Cellules HEp-2
Introduction aux cellules Hep-2
Description | La lignée cellulaire HEp-2, dont on pensait à l'origine qu'elle était dérivée de cellules de cancer du larynx, a ensuite été identifiée, grâce à l'empreinte ADN et à la présence de chromosomes marqueurs HeLa, comme étant contaminée par des cellules HeLa, une lignée cellulaire dérivée d'un cancer du col de l'utérus. Malgré cela, la lignée cellulaire HEp-2 reste largement utilisée en immunofluorescence indirecte pour détecter les anticorps antinucléaires (ANA), qui sont essentiels pour diagnostiquer des maladies telles que le lupus érythémateux disséminé et la sclérose systémique. Le test d'immunofluorescence indirecte (IIFA) utilisant des cellules HEp-2, qui donne des résultats positifs ou négatifs clairs, est la méthode standard pour tester les anticorps antinucléaires. Cette approche simple est cruciale pour le diagnostic et la classification des différentes maladies auto-immunes systémiques. Les profils d'auto-anticorps observés en immunofluorescence indirecte sur cellules HEp-2, en particulier dans le contexte de la rhumatologie, fournissent des informations précieuses sur les différentes maladies rhumatismales. En outre, l'examen complet des antigènes exprimés par les cellules humaines HEp-2 dans différentes conditions de culture permet d'identifier des ANA spécifiques liés à des maladies telles que le lupus. En conclusion, bien que la contamination de lignées cellulaires telles que HEp-2 par des cellules HeLa ait suscité des inquiétudes dans la recherche sur le cancer quant à la précision et à la fiabilité des résultats et à leur pertinence clinique, l'utilité de Hep-2 dans la détection des anticorps antinucléaires et son application dans diverses disciplines de recherche soulignent son importance continue. La lignée cellulaire HEp-2 est un outil essentiel pour le diagnostic et la classification des maladies auto-immunes, entre autres applications. |
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Organisme | Humain |
Tissus | Larynx |
Maladie | Adénocarcinome |
Applications | En rhumatologie, l'immunofluorescence indirecte sur cellules HEp-2 joue un rôle crucial dans le diagnostic des maladies auto-immunes, notamment le lupus érythémateux disséminé et la sclérose systémique |
Synonymes | Hep-2, HEP-2, HEp-2/HeLa, Hep 2, Hep2, HEp2, HEP2, H.Ep.-2, H.Ep. #2, H.Ep. No. 2, Hep II, Human Epidermoid carcinoma #2, Human Epithelioma-2 |
Détails de la lignée cellulaire HEp-2
L'âge | 30 ans |
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Genre | Femme |
Ethnicité | Afro-américain |
Morphologie | De type épithélial |
Propriétés de croissance | Monocouche, adhérente |
Documentation
Citation | HEp-2 (numéro de catalogue Cytion 300397) |
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Niveau de biosécurité | 1 |
Profil génétique
Isoenzymes | G6PD, A |
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Transcriptase inverse | Négatif |
Produits | Kératine |
Manipulation des cellules Hep2
Milieu de culture | EMEM, w : 2 mM L-Glutamine, w : 1.5 g/L NaHCO3, w : EBSS, w : 1 mM Sodium pyruvate, w : NEAA (numéro d'article Cytion 820100c) |
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Suppléments moyens | Compléter le milieu avec 10% de FBS |
Solution de passage | Accutase |
Sous-culture | Retirer l'ancien milieu des cellules adhérentes et les laver avec du PBS dépourvu de calcium et de magnésium. Pour les flacons T25, utiliser 3-5 ml de PBS, et pour les flacons T75, 5-10 ml. Ensuite, recouvrir complètement les cellules avec Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laisser les cellules incuber à température ambiante pendant 8-10 minutes pour les détacher. Après incubation, mélanger délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifuger à 300xg pendant 3 minutes. Jeter le surnageant, remettre les cellules en suspension dans du milieu frais et les transférer dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais. |
Taux de fractionnement | Un rapport de 1:4 à 1:10 est recommandé |
Densité de semis | 1 x 10^4 cellules/cm^2 |
Renouvellement des fluides | 2 à 3 fois par semaine |
Recouvrement par congélation | Après décongélation, ensemencer les cellules à 5 x 10^4 cellules/cm^2 et laisser les cellules se remettre du processus de congélation et adhérer pendant au moins 24 heures. |
Congélation du milieu | CM-1 (numéro de catalogue Cytion 800100) ou CM-ACF (numéro de catalogue Cytion 806100) |
Manipulation des cultures cryoconservées |
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Contrôle de la qualité
Stérilité | La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence. Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes. |
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Profil STR |
Amélogénine: x,x
CSF1PO: 9,10
D13S317: 12,13.3
D16S539: 9,10
D5S818: 11,12
D7S820: 8,12
TH01: 7
TPOX: 8,12
vWA: 16,18
D3S1358: 15,18
D21S11: 27,28
D18S51: 16
Penta E: 7,17
Penta D: 8,15
D8S1179: 12,13
FGA: 18,21
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Required products
Dans la recherche biologique, la cryoconservation des cellules de mammifères est un outil inestimable. La conservation réussie des cellules est une priorité absolue, car la perte d'une lignée cellulaire en raison d'une contamination ou de mauvaises conditions de stockage entraîne une perte de temps et d'argent, ce qui retarde en fin de compte les résultats de la recherche. Une fois les cellules transférées d'un milieu de croissance cellulaire à un milieu de congélation, elles sont généralement congelées à une vitesse régulée et stockées dans de la vapeur d'azote liquide ou à une température inférieure à -130°C dans un congélateur mécanique. Le milieu de congélation CM-ACF permet la cryoconservation des cellules à une température inférieure à -130°C (ou dans l'azote liquide), ce qui élimine essentiellement le besoin d'un congélateur ultra-bas supplémentaire et coûteux, ainsi que les processus de congélation à vitesse contrôlée, longs et exigeants. Il suffit de prélever les cellules, d'aspirer le milieu de croissance, de les remettre en suspension dans le CM-ACF, de les transférer dans un cryovial et de conserver le flacon à une température inférieure à -130 °C.
Longue durée de conservation
CM-ACF est un milieu de cryoconservation sans sérum, prêt à l'emploi, qui peut être conservé au réfrigérateur jusqu'à un an.
Des centaines de chercheurs font confiance au CM-ACF
Notre milieu de congélation cellulaire sans sérum CM-ACF est un produit leader sur le marché en Allemagne et en Europe et se distingue par de nombreuses publications impliquant des centaines de lignées cellulaires différentes dans le monde entier. Nous l'avons testé avec plus de 1000 lignées cellulaires issues de notre banque de cellules propriétaire.
Ingrédients optimisés sans sérum
CM-ACF ne contient pas de produits à base de sérum. Les milieux de cryoconservation contenant du sérum présentent l'inconvénient d'avoir des taux de récupération fluctuants et une composition peu claire. Étant donné que la composition et la concentration des protéines et autres composants biologiques varient d'un lot à l'autre dans le sérum, la reproductibilité des expériences avec des cellules congelées dans un milieu contenant du sérum peut être compromise. Comme chaque composant de CM-ACF est soigneusement défini, vous pouvez être assuré que les cellules se rétablissent toujours à l'identique.
Contient du DMSO, du glucose, des sels
Pouvoir tampon pH = 7,2 à 7,6
Universel
- même pour la préservation des cellules souches
Toutes les lignées cellulaires courantes peuvent être congelées et décongelées pour obtenir de nombreuses cellules viables. Par rapport aux milieux standard, le taux de récupération des cellules, même les plus délicates, est nettement plus élevé. En utilisant CM-ACF, nous conservons plus de 1000 lignées cellulaires différentes avec un succès exceptionnel.
Applications et validation
Les cellules conservées dans notre milieu de congélation CM-ACF peuvent être utilisées pour le comptage, la viabilité et la cryoconservation des cellules, la culture cellulaire, la culture de cellules de mammifères, l'analyse de l'expression génétique et le génotypage, la transcription in vitro et les réactions en chaîne par polymérase. L'efficacité de chaque lot est évaluée sur des cellules CHO-K1. Chaque lot est soumis à des tests de pH, d'osmolalité, de stérilité et d'endotoxines afin de garantir une qualité élevée.
Dans la recherche biologique, la cryoconservation des cellules de mammifères est un outil inestimable. La conservation réussie des cellules est une priorité absolue, car la perte d'une lignée cellulaire en raison d'une contamination ou de mauvaises conditions de stockage entraîne une perte de temps et d'argent, ce qui retarde en fin de compte les résultats de la recherche. Une fois les cellules transférées d'un milieu de croissance cellulaire à un milieu de congélation, elles sont généralement congelées à une vitesse régulée et stockées dans de la vapeur d'azote liquide ou à une température inférieure à -130°C dans un congélateur mécanique. Le milieu de congélation CM-1 permet la cryoconservation des cellules à une température inférieure à -130°C (ou dans l'azote liquide), ce qui élimine essentiellement le besoin d'un congélateur ultra-bas supplémentaire et coûteux, ainsi que les processus de congélation à vitesse contrôlée, longs et exigeants. Il suffit de prélever les cellules, d'aspirer le milieu de croissance, de les remettre en suspension dans le CM-1, de les transférer dans un cryovial et de conserver le flacon à une température inférieure à -130 °C.
Longue durée de conservation
CM-1 est un milieu de cryoconservation contenant du sérum, prêt à l'emploi, qui peut être conservé au réfrigérateur jusqu'à un an.
Des centaines de chercheurs lui font confiance
Notre milieu de congélation cellulaire CM-1 est un produit leader sur le marché en Allemagne et en Europe et se distingue par de nombreuses publications impliquant des centaines de lignées cellulaires différentes dans le monde entier. Nous l'avons testé avec plus de 1000 lignées cellulaires issues de notre banque de cellules propriétaire.
Ingrédients optimisés
CM-1 contient des produits sériques. Les milieux de cryoconservation contenant du sérum protègent de manière optimale les cellules pendant leur congélation et présentent l'avantage d'un taux de récupération élevé. CM-1 ayant été testé avec une multitude de lignées cellulaires, vous pouvez être assuré que vos cellules se rétablissent toujours bien.
Contient du FBS, du DMSO, du glucose et des sels
Pouvoir tampon pH = 7,2 à 7,6
Applications et validation
Les cellules conservées dans notre milieu de congélation CM-1 peuvent être utilisées pour le comptage cellulaire, la viabilité et la cryoconservation, la culture cellulaire, la culture de cellules de mammifères, l'analyse de l'expression génique et le génotypage, la transcription in vitro et les réactions en chaîne par polymérase. L'efficacité de chaque lot est évaluée sur des cellules CHO-K1. Chaque lot est soumis à des tests de pH, d'osmolalité, de stérilité et d'endotoxines afin de garantir une qualité élevée.
La solution saline tamponnée au phosphate (PBS) est une solution tampon polyvalente utilisée dans de nombreuses applications biologiques et chimiques, ainsi que dans le traitement des tissus. Notre solution PBS est formulée avec des ingrédients de haute qualité pour garantir un pH constant pendant les expériences. L'osmolarité et les concentrations ioniques de notre solution PBS correspondent à celles du corps humain, ce qui la rend isotonique et non toxique pour la plupart des cellules.
Composition de notre solution PBS
Notre solution PBS est un mélange de tampons phosphatés et de solutions salines de qualité supérieure dont le pH est ajusté. À une concentration de travail de 1X, elle contient 137 mM de NaCl, 2,7 mM de KCl, 8 mM de Na2HPO4 et 2 mM de KH2PO4. Nous avons choisi cette composition sur la base des protocoles du CSHL et de Molecular cloning by Sambrook, qui sont des normes bien établies dans la communauté des chercheurs.
Applications de notre solution PBS
Notre solution PBS est idéale pour une large gamme d'applications dans la recherche biologique. Ses propriétés isotoniques et non toxiques la rendent idéale pour la dilution de substances et le rinçage de récipients cellulaires. Notre solution PBS avec EDTA peut également être utilisée pour désengager les cellules attachées et agglutinées. Cependant, il est important de noter que les métaux divalents tels que le zinc ne peuvent pas être ajoutés au PBS, car cela peut entraîner une précipitation. Dans ce cas, il est recommandé d'utiliser les tampons Good's. En outre, notre solution PBS s'est avérée être une alternative acceptable au milieu de transport viral pour le transport et le stockage de virus à ARN, tels que le SARS-CoV-2.
Stockage de notre solution PBS
Notre solution PBS peut être conservée à température ambiante, ce qui en facilite l'utilisation et l'accès.
En résumé
En résumé, notre solution PBS est un composant essentiel dans de nombreuses expériences biologiques et chimiques. Ses propriétés isotoniques et non toxiques la rendent adaptée à de nombreuses applications, de la culture cellulaire au milieu de transport viral. En choisissant notre solution PBS de haute qualité, les chercheurs peuvent optimiser leurs expériences et garantir des résultats précis et fiables.
Composition du PBS
Composants
mg/L
Sels inorganiques
Chlorure de potassium
200,00
Phosphate de potassium dihydrogène
200,00
Chlorure de sodium
8,000.00
hydrogénophosphate de di-sodium anhydre
1,150.00