存培地です。この汎用性の高い培地は、ヒトおよび動物細胞を含む幅広い種類の細胞に適しており、多様な研究用途に不可欠なツールとなっています。凍結保護剤と必須栄養素を絶妙なバランスで配合したFreeze Medium CM-1は、凍結過程における氷結晶形成と細胞ストレスを最小限に抑え、細胞の完全性を維持します。
Freeze Medium CM-1の主な特徴は以下の通り:
幅広い適合性:プライマリー細胞、幹細胞、樹立細胞株など、幅広い種類の細胞に有効。
高い生存率融解後の細胞の回復と生存率を最大化するように最適化されており、信頼性の高い実験結果を保証する。
すぐに使えるすぐに使用できるように調製・滅菌されているため、調製時間とコンタミネーションのリスクが軽減される。
安定性の向上:標準的な凍結保存条件下で一貫した性能を維持し、再現性のある結果を保証します。
長い保存期間:CM-1は血清を含む、すぐに使用可能な凍結保存培地で、冷蔵庫で最長1年間保存可能です。
細胞の凍結にCM-1を使用する
接着細胞および浮遊細胞の凍結にCM-1を使用するには、以下の手順に従う:
接着細胞の場合は、洗浄して培養基材から剥離する。浮遊細胞の場合は、そのまま次のステップに進む。
細胞を数え、適切な濃度であることを確認する。
細胞を遠心してペレット化し、CM-1凍結培地に再懸濁する。
再懸濁した細胞をクライオバイアルに移す。
細胞を長期保存に移す前に、緩慢凍結法を用いる。
方法
手順
手順
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マニュアル凍結
段階的に温度を下げ、細胞の生存性を確保する方法。
1️⃣ 細胞を凍結培地中、4℃のフリーザーに40分間置く。
2️ ⃣ -80℃のフリーザーに24時間移す。
3️ ⃣ 長期保存のため、細胞を液体窒素で保存する。
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Mr.Frostyの使用
電力を使わずに凍結速度を制御できる便利な装置。
1️ ⃣ 細胞を凍結培地を入れたクライオバイアルに準備する。
2️ ⃣ Mr.Frosty容器にクライオバイアルを入れる。
3️⃣ 液体窒素に移す前に、-80℃で24時間保存する。
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コントロールレートフリーザー
サーモ・フィッシャー社などの高精度フリーザーで、温度を 制御して下げるように設計されている。
1️ ⃣ 徐々に温度が下がるように装置をプログラムする。
2️ ⃣ 準備した細胞をフリーザーに入れる。
3️ ⃣ 凍結サイクル終了後、細胞を液体窒素に移す。
クライオバイアルは-130℃以下で保存するか、長期保存のために液体窒素中で保存する。
成分
FBS、DMSO、グルコース、塩類を含む。
緩衝能:pH=7.2~7.6
Cytion's Freeze Medium CM-1 は、凍結保存のための信頼性の高いソリューションを提供し、幅広い研究用途において解凍後の高い細胞生存率と機能性を保証します。€59.00*Accutase 細胞剥離液 - 100 mlバリエーション: 100ミリリットルEDTAおよびフェノールレッド配合 Accutase 細胞剥離液 – 100 ml
Accutaseは、標準的な組織培養用プラスチック器具や接着コーティングされた表面から接着性哺乳類細胞を分離するために、トリプシン/EDTAに代わる穏やかな代替品として設計された、即用型の無菌ろ過済み細胞剥離液です。バランスのとれた塩溶液中にタンパク質分解酵素およびコラーゲン分解酵素の活性を組み合わせることで、効果的かつ制御された細胞分離を実現し、細胞表面タンパク質を保持するとともに、継代後の高い生存率と迅速な再付着をサポートします。
Accutaseの配合は、EDTAおよびpHの可視指標としてフェノールレッドを加えたダルベッコリン酸緩衝生理食塩水(DPBS)を基にしています。 酵素は非哺乳類および非細菌由来であるため、Accutaseは幹細胞研究、ワクチン開発ワークフロー、および動物由来または微生物由来の汚染物質を最小限に抑える必要があるあらゆる用途に特に適しています。本溶液は37°Cで自己阻害するため、剥離後に中和試薬や血清含有培地を必要とせず、細胞を新鮮な培地に直接移すことができます。
主な特徴
希釈や再構成が不要な、すぐに使用可能な1倍希釈の滅菌ろ過済み液
穏やかな解離を実現する、タンパク質分解酵素とコラーゲン分解酵素の複合活性
ロット間の均一性を確保するため、各バッチの解離活性は規定値に標準化されています
非哺乳類および非細菌由来の酵素
37 °Cで自己阻害するため、中和溶液は不要
EDTAを含むダルベッコPBSで調製
視覚的pH指示薬としてフェノールレッドを含有
pH 6.8~7.8
代表的な用途
Accutase は、ヒト胚性幹細胞 (hESC)、ヒト誘導多能性幹細胞 (iPSC)、神経幹細胞、初代神経細胞、および HeLa、HEK 293、CHO、MDCK、Vero、NIH/3T3、BHK-21、A549 などの日常的に培養される接着性細胞株など、多種多様な接着性および感受性の高い細胞を穏やかに解離します。 代表的な用途には以下が含まれます:
接着性哺乳類細胞の日常的な継代およびパッシング
hESC、iPS細胞、およびその他の感受性の高い細胞株の穏やかな単一細胞分離
フローサイトメトリーおよびFACS解析のためのサンプル調製
エピトープの完全性が重要な細胞表面マーカーの解析
細胞遊走、増殖、アポトーシスアッセイ
血清飢餓法による静止期アッセイおよび癌遺伝子導入研究
腫瘍細胞および神経堤細胞の遊走アッセイ
バイオリアクターワークフローにおける生産スケールアップ
日常的な作業では、培養表面75 cm²あたり約10 mlのAccutaseを添加し、室温で5~10分間インキュベートします。最適なインキュベーション時間は各細胞株ごとに決定する必要があり、1時間を超えてはいけません。添加前に、残留血清および二価陽イオンを除去するため、カルシウムおよびマグネシウムを含まないDPBSなどのCa²⁺/Mg²⁺フリー塩溶液で細胞層を洗浄してください。
取り扱いおよび保存
未開封のボトルは、-15 °C以下で凍結保存してください。解凍は室温、または+2 °C~+8 °Cで一晩かけて行ってください。高温は酵素活性を低下させるため、37 °Cの水浴でAccutaseを解凍しないでください。解凍後、溶液は+2 °C~+8 °Cで最長2ヶ月間保存可能です。室温での保存は避けてください。 使用前に試薬を37 °Cまで予温しないでください。室温で洗浄済みの細胞に直接添加してください。長期保存のためには、繰り返しの解凍サイクルを避けるため、単回使用分への分注が推奨されます。常に無菌条件下で作業してください。
品質
厳格な品質基準に基づいて製造されています。Accutaseの各バッチは、無菌ろ過され、無菌性、pH、外観、および解離活性について試験されており、ロット間の性能の一貫性と再現性が確保されています。
製品仕様
仕様
詳細
製品タイプ細胞剥離/解離試薬
形態滅菌ろ過済み液体、即用型
容量100 ml
使用濃度1x(即用型)
酵素活性タンパク質分解およびコラーゲン分解の複合作用
酵素の由来非哺乳類および非細菌由来
緩衝液系EDTA含有ダルベッコPBS
pH指示薬フェノールレッド
pH範囲6.8 – 7.8
外観透明、淡紅色~橙色の溶液
保存温度-15 °C以下
解凍後の安定性+2 °C~+8 °Cで最大2ヶ月
推奨使用量培養面積75 cm²あたり約10 ml
標準的な培養時間室温で5~10分
輸送条件ドライアイスで凍結
使用目的研究用および製造用のみ
製剤(1リットルあたりの組成)
成分
濃度 (mg/L)
無機塩
塩化ナトリウム(NaCl)8000.00
リン酸水素二ナトリウム (Na2HPO4)1150.00
塩化カリウム (KCl)200.00
リン酸二水素カリウム (KH₂PO₄)200.00
その他の成分
EDTA・4Na(テトラナトリウムEDTA)220.00
フェノールレッド3.00
独自配合酵素ブレンド(タンパク質分解活性およびコラーゲン分解活性)1x
AccutaseはInnovative Cell Technologies, Inc.の登録商標です。€75.00*抗生物質/抗真菌剤溶液(100倍)製品概要
容量:100ml 保存:15℃以下 無菌:無菌ろ過
抗生物質/抗真菌剤溶液(100x)は、細胞培養および関連するラボアプリケーションにおける微生物汚染リスクを低減するために設計された、無菌ですぐに使用できる濃縮液です。この100倍希釈液は、ペニシリン、ストレプトマイシン、アムホテリシンBの定評ある配合で、グラム陽性菌、グラム陰性菌、酵母、糸状菌に対して幅広い抗菌活性を示します。この製剤は、真核細胞培養、細菌培地、およびその他の汚染に敏感なシステムでの使用に適しており、クリーンで一貫性のあるラボ業務をサポートします。
用途と利点 日常的な研究プロトコール用に最適化されたこのソリューションは、細胞培養ワークフローにおける無菌状態の維持に広く使用されています。汚染に敏感な環境で信頼性の高い性能を発揮し、細胞の健康状態や実験の再現性を損なうことなく、微生物の過剰増殖のリスクを低減します。無菌ろ過製剤は、追加の可溶化工程を必要とせず、合理的な培地調製をサポートし、日常的なラボ手順のばらつきを低減します。
使用法と適合性 標準作業濃度を達成するには、溶液を100分の1に希釈し、完全培地に添加します。本製品は、広範な哺乳類細胞株および基礎培地に適合します。安定した在庫により、研究者は信頼できる供給継続性と簡素化されたロジスティクス計画の恩恵を受けることができます。安定性を維持するため、溶液は-15℃以下で保存し、凍結融解の繰り返しから保護してください。 研究用のみ。診断や治療には使用できません。ヒトおよび動物には使用できません。€45.00*PBSリン酸緩衝生理食塩水(PBS)溶液
リン酸緩衝生理食塩水(PBS)は、生物学および化学の研究において広く使用されている緩衝液である。組織処理や細胞培養を含む様々な実験手順において、pHバランスと浸透圧の維持に重要な役割を果たしています。当社のPBS溶液は、あらゆる実験において安定性と信頼性を確保するために、高純度成分を用いて細心の注意を払って調合されています。当社のPBSの浸透圧とイオン濃度は、人体の浸透圧に近いため、ほとんどの細胞に対して等張で無毒です。
PBS溶液の組成
当社のPBS溶液は、超高純度グレードのリン酸緩衝液と生理食塩水をpH調整したものです。1倍濃度で、以下を含む:
8000 mg/L 塩化ナトリウム(NaCl)
200 mg/L 塩化カリウム(KCl)
1150 mg/L 二塩基性無水リン酸ナトリウム (Na2HPO4)
200 mg/L 無水リン酸一塩基性カリウム (KH2PO4)
この組成により、最適なpHとイオンバランスが確保され、幅広い生物学的用途に適しています。
PBS溶液の用途
当社のPBS溶液は、生物学研究における様々な用途に最適です。等張で無毒性であるため、物質の希釈や細胞容器の洗浄に適しています。EDTAを含むPBS溶液は、付着・凝集した細胞の剥離に効果的です。しかし、亜鉛のような二価の金属は沈殿の原因となるため、PBSに添加すべきではない。このような場合は、Good's緩衝液を推奨する。さらに、当社のPBS溶液は、SARS-CoV-2を含むRNAウイルスの輸送および保存のためのウイルス輸送培地の代替品として許容される。
品質管理
無菌ろ過
保管および保存期間
遮光し、+2℃~+25℃で保存する。
開封後は2℃~25℃で保存し、24ヶ月以内に使用してください。
出荷条件
周囲温度
メンテナンス
冷蔵で+2℃~+8℃の暗所に保管する。製品の品質を低下させるため、凍結や+37℃への頻繁な加温は避けてください。
培地を37℃以上に加熱したり、電子レンジのような制御されていない熱源を使用しないでください。
培地の一部のみを使用する場合は、必要な量を取り出し、室温まで温めてから使用してください。
組成
カテゴリー
成分
濃度(mg/L)
塩類
塩化カリウム
200
無水リン酸一塩基性カリウム
200
塩化ナトリウム
8000
無水リン酸二塩基性ナトリウム
1150€20.00*