Cellules HEK293 EBNA
Informations générales
Description | La transfection à grande échelle de cellules de mammifères est devenue une technologie indispensable pour la communauté scientifique. Elle permet de produire efficacement des quantités de r-protéines de l'ordre du milligramme ou du gramme dans un délai très court, quelques jours seulement après le clonage des ADNc dans le vecteur d'expression approprié. Parmi les différentes lignées cellulaires disponibles, la lignée HEK293 exprimant de manière stable l'antigène nucléaire-1 du virus d'Epstein-Barr (HEK293-EBNA1 ou 293E) est la plus utilisée pour les expériences de transfection à grande échelle. L'un des principaux avantages de l'utilisation des cellules HEK293-EBNA1 est leur compatibilité avec les vecteurs d'expression portant l'origine de réplication du virus d'Epstein-Barr, oriP, tels que le vecteur pTT. Cette compatibilité permet de multiplier par trois le rendement des protéines r par rapport à l'utilisation d'un vecteur ne portant pas l'oriP. En tirant parti de ce potentiel, les chercheurs peuvent désormais obtenir des rendements plus élevés des r-protéines souhaitées, ce qui les rapproche de leurs objectifs de recherche et de développement. |
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Organisme | Humain |
Tissus | Rein embryonnaire |
Synonymes | HEK293-EBNA, 293 c18, 293c18, HEK 293 c18, HEK-293 c18, HEK293-EBNA1, HEK-293-EBNA, HEK 293-EBNA, HEK 293 EBNA, HEK293EBNA, 293 EBNA, 293-EBNA1, 293-EBNA, 293/EBNA, 293EBNA, EBNA-293, EBNA293, HEK293E, HEK/EBNA, HEK-EBNA, HEK.EBNA, 293/EBNA-1 |
Caractéristiques
L'âge | Fœtus |
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Genre | Femme |
Morphologie | Épithéliale |
Propriétés de croissance | Adhérent |
Identifiants / Biosécurité / Citation
Citation | HEK293 EBNA (numéro de catalogue Cytion 300264) |
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Niveau de biosécurité | 2 |
Expression / Mutation
Expression de l'antigène | EBNA1 |
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Virus | Adénovirus 5 (transformant), EBV (exprime EBNA1) |
Manipulation
Milieu de culture | DMEM, w : 4.5 g/L Glucose, w : 4 mM L-Glutamine, w : 1.5 g/L NaHCO3, w : 1.0 mM Pyruvate de sodium (numéro d'article Cytion 820300a) |
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Suppléments moyens | Compléter le milieu avec 10% de FBS |
Solution de passage | Accutase |
Sous-culture | Retirer l'ancien milieu des cellules adhérentes et les laver avec du PBS dépourvu de calcium et de magnésium. Pour les flacons T25, utiliser 3-5 ml de PBS, et pour les flacons T75, 5-10 ml. Ensuite, recouvrir complètement les cellules avec Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laisser les cellules incuber à température ambiante pendant 8-10 minutes pour les détacher. Après incubation, mélanger délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifuger à 300xg pendant 3 minutes. Jeter le surnageant, remettre les cellules en suspension dans du milieu frais et les transférer dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais. |
Congélation du milieu | CM-1 (numéro de catalogue Cytion 800100) ou CM-ACF (numéro de catalogue Cytion 806100) |
Manipulation des cultures cryoconservées |
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Contrôle de qualité / Profil génétique / HLA
Stérilité | La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence. Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes. |
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