A375細胞株-メラノーマ研究の手引き

A375は、毒物学および免疫腫瘍学研究で広く使用されているヒトメラノーマ細胞株である。研究者はこの細胞株を用いて、癌の生物学、シグナル伝達経路の研究、潜在的な抗癌剤の試験やスクリーニング、新規で効果的な治療法の開発を行っている。

A375細胞の起源と一般的特徴

細胞株の起源と一般的特徴を知ることは、研究での使用計画を立てるのに役立ちます。このセクションでは、A375細胞株の起源と特徴を取り上げます。例えば、A375細胞株とは何か？A375細胞株の特徴は？A375細胞はどこから来たのか？A375メラノーマ細胞の形態は？A375細胞の大きさはどのくらいですか？

皮膚がん細胞株A375は、悪性黒色腫の54歳女性の固形腫瘍の摘出培養に由来する[1]。
A375細胞は上皮様形態を有する。
A375細胞の大きさは、他の細胞株に比べて比較的小さい。細胞の直径はおよそ12μmである。
A375メラノーマ細胞は低3倍体である。この細胞株の染色体数は62本である。通常、各細胞は9本のマーカー染色体と1コピーの正常N2、N6、N22染色体を持つ。

医師は、成人の皮膚に皮膚がんがないかどうかを検査する。

A375細胞細胞培養情報

A375細胞培養は維持が容易である。A375細胞培養に必要な煩わしさはありません。このセクションでは、必要な細胞培養情報を学ぶのに役立ちます。例えば、A375の倍加時間はどのくらいか。A375細胞株の培地は何ですか？A375の播種密度はどのくらいですか？A375メラノーマ細胞は接着しますか？

A375細胞培養のポイント

細胞集団の倍加時間：	A375の倍加時間は20時間です。
接着か懸濁か：	A375は接着性のヒトメラノーマ細胞株です。
播種密度：	A375 細胞の培養には、1 x¹⁰⁴cells/cm2 の^細胞密度が理想的である。接着細胞を1×リン酸緩衝生理食塩水（PBS）で洗浄し、継代液（Accutase）でインキュベートする。その後、細胞に培地を加え、遠心分離した。回収した細胞は培地に再懸濁し、新しいフラスコに分注して増殖させる。
増殖培地：	10%ウシ胎児血清（FBS）、4.5g/Lグルコース、1.5g/L NaHCO3、4mM L-グルタミン、1.0mMピルビン酸ナトリウムを添加したDMEMが理想的なA375培地として推奨される。A375培地は週に2-3日更新する。
増殖条件：	A375メラノーマ細胞は、5％CO2供給下、加湿インキュベーター（37℃）で培養される。
保存：	凍結したA375細胞は、液体窒素の気相または電気冷凍庫で-150℃以下に保存する。
凍結プロセスと培地	A375細胞株の凍結にはCM-1またはCM-ACF培地を使用する。細胞の生存率を守るため、徐々に1℃ずつ温度を下げる緩慢な凍結プロセスを選択した。
解凍プロセス：	凍結したA375メラノーマ細胞バイアルをウォーターバス中で40～60秒間、小さな氷の塊が残る程度まで急速に撹拌する。細胞を新鮮な培地に加え、遠心分離して凍結培地成分を除去する。得られた細胞ペレットを再度懸濁し、新しいフラスコに流し込む。
バイオセーフティーレベル	A375培養物は、バイオセーフティーレベル1の実験室で取り扱い、維持される。

20倍に拡大した接着A375細胞のコンフルエント層。

A375細胞株の利点と限界

他の細胞株と同様に、A375黒色腫細胞株は長所と短所のユニークな組み合わせを伴っており、黒色腫がん研究の貴重なツールとなっている。本セクションでは、A375細胞株の重要な長所と短所のみを列挙した。

長所

A375細胞の重要な長所を以下に挙げる：

メラノーマ腫瘍モデル：A375細胞株は悪性黒色腫腫瘍に由来するため、黒色腫の生物学と治療介入を研究するための貴重な腫瘍モデルとして機能する。これらの細胞は、高い増殖率や浸潤性など、メラノーマに似た性質を示す。
腫瘍原性：A375細胞は腫瘍形成性が高い。A375細胞は、抗胸腺細胞血清（免疫抑制剤）を投与したNIHスイスマウスにおいて、侵攻性の無色素性黒色腫を産生することが報告されている。
よく特性化されている：A375は遺伝学的によく特性化された細胞株である。メラノーマのような特異的な遺伝子変異を有している。A375の変異にはA375 BRAF遺伝子変異が含まれ、BRAF特異的阻害剤に感受性を示す。このような遺伝子プロファイルにより、A375細胞は基礎となる分子経路や標的治療法を研究するための優れた癌研究ツールとなる。

限界

A375細胞に関連する限界は以下の通りである：

試験管内での限界：A375はin vitro腫瘍モデルである。メラノーマの特徴を模倣しているが、メラノーマ腫瘍の複雑さを完全に表現することはできない。したがって、in vitroで得られた知見を臨床研究に一般化する場合には注意が必要である。

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A375細胞株の研究応用

A375細胞株は、癌研究において広範な研究用途がある。ここでは、A375細胞が利用される一般的な分野のいくつかを紹介する。

がん研究： A375細胞はメラノーマ研究で広く応用されている。研究者はこれらの細胞を用いて、皮膚がんの生物学、プロセス、および細胞増殖、遊走、浸潤を含む基礎となる細胞シグナル伝達機構を調査した。これはまた、研究者が新しい分子治療標的を同定するのにも役立つだろう。Lin Zhu氏らが2019年に行った研究では、攻撃性の高いメラノーマ細胞A375を用い、A375メラノーマ細胞の増殖と浸潤におけるマイクロRNA-3662の役割を発見した。研究結果によると、マイクロRNA-3662はZEB1遺伝子を標的とし、A375腫瘍モデルにおいてin vitroおよびin vivoでメラノーマ細胞の増殖を制御する[2]。同様に、2018年に行われた研究では、PI3K/AKT経路とMAPK/ERK経路がA375細胞株の増殖と転移に関与していることが判明した[3]。
創薬と試験 A375細胞株は、潜在的な抗がん剤を試験・スクリーニングするのに有用なin vitro腫瘍モデルである。研究者たちは、このA375メラノーマ細胞を用いて、新規の化学療法薬、化合物、その他の治療法の毒性と有効性を評価している。例えば、ある研究では、A375ヒトメラノーマがん細胞に対するグレープフルーツ由来のマイクロ粒子とナノ粒子の抗がん作用を調べた。その結果、マイクロ粒子とナノ粒子が細胞周期の停止とアポトーシスを誘導し、細胞増殖、遊走、浸潤における遺伝子発現を阻害することが明らかになった［4］。

A375細胞：出版物

A375細胞を取り上げたいくつかの重要な研究発表をここに挙げる。

ビタミンDとその低カルシウムアナログは、ヒトメラノーマA375細胞株におけるシスプラチンとダカルバジンの抗がん作用を調節する。

この研究は、2019年のJournal of Oncology誌に掲載された。この研究では、ビタミンDと類似物質との共治療が、A375メラノーマ細胞におけるシスプラチンとダカルバジンの抗がん作用を改善することが提唱された。

選択されたアロエ種のゲルおよび全葉抽出物の抗黒色腫効果（A375細胞株）のin vitro評価

この研究は2022年にJournal of Herbal Medicineに掲載された。本研究は、A375メラノーマ細胞におけるアロエベラジェルの抗黒色腫効果を探索した。

フェルミチンファミリーメンバー2は、p-α-PixのRac1への結合を増強してMAPK経路を活性化することにより、メラノーマの進行を促進する

Oncogene誌（2021年）に掲載されたこの研究では、フェルミチンファミリーメンバー2（FERMT2またはkindlin-2）が、p-α-PixおよびRac1との結合を介してMAPKを活性化することにより、メラノーマの進行を促進することが提唱された。

FARP1は皮膚黒色腫のMAPKシグナル伝達経路を調節することにより細胞増殖を促進する

The American Journal of Dermatopathology（2019年）に掲載されたこの研究は、FARP1が皮膚黒色腫の発生と進行を促進する可能性を提唱した。したがって、有用な治療標的となり得る。

ヒト癌細胞株に対するPhyllodium elegans抽出物の細胞毒性とアポトーシスの可能性

この研究論文は、Bioengineered（2019年）に掲載された。本研究は、A375を含むヒト癌細胞株に対する植物Phyllodium elegans抽出物の細胞毒性およびアポトーシス活性を探索した。

A375細胞株のリソース：プロトコール、ビデオ、その他

以下はA375細胞に関するいくつかのオンラインリソースである。

A375細胞のトランスフェクション：このビデオチュートリアルは、A375細胞のトランスフェクションをステップバイステップで学ぶのに役立ちます。
細胞培養： このビデオには細胞株の培養に関する非常に有用な情報があります。

A375細胞の細胞培養プロトコールはこちら。

A375細胞株このリンクには、A375培地、凍結および増殖中のA375培養物の取り扱いなど、A375細胞株の培養と維持に関する有用な情報が含まれています。

A375細胞に関するよくある質問（FAQ）

参考文献

Avram, S.ら、ニワトリ胚絨毛膜およびBalb/cヌードマウス上でのA375ヒトメラノーマモデルの標準化。Oncol Rep, 2017.38(1): p. 89-99.
Zhu,L.、他、MicroRNA-3662はZEB1を標的とし、高攻撃性メラノーマ細胞株A375の浸潤を減弱させる。Cancer Manag Res, 2019.11: p. 5845-5856.
Peng, X., et al.,Oxyfadichalcone C inhibits melanoma A375 cell proliferation and metastasis via suppressing PI3K/Akt and MAPK/ERK pathways.ライフサイエンス, 2018.206: p. 35-44.
Stanly, C., et al.,グレープフルーツ由来のマイクロおよびナノ粒子は、A375ヒトメラノーマ細胞株において、異なるメタボロームプロファイルと抗がん活性を示す。Cells, 2020.9(12): p. 2722.