Cellules HMC3
Informations générales
Description | La lignée cellulaire Human Microglial Clone 3 (HMC3) a été développée en 1995 par l'équipe du Professeur Tardieu grâce à l'immortalisation dépendante du SV40 de cellules microgliales provenant de la moelle épinière et de tissus corticaux humains, obtenus à partir d'embryons âgés de 8 à 12 semaines. Ces cellules primaires, caractérisées par une division lente et des morphologies complexes, ont d'abord été cultivées pendant 10 à 15 jours avant d'être immortalisées. Les cellules HMC3 ont conservé plusieurs caractéristiques clés de la microglie primaire, telles que l'expression diversifiée de marqueurs myéloïdes comme CD68, CD11b et CD14, bien que les niveaux d'expression varient considérablement en fonction du choix de l'anticorps primaire, en particulier pour CD68. Après l'immortalisation, les cellules HMC3 ont présenté des taux de prolifération accrus, avec des temps de doublement compris entre 24 et 48 heures, tout en conservant de nombreuses caractéristiques phénotypiques et morphologiques de leurs homologues primaires. Notamment, il y avait une plus grande proportion de cellules CD68 EBM/11-positives et une réduction de l'activité phagocytaire par rapport aux cellules primaires. La stabilité de l'expression antigénique a été confirmée sur 35 passages, les cellules restant positives pour NSE, CD68 et CD11b, mais négatives pour CD14, MHCII et CD4 dans les conditions de base. Cependant, l'exposition à l'interféron-γ (IFNγ) a augmenté l'expression du MHCII, s'alignant plus étroitement sur les réponses des cultures primaires au même traitement. Sur le plan fonctionnel, la lignée HMC3 s'est distinguée en produisant des niveaux plus élevés d'interleukine-6 (IL-6) dans des conditions basales par rapport aux autres clones. Malgré cela, une comparaison directe avec la production de cytokines des cellules microgliales primaires reste difficile en raison de différences méthodologiques. La réponse à la stimulation par le lipopolysaccharide (LPS) dans ces lignées immortalisées semble diminuée par rapport aux cultures primaires. Conformément aux caractéristiques des microglies primaires, la lignée HMC3 et d'autres lignées clonées n'ont pas produit de facteur de nécrose tumorale alpha (TNFα), que ce soit spontanément ou à la suite d'une stimulation pro-inflammatoire, ce qui met en évidence une caractéristique spécifique de la microglie embryonnaire humaine. |
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Organisme | Humain |
Tissus | Cerveau du fœtus |
Applications | culture cellulaire 3D, Neuroscience, Neuroinflammation |
Synonymes | Clone humain de microglie 3, CHME-3, CHME3 |
Caractéristiques
L'âge | Fœtus |
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Genre | Non spécifié |
Morphologie | Macrophage |
Type de cellule | Cellule microgliale |
Propriétés de croissance | Adhérent |
Identifiants / Biosécurité / Citation
Citation | HMC3 (numéro de catalogue Cytion 300651) |
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Niveau de biosécurité | 1 |
Expression / Mutation
Virus | Le matériel génétique du SV40 est intégré de manière stable dans le génome cellulaire. Il n'y a pas de production active ou de libération de particules virales complètes, ce qui atténue les problèmes potentiels de biosécurité. |
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Manipulation
Milieu de culture | DMEM:Ham's F12, w : 3.1 g/L Glucose, w : 1.6 mM L-Glutamine, w : 15 mM HEPES, w : 1.0 mM Sodium pyruvate, w : 1.2 g/L NaHCO3 (numéro d'article Cytion 820400a) |
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Suppléments moyens | Compléter le milieu avec 10% de FBS |
Solution de passage | Accutase |
Temps de doublement | 24 et 48 heures |
Sous-culture | Retirer l'ancien milieu des cellules adhérentes et les laver avec du PBS dépourvu de calcium et de magnésium. Pour les flacons T25, utiliser 3-5 ml de PBS, et pour les flacons T75, 5-10 ml. Ensuite, recouvrir complètement les cellules avec Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laisser les cellules incuber à température ambiante pendant 8-10 minutes pour les détacher. Après incubation, mélanger délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifuger à 300xg pendant 3 minutes. Jeter le surnageant, remettre les cellules en suspension dans du milieu frais et les transférer dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais. |
Congélation du milieu | CM-1 (numéro de catalogue Cytion 800100) ou CM-ACF (numéro de catalogue Cytion 806100) |
Manipulation des cultures cryoconservées |
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Contrôle de qualité / Profil génétique / HLA
Stérilité | La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence. Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes. |
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Profil STR |
Amélogénine: x,x
CSF1PO: 10,11
D13S317: 11
D16S539: 12,13
D5S818: 11,12
D7S820: 9,11
TH01: 6
TPOX: 8,9
vWA: 17,19
D3S1358: 16,18
D21S11: 30,31.2
D18S51: 18
Penta E: 7,13
Penta D: 10,14
D8S1179: 13,14
FGA: 21,25
D6S1043: 11
D2S1338: 17,25
D12S391: 16,21
D19S433: 15,15.2
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