A375細胞株 - 悪性黒色腫研究ガイド

A375は、毒性学および免疫腫瘍学の研究で広く使用されているヒト黒色腫細胞株です。研究者たちは、この細胞株を用いてがんの生物学やシグナル伝達経路の研究、抗がん剤候補の試験やスクリーニング、そして新規かつ効果的な治療法の開発を行っています。

A375細胞の由来と一般的な特性

細胞株の由来や一般的な特徴を知っておくことは、研究での使用計画を立てる上で役立ちます。本記事のこのセクションでは、A375細胞株の由来と特徴について解説します。例えば、A375細胞株とは何でしょうか？A375細胞株の特徴は何でしょうか？A375細胞はどこから由来するのでしょうか？A375メラノーマ細胞の形態はどのようなものでしょうか？A375細胞の大きさはどれくらいでしょうか？

• 皮膚がん細胞株A375は、悪性黒色腫を患う54歳の女性の固形腫瘍の摘出片培養に由来する[1]。
• A375細胞は上皮様形態を有しています。
• A375細胞のサイズは、他の細胞株と比較して比較的小さい。その直径はおよそ12 µmである。
• A375メラノーマ細胞は低三倍体である。この細胞株のモード染色体数は62である。通常、各細胞は9本のマーカー染色体と、正常なN2、N6、N22染色体を各1コピーずつ有している。

A375細胞：細胞培養に関する情報

A375細胞の培養は容易です。特別な培養条件を必要としません。このセクションでは、A375細胞培養に必要な情報を解説します。例えば、A375細胞の倍加時間はどれくらいか、A375細胞株の培養液は何か、A375細胞の播種密度はどれくらいか、A375メラノーマ細胞は接着性か、といった点について説明します。

A375細胞培養の要点

細胞数倍加時間：

A375の倍加時間は20時間です。

接着性か浮遊性か：

A375は接着性のヒトメラノーマ細胞株です。

播種密度：

A375細胞培養には、1 × 10^⁴細胞/cm²の細胞密度が理想的です。接着性細胞は1×リン酸緩衝生理食塩水（PBS）で洗浄し、継代用溶液（Accutase）でインキュベートします。その後、細胞に培養液を加え、遠心分離を行います。回収した細胞を培養液に再懸濁し、増殖のために新しいフラスコに分配します。

増殖培地：

A375細胞の培養には、10% 胎児牛血清（FBS）、4.5 g/L グルコース、1.5 g/L NaHCO3、4 mM L-グルタミン、および1.0 mM ピルビン酸ナトリウムを添加したDMEMが推奨されます。A375培養液は週に2～3回交換する必要があります。

培養条件：

A375メラノーマ細胞は、5% CO₂を供給した加湿インキュベーター（37°C）内で培養する。

保存：

凍結したA375細胞は、液体窒素の気相または電気冷凍庫内で-150°C以下で保存してください。

凍結手順および培地：

A375細胞株の凍結には、CM-1またはCM-ACF培地を使用する。細胞の生存率を維持するため、温度を1°Cずつ徐々に下げる緩慢な凍結法を採用している。

解凍手順：

凍結したA375メラノーマ細胞のバイアルを、水浴中で40～60秒間急速に撹拌し、小さな氷の塊が残る程度まで解凍します。細胞に新鮮な培地を加え、遠心分離して凍結培地の成分を除去します。得られた細胞ペレットを再度懸濁させ、新しいフラスコに移します。

バイオセーフティレベル：

A375培養は、バイオセーフティレベル1の研究室環境で取り扱いおよび維持されます。

A375細胞株の研究用途

A375細胞株は、がん研究において幅広い研究用途があります。以下に、A375細胞が利用される代表的な分野をいくつか紹介します。

• がん研究：A375細胞は、悪性黒色腫（メラノーマ）の研究において広く応用されています。研究者らは、これらの細胞を用いて、皮膚がんの生物学、進行過程、および細胞増殖、移動、浸潤を含む基礎的な細胞シグナル伝達メカニズムを調査してきました。これは、研究者が新たな分子標的治療法を見出す上でも役立つ可能性があります。 2019年にLin Zhuらによって実施された研究では、侵襲性の高い黒色腫細胞株A375を用い、A375黒色腫細胞の増殖および浸潤におけるマイクロRNA-3662の役割が明らかになりました。この研究結果によると、マイクロRNA-3662はZEB1遺伝子を標的とし、A375腫瘍モデルにおいてin vitroおよびin vivoで黒色腫細胞の増殖を調節していることが示されています[2]。 同様に、2018年に実施された研究では、PI3K/AKTおよびMAPK/ERK経路がA375細胞株の増殖と転移に関与していることが明らかになった[3]。
• 創薬および試験：A375細胞株は、潜在的な抗がん剤を試験・スクリーニングするための有用なin vitro腫瘍モデルである。 研究者らは、これらのA375メラノーマ細胞を用いて、新規化学療法薬、化合物、およびその他の治療法の毒性と有効性を評価している。例えば、ある研究では、グレープフルーツ由来のマイクロおよびナノベシクルがA375ヒトメラノーマがん細胞に対して示す抗がん特性が調査された。その結果、マイクロおよびナノベシクルは細胞周期の停止とアポトーシスを誘導し、細胞の増殖、移動、浸潤における遺伝子発現を阻害することが明らかになった[4]。

A375細胞：関連論文

ここでは、A375細胞を取り上げた重要な研究論文をいくつか紹介する。

ビタミンDおよびその低カルシウム血症性アナログは、ヒト黒色腫A375細胞株におけるシスプラチンおよびダカルバジンの抗がん活性を調節する

本研究は2019年に『Journal of Oncology』誌に掲載された。本研究では、ビタミンDおよびそのアナログとの併用療法が、A375メラノーマ細胞におけるシスプラチンおよびダカルバジンの抗がん活性を向上させると提唱した。

特定のアロエ種由来のゲルおよび全葉抽出物の抗黒色腫効果（A375細胞株）に関するin vitro評価

本研究は2022年に『Journal of Herbal Medicine』誌に掲載された。本研究では、A375メラノーマ細胞におけるアロエベラゲルの抗メラノーマ効果について検討した。

フェルミチンファミリーメンバー2は、p-α-PixとRac1の結合を強化してMAPK経路を活性化することにより、メラノーマの進行を促進する

『Oncogene』（2021年）に掲載された本研究は、フェルミチンファミリーメンバー2（FERMT2またはキンドリン-2）が、p-α-PixおよびRac1との結合を通じてMAPKを活性化し、メラノーマの進行を促進すると提唱した。

FARP1は、皮膚メラノーマにおけるMAPKシグナル伝達経路を調節することで細胞増殖を促進する

『The American Journal of Dermatopathology』（2019年）に掲載された本研究は、FARP1が皮膚黒色腫の発症および進行を促進する可能性を提唱した。したがって、FARP1は有用な治療標的となり得る。

ヒト癌細胞株に対するPhyllodium elegans抽出物の細胞毒性およびアポトーシス誘導能

本研究論文は『Bioengineered』（2019年）に掲載された。本研究では、植物Phyllodium elegansの抽出物が、A375を含むヒト癌細胞株に対して示す細胞毒性およびアポトーシス誘導活性を検討した。

A375細胞株に関するリソース：プロトコル、動画など

以下は、A375細胞に関するオンラインリソースの一部です。

• A375細胞のトランスフェクション：この動画チュートリアルでは、A375細胞へのトランスフェクションの手順を段階的に学ぶことができます。
• 細胞培養：この動画には、細胞株の培養に関する非常に有益な情報が含まれています。

A375 細胞の細胞培養プロトコルは、こちらに掲載されています。

• A375細胞株：このリンクには、A375培地や凍結・増殖中のA375培養の取り扱いなど、A375細胞株の培養および維持に関する有用な情報が含まれています。

参考文献

1. Avram, S. ほか, ニワトリ胚の絨毛尿膜膜およびBalb/cヌードマウスにおけるヒト黒色腫A375モデルの標準化. Oncol Rep, 2017. 38(1): p. 89-99.
2. Zhu, L. 他, MicroRNA-3662はZEB1を標的とし、侵襲性の高い黒色腫細胞株A375の浸潤を抑制する. Cancer Manag Res, 2019. 11: p. 5845-5856.
3. Peng, X. 他, Oxyfadichalcone CはPI3K/AktおよびMAPK/ERK経路の抑制を介して、メラノーマA375細胞の増殖と転移を抑制する。Life sciences, 2018. 206: p. 35-44.
4. Stanly, C. 他, グレープフルーツ由来のマイクロおよびナノベシクルは、ヒト黒色腫細胞株A375において、特徴的なメタボロームプロファイルと抗がん活性を示す。Cells, 2020. 9(12): p. 2722.