HROHep03 Cellules

Le milieu de congélation CM-1 de Cytion est un milieu de cryoconservation de pointe conçu pour garantir le plus haut niveau de viabilité et de fonctionnalité des cellules après la décongélation. Ce milieu polyvalent convient à un large éventail de types de cellules, y compris les cellules humaines et animales, ce qui en fait un outil essentiel pour diverses applications de recherche. Formulé avec une combinaison méticuleusement équilibrée de cryoprotecteurs et de nutriments essentiels, le milieu de congélation CM-1 minimise la formation de cristaux de glace et le stress cellulaire pendant le processus de congélation, préservant ainsi l'intégrité cellulaire.
Les principales caractéristiques du milieu de congélation CM-1 sont les suivantes :

Large compatibilité: Efficace pour une large gamme de types de cellules, y compris les cellules primaires, les cellules souches et les lignées cellulaires établies.
Haute viabilité: Optimisé pour maximiser la récupération et la viabilité des cellules après décongélation, garantissant des résultats expérimentaux fiables.
Prêt à l'emploi: Pratiquement préparé et stérilisé pour une application immédiate, réduisant le temps de préparation et le risque de contamination.
Stabilité améliorée: Maintient des performances constantes dans des conditions de cryoconservation standard, garantissant des résultats reproductibles.
Longue durée de conservation: CM-1 est un milieu de cryoconservation contenant du sérum, prêt à l'emploi, qui peut être conservé au réfrigérateur jusqu'à un an.


Utilisation du CM-1 pour la congélation des cellules

Pour utiliser le CM-1 pour congeler des cellules adhérentes ou en suspension, suivre les étapes suivantes

Pour les cellules adhérentes, les laver et les dissocier du substrat de culture. Pour les cellules en suspension, passer directement à l'étape suivante.
Compter les cellules pour s'assurer qu'elles ont la bonne concentration.
Centrifuger les cellules pour les culotter, puis les remettre en suspension dans le milieu de congélation CM-1.
Transférer les cellules remises en suspension dans des cryovials.
Utiliser une méthode de congélation lente avant de transférer les cellules pour un stockage à long terme





Méthode de congélation
Description
Etapes





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Congélation manuelle

Méthode progressive impliquant une réduction graduelle de la température pour assurer la viabilité des cellules

1️⃣ Placer les cellules dans un milieu de congélation dans un congélateur à 4°C pendant 40 minutes.
2️⃣ Transférer dans un congélateur à -80°C pendant 24 heures.
3️⃣ Stocker les cellules dans de l'azote liquide pour une conservation à long terme



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Utilisation de Mr. Frosty

Un appareil pratique qui permet de contrôler les taux de congélation sans alimentation électrique

1️⃣ Préparer les cellules dans des cryovials avec du milieu de congélation.
2️⃣ Placer les cryovials dans le récipient Mr. Frosty.
3️⃣ Conserver à -80°C pendant 24 heures avant de les transférer dans l'azote liquide



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Congélateur à débit contrôlé

Un congélateur de haute précision de Thermo Fisher ou d'autres fabricants, conçu pour une réduction contrôlée de la température

1️⃣ Programmer l'appareil pour réduire progressivement la température.
2️⃣ Placer les cellules préparées dans le congélateur.
3️⃣ Après le cycle de congélation, transférer les cellules dans l'azote liquide









Stocker les cryovials à des températures inférieures à -130°C ou dans de l'azote liquide pour une conservation à long terme.


Ingrédients

Contient du FBS, du DMSO, du glucose et des sels
Pouvoir tampon : pH = 7,2 à 7,6


Le milieu de congélation CM-1 de Cytion offre une solution fiable pour la cryoconservation, garantissant une viabilité cellulaire et une fonctionnalité élevées après décongélation pour une large gamme d'applications de recherche.

Le DMEM:Ham's F12 est un milieu de base largement reconnu et très utilisé en culture cellulaire pour la recherche biologique. Il constitue une source fondamentale de nutriments pour la croissance de diverses lignées cellulaires mammifères, en particulier lorsqu'il est complété par du sérum fœtal bovin (FBS).

Cette formulation unique combine le milieu Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) et le Ham's F-12 (mélange nutritif F-12 de Ham) dans un rapport précis de 1:1. L'ajout de L-glutamine améliore encore sa composition.

Le DMEM, dérivé du milieu minimal essentiel d'Eagle (EMEM), offre une concentration accrue en acides aminés et en vitamines par rapport à son prédécesseur. En revanche, le Ham's F-12 est basé sur le milieu Ham's F-10, fournissant un ensemble complémentaire de composants essentiels.

Pour favoriser une croissance cellulaire optimale, il est courant de compléter le DMEM:Ham's F12 avec du sérum fœtal bovin (FBS) à une concentration typique de 5 à 10 %. Cet ajout est nécessaire car le milieu manque d'hormones de croissance, de lipides et de protéines essentiels au développement cellulaire.

Le DMEM:Ham's F12 intègre un système tampon de pH et est souvent complété par du rouge de phénol, un indicateur de pH. Les cellules cultivées dans le DMEM:Ham's F12, ou dans tout milieu utilisant le système tampon bicarbonate, nécessitent un environnement à teneur en CO₂ contrôlée de 5 à 10 % pour maintenir des niveaux de pH appropriés. 


Contrôle qualité

Filtré stérile


Conservation et durée de conservation

Conserver entre +2 °C et +8 °C, à l'abri de la lumière.
Une fois ouvert, conserver à 4 °C et utiliser dans les 6 à 8 semaines.


Conditions d'expédition

Température ambiante


Conservation

Conserver au réfrigérateur entre +2 °C et +8 °C, à l'abri de la lumière. Éviter le gel et les réchauffements fréquents à +37 °C, car cela réduit la qualité du produit.
Ne pas chauffer le milieu au-delà de 37 °C ni utiliser de sources de chaleur non contrôlées telles que les fours à micro-ondes.
Si seule une partie du milieu doit être utilisée, prélever la quantité nécessaire et la réchauffer à température ambiante avant utilisation.


Composition



Catégorie
Composants
Concentration (mg/L)


Acides aminés
Glycine
18,75


L-alanine
4,45


L-Arginine HCl
147,50


L-asparagine H₂O
7,50


Acide L-aspartique
6,65


L-cystéine HCl H₂O
17,56


L-cystine 2 HCl
31,29


Acide L-glutamique
7,35


L-glutamine
365,00


L-histidine HCl H₂O
31,48


L-isoleucine
54,47


L-Leucine
59,05


L-Lysine HCl
91,25


L-méthionine
17,24


L-phénylalanine
35,48


L-proline
17,25


L-sérine
26,25


L-thréonine
53,45


L-tryptophane
9,02


L-Tyrosine 2 Na 2 H₂O
55,79


L-Valine
52,85


Vitamines
D-biotine
0,0035


Chlorure de choline
8,98


D-pantothénate de calcium
2,24


Acide folique
2,66


Myo-inositol
12,60


Nicotinamide
2,02


Pyridoxine HCl
0,031


Pyridoxal HCl
2,00


Riboflavine
0,219


Chlorhydrate de thiamine
2,17


Vitamine B12
0,68



Sels inorganiques
CaCl₂·2H₂O
154,50


CuSO4 5 H2O
0,0013


Fe(NO₃)₃·9H₂O
0,05


FeSO₄ 7 H₂O
0,417


KCl
311,80


MgCl₂ 6 H₂O
61,20


MgSO4 7 H2O
100,00


NaCl
6996,00


NaHCO3
1200,00


Na₂HPO₄
71,02


NaH₂PO₄·2H₂O
70,87


ZnSO4 7 H2O
0,432



Autres composants
D-glucose
3151,00


Hypoxanthine
2,40


HEPES
3574,50


Acide linoléique
0,042


Acide lipoïque
0,105


Sel de sodium du rouge de phénol
8,63


Putrescine 2 HCl
0,081


Pyruvate de sodium
55,00


Thymidine
0,365

Solution de détachement cellulaire Accutase avec EDTA et rouge de phénol – 100 ml

Accutase est une solution de détachement cellulaire prête à l'emploi et filtrée de manière stérile, conçue comme une alternative douce à la trypsine/EDTA pour dissocier les cellules mammifères adhérentes des récipients en plastique standard pour culture tissulaire et des surfaces revêtues d'un agent d'adhérence. Elle combine une activité enzymatique protéolytique et collagénolytique dans une solution saline équilibrée pour offrir une dissociation efficace mais contrôlée, préservant les protéines de surface cellulaire et favorisant une viabilité élevée après passage ainsi qu'une réadhérence rapide.

La formulation d'Accutase est basée sur une solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco (DPBS) avec de l'EDTA et du rouge de phénol comme indicateur visuel de pH. Les enzymes sont d'origine non mammifère et non bactérienne, ce qui rend Accutase particulièrement adapté à la recherche sur les cellules souches, aux processus de fabrication de vaccins et à toute application où les contaminants d'origine animale ou microbienne doivent être minimisés. La solution s'auto-inhibe à 37 °C ; aucun réactif neutralisant ni milieu contenant du sérum n'est donc nécessaire après le détachement – les cellules peuvent être transférées directement dans un milieu frais.

Caractéristiques principales

Liquide 1x stérilisé par filtration, prêt à l'emploi – aucune dilution ni reconstitution requise
Activité enzymatique combinée protéolytique et collagénolytique pour une dissociation en douceur
Chaque lot est standardisé à une activité de dissociation définie pour garantir la cohérence d'un lot à l'autre
Enzymes d'origine non mammifère et non bactérienne
S'auto-inhibe à 37 °C – aucune solution neutralisante n'est nécessaire
Formulé dans du PBS de Dulbecco avec de l'EDTA
Rouge de phénol inclus comme indicateur visuel de pH
pH 6,8 – 7,8


Applications typiques
Accutase dissocie en douceur une grande variété de types de cellules adhérentes et sensibles, notamment les cellules souches embryonnaires humaines (hESC), les cellules souches pluripotentes induites humaines (iPSC), les cellules souches neurales, les neurones primaires et les lignées adhérentes couramment cultivées telles que HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 et A549. Exemples d'utilisation :

La sous-culture et le repiquage courants de cellules mammifères adhérentes
Dissociation douce de cellules individuelles issues de hESC, d'iPSC et d'autres lignées sensibles
Préparation d'échantillons pour la cytométrie en flux et l'analyse FACS
L'analyse des marqueurs de surface cellulaire où l'intégrité de l'épitope est cruciale
Tests de migration, de prolifération et d'apoptose cellulaires
Tests de quiescence par privation de sérum et études de transfection d'oncogènes
Tests de migration des cellules tumorales et des cellules de la crête neurale
Augmentation de la production dans les flux de travail en bioréacteur

Pour les travaux de routine, appliquez environ 10 ml d'Accutase par 75 cm² de surface de culture et incubez pendant 5 à 10 minutes à température ambiante. La durée d'incubation optimale doit être déterminée pour chaque lignée cellulaire et ne doit pas dépasser une heure. Avant l'ajout, rincez la couche cellulaire avec une solution saline exempte de Ca²⁺/Mg²⁺, telle que du DPBS sans calcium ni magnésium, afin d'éliminer le sérum résiduel et les cations divalents.

Manipulation et conservation
Conserver le flacon non ouvert congelé à -15 °C ou moins. Décongeler soit à température ambiante, soit pendant une nuit entre +2 °C et +8 °C. Ne pas décongeler Accutase dans un bain-marie à 37 °C, car les températures élevées réduisent l’activité enzymatique. Après décongélation, la solution peut être conservée jusqu’à 2 mois entre +2 °C et +8 °C ; ne pas conserver à température ambiante. Ne préchauffez pas le réactif à 37 °C avant utilisation – ajoutez-le directement aux cellules lavées à température ambiante. Pour une conservation à long terme, il est recommandé de prélever des aliquotes à usage unique afin d'éviter les cycles de décongélation répétés. Travaillez toujours dans des conditions aseptiques.

Qualité
Fabriqué selon des normes de qualité strictes. Chaque lot d'Accutase est filtré à stérilité et testé pour vérifier sa stérilité, son pH, son aspect et son activité de dissociation afin de garantir des performances constantes et reproductibles d'un lot à l'autre.

Spécifications du produit



Spécifications
Détails



Type de produitRéactif de détachement/dissociation cellulaire
FormatLiquide filtré stérile, prêt à l'emploi
Volume100 ml
Concentration d'utilisation1x (prêt à l'emploi)
Activité enzymatiqueProtéolytique et collagénolytique combinées
Origine de l'enzymeNon mammifère et non bactérienne
Système tamponPBS de Dulbecco avec EDTA
Indicateur de pHRouge de phénol
Plage de pH6,8 – 7,8
AspectSolution limpide, de couleur rouge pâle à orange
Température de stockage-15 °C ou moins
Stabilité après décongélationJusqu'à 2 mois entre +2 °C et +8 °C
Volume d'utilisation recommandé~10 ml par 75 cm² de surface de culture
Durée d'incubation typique5 à 10 minutes à température ambiante
Conditions d'expéditionCongelé dans de la glace carbonique
Utilisation prévueÀ usage exclusif pour la recherche et la fabrication ultérieure



Formulation (composition par litre)



Composant
Concentration (mg/L)




Sels inorganiques

Chlorure de sodium (NaCl)8000,00
Hydrogénophosphate disodique (Na₂HPO₄)1150,00
Chlorure de potassium (KCl)200,00
Dihydrogénophosphate de potassium (KH₂PO₄)200,00

Autres composants

EDTA · 4Na (EDTA tétrasodique)220,00
Rouge de phénol3,00
Mélange enzymatique exclusif (activité protéolytique et collagénolytique)1x



Accutase est une marque déposée d'Innovative Cell Technologies, Inc.

Aperçu du produit
Volume : 100 ml Stockage : ≤-15°C Stérilité : Filtration stérile
Lasolution antibiotique/antimycosique (100x) est un concentré stérile, prêt à l'emploi, conçu pour réduire les risques de contamination microbienne dans les cultures cellulaires et les applications de laboratoire connexes. Cette solution 100x contient une combinaison bien établie de pénicilline, de streptomycine et d'amphotéricine B, qui fournit une activité antimicrobienne à large spectre contre les bactéries Gram-positives et Gram-négatives, les levures et les champignons filamenteux. La formulation convient aux cultures de cellules eucaryotes, aux milieux bactériens et à d'autres systèmes sensibles à la contamination, ce qui favorise des opérations de laboratoire propres et cohérentes.
Applications et avantages Optimisée pour les protocoles de recherche de routine, cette solution est largement utilisée pour maintenir des conditions aseptiques dans les flux de culture cellulaire. Elle offre des performances fiables dans les environnements sensibles à la contamination, aidant les chercheurs à réduire le risque de prolifération microbienne sans compromettre la santé des cellules ou la reproductibilité des expériences. La formulation stérile-filtrée élimine le besoin d'étapes de solubilisation supplémentaires, ce qui permet de rationaliser la préparation des milieux et de réduire la variabilité des procédures de laboratoire quotidiennes.
Utilisation et compatibilité Pour obtenir des concentrations de travail standard, diluer la solution au 1:100 dans votre milieu de culture complet. Le produit est compatible avec une large gamme de lignées cellulaires de mammifères et de milieux de base. Grâce à la disponibilité constante des stocks, les chercheurs bénéficient d'une continuité d'approvisionnement fiable et d'une planification logistique simplifiée. La solution doit être conservée à une température ≤ -15 °C et protégée des cycles répétés de congélation-décongélation pour maintenir sa stabilité. Réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures diagnostiques ou thérapeutiques. Ne pas utiliser chez l'homme ou l'animal.

Solution saline tamponnée au phosphate (PBS)
La solution saline tamponnée au phosphate (PBS) est une solution tampon largement utilisée dans la recherche biologique et chimique. Elle joue un rôle crucial dans le maintien de l'équilibre du pH et de l'osmolarité au cours de diverses procédures expérimentales, y compris le traitement des tissus et la culture cellulaire. Notre solution PBS est méticuleusement formulée avec des ingrédients de haute pureté afin de garantir la stabilité et la fiabilité de chaque expérience. L'osmolarité et les concentrations d'ions de notre PBS imitent étroitement celles du corps humain, ce qui la rend isotonique et non toxique pour la plupart des cellules.

Composition de notre solution PBS
Notre solution PBS est un mélange de tampons phosphatés et de solutions salines de qualité supérieure dont le pH est ajusté. À une concentration de travail de 1X, elle contient :

8000 mg/L de chlorure de sodium (NaCl)
200 mg/L Chlorure de potassium (KCl)
1150 mg/L phosphate de sodium dibasique anhydre (Na2HPO4)
200 mg/L Phosphate de potassium monobasique anhydre (KH2PO4)

Cette composition assure un pH et un équilibre ionique optimaux, convenant à une large gamme d'applications biologiques.

Applications de notre solution PBS
Notre solution PBS est idéale pour diverses applications dans la recherche biologique. Ses propriétés isotoniques et non toxiques la rendent appropriée pour la dilution de substances et le rinçage de récipients cellulaires. Les solutions PBS contenant de l'EDTA sont efficaces pour désengager les cellules attachées et agglutinées. Cependant, les métaux divalents tels que le zinc ne doivent pas être ajoutés au PBS, car ils peuvent provoquer une précipitation. Dans ce cas, les tampons Good's sont recommandés. En outre, notre solution PBS est une alternative acceptable au milieu de transport viral pour le transport et le stockage des virus à ARN, y compris le SARS-CoV-2.

Contrôle de la qualité

Filtré stérilement


Stockage et durée de conservation

Stocker entre +2°C et +25°C, à l'abri de la lumière.
Après ouverture, conserver entre 2°C et 25°C et utiliser dans les 24 mois.


Conditions d'expédition

Température ambiante


Entretien

Conserver au réfrigérateur entre +2°C et +8°C à l'abri de la lumière. Éviter la congélation et le réchauffement fréquent jusqu'à +37°C, car cela réduit la qualité du produit.
Ne pas chauffer le milieu au-delà de 37°C ou utiliser des sources de chaleur non contrôlées telles que les micro-ondes.
Si une partie seulement du milieu doit être utilisée, prélever la quantité nécessaire et la réchauffer à température ambiante avant de l'utiliser.

Composition



Catégorie
Composants
Concentration (mg/L)


Sels
Chlorure de potassium
200



Phosphate de potassium monobasique anhydre
200



Chlorure de sodium
8000



Phosphate de sodium dibasique anhydre
1150