B16-F10細胞 - 転移研究におけるB16-F10メラノーマ細胞株の探索
B16-F10細胞はC57BL/6Jマウスから誘導されたメラノーマ細胞株である。皮膚癌研究に広く用いられている。研究者はこれらの細胞を用いて腫瘍の発生と進行、治療介入を研究している。本稿では、B16-F10メラノーマ細胞の基本的な側面について述べる。特に以下の内容を含む：
- B16-F10細胞株の起源と一般的特徴
- B16-F10細胞の培養に関する情報
- B16-F10細胞：利点と欠点
- B16-F10細胞の研究応用
- B16-F10細胞株を特集した出版物
- B16-F10細胞株のリソース：プロトコール、ビデオ、その他
1.B16-F10細胞株の起源と一般的特徴
このセクションでは、B16F10黒色腫腫瘍細胞の起源と特徴的な特性についての洞察を提供します。研究においてこの細胞株を効率的に使用するのに役立ちます。主な内容は以下の通りです：B16-F10細胞とは何か？B16F10は何に由来するのか？B16F12細胞株の形態とは？B16F10細胞の大きさは？
- B16-F10は、C57BL/6Jマウスの皮膚組織由来のB16腫瘍細胞株のサブクローンである。ここで、B16F10メラノーマ細胞は、B16株を免疫不全マウスまたはシンジェニックマウスに静脈注射した後に開発された。これらの細胞は、in vivoで転移肺コロニーを形成する可能性があるかどうかで選択され、in vitroで肺コロニー形成を10サイクル行った後に樹立された[1]。1976年にFidlerらによって開発された。
- B16-F10細胞株は上皮様で紡錘形の外観を持つ。
- B16-F10細胞のおおよその大きさは15.4±1.4μmである [2]。
B16-F1とB16-F10細胞
B16-F1とB16-F10細胞はB16親細胞株から派生した。B16-F1とB16-F10細胞は、B16の親細胞株から派生した。しかし、主な違いはその転移能である。B16-F10細胞は転移能が高いのに対し、B16-F1は低い[3]。
2.B16-F10細胞の培養情報
細胞株を取り扱い、培養する前に、その倍加時間、増殖培地、条件、細胞培養プロトコールについて知っておく必要があります。このセクションではB16-F10細胞の倍加時間は？B16F10細胞の培養方法は？B16-F10細胞の培地はどのようなものですか？B16-F10細胞に推奨される培養条件は？
B16-F10細胞の培養のポイント
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倍加時間： |
B16-F10細胞の倍加時間は約20.1時間です。培養条件により17～21時間の幅があります。 |
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接着または懸濁： |
B16-F10は接着性の細胞株である。細胞増殖が速く、単層を形成する。 |
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分割比率： |
B16-F10細胞は1:2～1:4の分割比率で継代培養する。細胞をリン酸緩衝生理食塩水（1x）で洗浄した後、Accutase継代液とともに周囲温度で8～10分間インキュベートする。細胞を新鮮培地で添加し、遠心する。回収した細胞ペレットを再度懸濁し、分割比に従って細胞を新しい培地の入った新しいフラスコに分配する。 |
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増殖培地： |
B16-F10細胞はDMEM培地で培養する。培地は理想的な細胞増殖のため、10% FBS、4 mM L-グルタミン、1.5 g/L NaHCO3、4.5 g/L グルコース、1.0 mM ピルビン酸ナトリウムを添加する。培地は週に2～3回交換する。 |
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増殖条件 |
B16-F10細胞は、37℃、5% CO2供給、加湿インキュベーター内で増殖させる。 |
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保存： |
凍結細胞は、細胞の生存率を維持するため、電気式超低温フリーザーまたは液体窒素の気相中で-150℃以下に保存する。 |
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凍結プロセスと培地 |
B16-F10細胞は、CM-1またはCM-ACF培地で凍結保存される。その際、細胞がショックを受けないように、1分間に1℃しか温度が下がらないような緩慢な凍結プロセスを推奨する。 |
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解凍プロセス： |
凍結したB16-F10細胞を、あらかじめ設定した37℃のウォーターバスで40～60秒間解凍する。次に、細胞を新鮮培地に加え、遠心して凍結培地成分を除去する。回収した細胞を増殖培地に再懸濁し、培養用フラスコに流し込む。 |
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バイオセーフティレベル |
B16-F10細胞株の取り扱いおよび維持には、バイオセーフティーレベル1の実験室が必要である。 |
3.B16-F10細胞：利点と欠点
他の細胞株と同様に、B16-F10にもいくつかの長所と短所がある。このセクションでは、この皮膚メラノーマ細胞株の重要な長所と短所について述べる。
長所
B16-F10細胞株は癌研究に広く用いられている。B16-F10細胞の長所は以下の通りである：
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転移能 |
皮膚メラノーマB16F10細胞は高い転移能を示し、がんの転移およびその基礎となるメカニズムの研究に有用である。 |
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In vitro腫瘍モデル |
B16-F10細胞は、がんの進行と増殖を研究するためのin vitroモデルとして機能し、研究者ががんを促進する細胞および分子メカニズムを理解するのに役立つ。 |
欠点
B16-F10細胞株に関する欠点は以下の通りである：
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マウス由来の細胞株 |
B16-F10はマウス由来の細胞株であるため、ヒトに特異的な研究への適用が制限される。これらの細胞から得られた研究結果は、必ずしもヒトの生物学に真に反映されるとは限らない。 |
4.B16-F10細胞の研究応用
B16-F10細胞株は癌研究に広く用いられている。この細胞株の有望な応用例をいくつかここで述べる。
- 癌研究： B16-F10細胞株は、増殖、浸潤、遊走、細胞死またはアポトーシスを含むがん細胞のプロセスを研究するための貴重なモデルである。その上、研究者がこれらの細胞プロセスを駆動する分子メカニズムや経路に関する洞察を得るのにも役立つ。2018年に行われた研究では、メラノーマ細胞の上皮細胞から間葉細胞への移行と転移におけるCCR5（C-C chemokine receptor type five）の役割が探求された。その結果、CCR5の欠損は腫瘍の増殖と転移を抑制する一方、高発現はB16-F10細胞の増殖と転移の亢進につながることが明らかになった。更なる研究では、CCR5がTGFβ1の発現を制御し、それがPI3K/ACT/GSK3βシグナルを制御して、上皮から間葉への移行と細胞移動を促進することが報告された [4] 。
- 薬剤の試験と開発 B16F10黒色腫腫瘍細胞は非常に攻撃的であるため、抗腫瘍薬や治療法の可能性を検証するのに適している。研究者たちはこれらの細胞を用い、細胞の成長、増殖、転移に対するさまざまな化合物の効果を評価し、薬剤開発に役立てている。2018年にValentina Nanniらによって実施された研究では、Spartium junceum 花のヒドロアルコール抽出物の治療効果を調査した。この研究では、花エキスはB16-F10細胞の老化を誘導するのに有効であり、細胞増殖とメラニン生成抑制につながることから、潜在的な抗がん作用を発揮できることが提案された[5]。
5.B16-F10細胞株を用いた研究発表
B16-F10メラノーマ細胞株を取り上げた重要な研究論文をご紹介します：
B16/F10メラノーマ細胞におけるIBMX誘発メラニン生成に対するソルガムきびのエタノール抽出物の抗メラニン生成効果
この研究はNutrients (2020)に掲載された。この研究では、ソルガムきびのエタノール抽出物が皮膚メラノーマB16F10細胞において抗メラノ生成効果を有することが提唱された。
カルシトリオールがB16-F10細胞の増殖を抑制し、アポトーシスを誘導する可能性
Medical Science Monitor Basic Research（2022年）に掲載された研究では、カルシトリオール薬がB16-F10メラノーマ細胞において、増殖を抑制しアポトーシスを誘導することにより抗腫瘍効果を発揮することが提唱された。
マウスB16-F10メラノーマ細胞に対する細胞毒性活性には、カルドールのプロオキシダント作用が関与している
この論文はBiochemical and Biophysical Research Communications（2022年）に掲載された。その結果、レゾルシノール脂質であるカルドールは、B16-F10細胞株に対して強い細胞毒性を発揮することが明らかになった。
イチョウ葉外皮エキスは、PI3K/akt/NF-κB/MMP-9シグナル経路が関与するB16-F10メラノーマの転移を阻害する
Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine（2018年）に掲載された研究では、B16-F10細胞を用いてイチョウ葉外果皮エキスの抗転移能を探索した。
チモキノンは、p-STAT3の阻害を介してB16-F10メラノーマ細胞にアポトーシスを誘導し、マウス脳内メラノーマの腫瘍増殖を抑制する...
World Neurosurgery（2018）に掲載されたこの研究は、チモキノンがB16-F10細胞の増殖を抑制し、アポトーシスを誘導することから、脳内転移病変に対する有効な治療法となり得ることを提唱した。
6.B16-F10細胞株のリソース：プロトコル、ビデオ、その他
B16F10内皮細胞は皮膚がん研究に広く用いられている。ここでは、その培養とトランスフェクションのプロトコールについて説明したオンラインリソースをいくつか紹介する：
- B16F10メラノーマ細胞のトランスフェクション：このビデオチュートリアルは、B16-F10細胞のトランスフェクション・プロトコルを学ぶのに役立ちます。
- B16-F10トランスフェクション：この文書では、皮膚メラノーマB16F10細胞のin vitro DNAトランスフェクション・プロトコルを説明します。
以下のリンクにB16-F10細胞の細胞培養プロトコールが掲載されています：
- B16-F10亜培養：このウェブサイトには、B16F10メラノーマ腫瘍細胞に関する有用な情報が掲載されています。増殖培地、倍加時間、培養条件、細胞を再培養するためのプロトコール、凍結保存培養と増殖培養の取り扱いなどが含まれています。
参考文献
- Poste、G.ら、培養細胞株、皮下腫瘍および個々の肺転移巣から分離したB16黒色腫クローンの転移特性の比較。Cancer Research, 1982.42(7): p. 2770-2778.
- Nakamura, M., D. Ono, and S. Sugita,Mechanophenotyping of B16 Melanoma Cell Variants for the Assessment of the Efficacy of (-)-Epigallocatechin Gallate treatment using a Tapered Microfluidic Device.マイクロマシン, 2019.10(3): p. 207.
- Danciu, C., et al.,Behaviour of four different B16 murine melanoma cell sublines：C57BL/6J皮膚。Int J Exp Pathol, 2015.96(2): p. 73-80.
- Liu, J., et al.,メラノーマにおけるCCR5の高発現は、TGFβ1を介した上皮間葉転換および転移を促進する。病理学雑誌、2019年。247(4): p. 481-493.
- Nanni, V., et al.,Spartium junceum L.の花のヒドロアルコール抽出物は、老化を誘導することによりB16-F10細胞の増殖とメラニン生成を阻害する。Phytomedicine, 2018.46: p. 1-10.