Cellules L929
Faits marquants sur les cellules L929
Description | Les cellules L-929 sont une lignée cellulaire de type fibroblaste dérivée du tissu conjonctif sous-cutané d'une souris mâle C3H/An âgée de 100 jours. Créée dans les années 1940, cette lignée cellulaire est devenue essentielle dans divers domaines de la recherche biologique et médicale en raison de sa robustesse, de sa facilité de culture et de la polyvalence de ses applications. Les cellules L-929 se caractérisent par leur forme fusiforme, leur morphologie fibroblastique et leur croissance adhérente. Elles sont largement utilisées dans les essais de cytotoxicité et servent de modèle standard pour évaluer la biocompatibilité des matériaux et les effets toxiques de diverses substances, ce qui est particulièrement important dans les domaines des biomatériaux et de l'ingénierie tissulaire. Les cellules L-929 sont également utilisées dans l'étude de l'activité des cytokines, en particulier dans les tests d'activité du facteur de nécrose (TNF), en raison de leur sensibilité à la cytotoxicité induite par le TNF. Elles sont donc précieuses pour la recherche en immunologie et en inflammation. Les cellules L-929 sont également utilisées en virologie comme hôte pour les études de réplication virale. Leur sensibilité à divers virus, tels que le virus de la bursite infectieuse (IBDV), facilite l'étude des cycles de vie viraux, des interactions hôte-virus et de l'efficacité des composés antiviraux. Dans l'ensemble, la lignée cellulaire L-929 est une ressource précieuse pour la recherche scientifique et offre une plate-forme polyvalente pour les études sur la cytotoxicité, l'immunologie, la virologie et les biomatériaux. |
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Organisme | Souris |
Tissus | Tissu conjonctif normal, sous-cutané, aréolaire et adipeux |
Synonymes | NCTC clone 929, NCTC 929, NCTC-929, NCTC929, cellule L, cellules L, cellule L, cellules L, lignée cellulaire L, L, souche L-929, L 929, L929, L929(NCTC), Clone 929, cellules d'Earles, cellules L d'Earle |
Caractéristiques de la lignée cellulaire de souris L929
L'âge | 100 jours |
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Genre | Homme |
Morphologie | De type fibroblastique |
Type de cellule | Fibroblaste |
Propriétés de croissance | Adhérent |
Spécifications
Citation | L-929 (numéro de catalogue Cytion 400260) |
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Niveau de biosécurité | 1 |
Génotype
Expression de l'antigène | H-2k |
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Tumorigène | Oui, chez les souris immunodéprimées |
Virus | Virus Ectromelia (mousepox) : négatif |
Résistance aux virus | poliovirus 1, 2, 3, coxsackievirus B5, polyomavirus |
Transcriptase inverse | positif |
Contrôles de pureté et d'identité des cellules L929
Milieu de culture | DMEM:Ham's F12, w : 3.1 g/L Glucose, w : 1.6 mM L-Glutamine, w : 15 mM HEPES, w : 1.0 mM Sodium pyruvate, w : 1.2 g/L NaHCO3 (numéro d'article Cytion 820400a) |
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Suppléments moyens | Compléter le milieu avec 10% de FBS |
Solution de passage | Accutase |
Temps de doublement | 25 heures |
Sous-culture | Retirer l'ancien milieu des cellules adhérentes et les laver avec du PBS dépourvu de calcium et de magnésium. Pour les flacons T25, utiliser 3-5 ml de PBS, et pour les flacons T75, 5-10 ml. Ensuite, recouvrir complètement les cellules avec Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laisser les cellules incuber à température ambiante pendant 8-10 minutes pour les détacher. Après incubation, mélanger délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifuger à 300xg pendant 3 minutes. Jeter le surnageant, remettre les cellules en suspension dans du milieu frais et les transférer dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais. |
Taux de fractionnement | Un rapport de 1:2 à 1:8 est recommandé |
Densité de semis | 2 à 3 x 10^4 cellules/cm^2 |
Renouvellement des fluides | 2 à 3 fois par semaine |
Recouvrement par congélation | 24 à 48 heures |
Congélation du milieu | CM-1 (numéro de catalogue Cytion 800100) ou CM-ACF (numéro de catalogue Cytion 806100) |
Manipulation des cultures cryoconservées |
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Contrôle de la qualité
Stérilité | La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence. Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes. |
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Profil STR |
Amélogénine: x,x
M_18-3: 16
M_4-2: 20.3
M_6-7: 12
M_3-2: 13,14
M_19-2: 12
M_7-1: 25,26,27
M_1-1: 10
M_8-1: 16
M_2-1: 9
M_15-3: 24.3,25.3,26.3
M_6-4: 17,18
M_11-2: 15,16
M_1-2: 17
M_17-2: 15
M_12-1: 16
M_5-5: 14
M_X-1: 26,27
M_13-1: 17
Humain D4/D8: -
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Produits requis
Dans la recherche biologique, la cryoconservation des cellules de mammifères est un outil inestimable. La conservation réussie des cellules est une priorité absolue, car la perte d'une lignée cellulaire en raison d'une contamination ou de mauvaises conditions de stockage entraîne une perte de temps et d'argent, ce qui retarde en fin de compte les résultats de la recherche. Une fois les cellules transférées d'un milieu de croissance cellulaire à un milieu de congélation, elles sont généralement congelées à une vitesse régulée et stockées dans de la vapeur d'azote liquide ou à une température inférieure à -130°C dans un congélateur mécanique. Le milieu de congélation CM-1 permet la cryoconservation des cellules à une température inférieure à -130°C (ou dans l'azote liquide), ce qui élimine essentiellement le besoin d'un congélateur ultra-bas supplémentaire et coûteux, ainsi que les processus de congélation à vitesse contrôlée, longs et exigeants. Il suffit de prélever les cellules, d'aspirer le milieu de croissance, de les remettre en suspension dans le CM-1, de les transférer dans un cryovial et de conserver le flacon à une température inférieure à -130 °C.
Longue durée de conservation
CM-1 est un milieu de cryoconservation contenant du sérum, prêt à l'emploi, qui peut être conservé au réfrigérateur jusqu'à un an.
Des centaines de chercheurs lui font confiance
Notre milieu de congélation cellulaire CM-1 est un produit leader sur le marché en Allemagne et en Europe et se distingue par de nombreuses publications impliquant des centaines de lignées cellulaires différentes dans le monde entier. Nous l'avons testé avec plus de 1000 lignées cellulaires issues de notre banque de cellules propriétaire.
Ingrédients optimisés
CM-1 contient des produits sériques. Les milieux de cryoconservation contenant du sérum protègent de manière optimale les cellules pendant leur congélation et présentent l'avantage d'un taux de récupération élevé. CM-1 ayant été testé avec une multitude de lignées cellulaires, vous pouvez être assuré que vos cellules se rétablissent toujours bien.
Contient du FBS, du DMSO, du glucose et des sels
Pouvoir tampon pH = 7,2 à 7,6
Applications et validation
Les cellules conservées dans notre milieu de congélation CM-1 peuvent être utilisées pour le comptage cellulaire, la viabilité et la cryoconservation, la culture cellulaire, la culture de cellules de mammifères, l'analyse de l'expression génique et le génotypage, la transcription in vitro et les réactions en chaîne par polymérase. L'efficacité de chaque lot est évaluée sur des cellules CHO-K1. Chaque lot est soumis à des tests de pH, d'osmolalité, de stérilité et d'endotoxines afin de garantir une qualité élevée.
Cette formulation unique combine le milieu Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) et le Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) dans un rapport précis de 1:1. L'ajout de L-glutamine améliore encore sa composition.
Le DMEM, dérivé de l'Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), offre une concentration accrue d'acides aminés et de vitamines par rapport à son prédécesseur. En revanche, Ham's F-12 est basé sur le milieu Ham's F-10, fournissant un ensemble complémentaire de composants essentiels.
Pour favoriser une croissance cellulaire optimale, il est courant de compléter le DMEM:Ham's F12 par de la FBS à une concentration typique de 5 à 10 %. Cet ajout est nécessaire car le milieu manque d'hormones de croissance, de lipides et de protéines cruciales pour le développement cellulaire.
Le DMEM:Ham's F12 comprend un système tampon de pH et est souvent complété par du rouge de phénol, un indicateur de pH. Les cellules cultivées dans le DMEM:Ham's F12, ou tout autre milieu utilisant le système de tampon bicarbonate, nécessitent un environnement contrôlé en CO2 de 5 à 10 % pour maintenir des niveaux de pH appropriés. Le rouge de phénol permet de surveiller les changements de pH de 6,2 (jaune) à 8,2 (rouge).
Contrôle de la qualité
pH = 7,2 +/
- 0,02 à 20-25°C.
Chaque lot a été testé pour la stérilité et l'absence de mycoplasmes et de bactéries.
Entretien
Conserver au réfrigérateur entre +2°C et +8°C à l'abri de la lumière. La congélation et le réchauffement jusqu'à +37°C réduisent la qualité du produit.
Ne pas chauffer le milieu à plus de 37°C ou utiliser des sources de chaleur incontrôlables (par exemple, des appareils à micro-ondes).
Si une partie seulement du milieu doit être utilisée, retirez cette quantité du flacon et réchauffez-la à température ambiante.
La durée de conservation de tout milieu, à l'exception du milieu de base, est de 8 semaines à compter de la date de fabrication.
Composition
Composants
mg/L
Sels inorganiques
Chlorure de calcium x 2H2O
154,45
Nitrate de fer(III) x 9H2O
0,05
Sulfate de fer(II) x 7H2O
0,42
Chlorure de potassium
311,83
Sulfate de cuivre(II) x 5H2O
0.001
Chlorure de magnésium anhydre
28,57
Sulfate de magnésium
48,85
Chlorure de sodium
6,999.50
Dihydrogénophosphate de sodium anhydre
54,35
hydrogénophosphate de sodium
70,98
Sulfate de zinc x 7H2O
0,43
Autres composants
D(+)-Glucose anhydre
3,151.00
HEPES
3,574.50
Hypoxanthine
2,04
Acide linoléique
0,04
Acide lipoïque DL-68
0.103
Pyruvate de sodium
110,00
Rouge de phénol
8,10
Putrescine x 2HCl
0.081
Thymidine
0,36
Acides aminés
L-Alanine
4,45
L-Arginine x HCl
147,35
L-Asparagine x H2O
7,50
Acide L-aspartique
6,65
L-Cystine x 2HCl
31,29
L-Cystéine x HCl x H2O
17,56
L-Glutamine
365,00
Acide L-Glutamique
7,35
Glycine
18,75
L-Histidine x HCl x H2O
31,48
L-Isoleucine
54,37
L-Leucine
58,96
L-Lysine x HCl
91,37
L-Méthionine
17,24
L-phénylalanine
35,48
L-Proline
17,27
L-Sérine
26,25
L-Thréonine
53,55
L-Tryptophane
9,02
L-Tyrosine x 2Na x 2H2O
55,81
L-Valine
52,66
Vitamines
D-(+)-Biotine
0,004
D-Pantothénate de calcium
2,12
Chlorure de choline
8,98
Acide folique
2,66
myo-Inositol
12,51
Nicotinamide
2,02
Pyridoxine x HCl
2,03
Riboflavine
0,22
Thiamine x HCl
2,17
Vitamine B12
0,68
NaHCO3
1,200.00
La solution saline tamponnée au phosphate (PBS) est une solution tampon polyvalente utilisée dans de nombreuses applications biologiques et chimiques, ainsi que dans le traitement des tissus. Notre solution PBS est formulée avec des ingrédients de haute qualité pour garantir un pH constant pendant les expériences. L'osmolarité et les concentrations ioniques de notre solution PBS correspondent à celles du corps humain, ce qui la rend isotonique et non toxique pour la plupart des cellules.
Composition de notre solution PBS
Notre solution PBS est un mélange de tampons phosphatés et de solutions salines de qualité supérieure dont le pH est ajusté. À une concentration de travail de 1X, elle contient 137 mM de NaCl, 2,7 mM de KCl, 8 mM de Na2HPO4 et 2 mM de KH2PO4. Nous avons choisi cette composition sur la base des protocoles du CSHL et de Molecular cloning by Sambrook, qui sont des normes bien établies dans la communauté des chercheurs.
Applications de notre solution PBS
Notre solution PBS est idéale pour une large gamme d'applications dans la recherche biologique. Ses propriétés isotoniques et non toxiques la rendent idéale pour la dilution de substances et le rinçage de récipients cellulaires. Notre solution PBS avec EDTA peut également être utilisée pour désengager les cellules attachées et agglutinées. Cependant, il est important de noter que les métaux divalents tels que le zinc ne peuvent pas être ajoutés au PBS, car cela peut entraîner une précipitation. Dans ce cas, il est recommandé d'utiliser les tampons Good's. En outre, notre solution PBS s'est avérée être une alternative acceptable au milieu de transport viral pour le transport et le stockage de virus à ARN, tels que le SARS-CoV-2.
Stockage de notre solution PBS
Notre solution PBS peut être conservée à température ambiante, ce qui en facilite l'utilisation et l'accès.
En résumé
En résumé, notre solution PBS est un composant essentiel dans de nombreuses expériences biologiques et chimiques. Ses propriétés isotoniques et non toxiques la rendent adaptée à de nombreuses applications, de la culture cellulaire au milieu de transport viral. En choisissant notre solution PBS de haute qualité, les chercheurs peuvent optimiser leurs expériences et garantir des résultats précis et fiables.
Composition du PBS
Composants
mg/L
Sels inorganiques
Chlorure de potassium
200,00
Phosphate de potassium dihydrogène
200,00
Chlorure de sodium
8,000.00
hydrogénophosphate de di-sodium anhydre
1,150.00