HMC3 rakud

550,00 €*

Tooted saadetakse külmutatuna kuivjääs krüotubides. Iga krüotub sisaldab tavaliselt 3 × 10 ⁶ rakku adhesiivsetele liinidele või 5 × 10⁶ rakku suspensiooniliinidele (üksikasjad on esitatud partii CoA-s).

Hinnad ilma maksudeta pluss saatmiskulud

cryovial

Toote number: 300102

Ohutuskaart

Toote leht

Analüüsisertifikaat (CoA)

Materjali üleandmise leping

Kirjeldus	Professor Tardieu töörühm töötas 1995. aastal välja inimese mikrogliarakkude klooni 3 (HMC3) rakuliini, milleks kasutas SV40-lt sõltuvat mikrogliarakkude immortaliseerimist inimese seljaaju ja kortikaalkudedest, mis saadi 8-12 nädala vanustest embrüotest. Neid esmaseid rakke, mida iseloomustab aeglane jagunemine ja keeruline morfoloogia, kasvatati esialgu 10-15 päeva enne immortaliseerimist. HMC3 rakud säilitasid mitmeid primaarse mikroglia põhijooni, nagu müeloidsete markerite nagu CD68, CD11b ja CD14 mitmekesine ekspressioon, kuigi ekspressiooni tase varieerus märkimisväärselt sõltuvalt primaarse antikeha valikust, eriti CD68 puhul. Pärast immortaliseerimist näitasid HMC3 rakud suurenenud proliferatsioonikiirust, mille kahekordistumisaeg jäi vahemikku 24-48 tundi, säilitades samal ajal paljud nende primaarsete vastavate rakkude fenotüübi ja morfoloogilised omadused. Võrreldes primaarsete rakkudega oli suurem CD68 EBM/11-positiivsete rakkude osakaal ja vähenenud fagotsüütiline aktiivsus. Antigeeni ekspressiooni stabiilsus kinnitati 35 läbimise jooksul, kusjuures rakud jäid positiivseks NSE, CD68 ja CD11b suhtes, kuid negatiivseks CD14, MHCII ja CD4 suhtes algtingimustes. Interferoon-γ-ga (IFNγ) kokkupuude tõstis siiski MHCII ekspressiooni, mis vastas rohkem primaarkultuuri reaktsioonidele samale ravile. Funktsionaalselt erines HMC3 liin teiste kloonidega võrreldes suurema interleukiin-6 (IL-6) produktsiooni poolest baastingimustes. Sellest hoolimata on otsene võrdlus primaarsete mikrogliarakkude tsütokiinide tootmisega metoodiliste erinevuste tõttu keeruline. Vastus lipopolüsahhariidi (LPS) stimulatsioonile tundus neil immortaliseeritud liinidel võrreldes primaarkultuuridega vähenenud. Kooskõlas primaarsete mikroglia omadustega ei tootnud HMC3 ja teised kloonitud liinid kasvaja nekroosifaktor-alfa (TNFα) ei spontaanselt ega pärast põletikuvastast stimulatsiooni, rõhutades inimese embrüonaalse mikroglia spetsiifilist omadust.
Organism	Inimene
Kude	Loote aju
Rakendused	3D rakukultuur, neuroteadus, neuroinflatsioon
Sünonüümid	Inimese mikroglia kloon 3, CHME-3, CHME3

Vanus	Loote
Sugu	Täpsustamata
Morfoloogia	Makrofaagid
Raku tüüp	Mikrogliarakk
Kasvuomadused	Kinnipeetav

Tsitaat	HMC3 (Cytioni katalooginumber 300102)
Bioturvalisuse tase	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	CVCL_II76
GMOde staatus	GMO-S1: See inimese loote aju mikroglia rakuliin (HMC3) sisaldab transfektsiooni teel sissetoodud SV40 T-antigeeni konstruktsiooni, mis toetab immortaliseerimist. Insert on mikrogliast saadud rakkudes stabiilselt olemas. See klassifikatsioon kehtib ainult Saksamaal ja võib mujal erineda.

Viruses	SV40 geneetiline materjal integreerub stabiilselt raku genoomi. Täielike viiruseosakeste aktiivset tootmist või vabanemist ei toimu, mis vähendab võimalikke bioloogilise ohutuse probleeme.

Kultuurikeskkond	DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820400a)
Täiendused	Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv	Accutase
Aja kahekordistamine	24 ja 48 tundi
Subkultuuride kasvatamine	Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külmutage keskkond	Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Rakkude sulatamine ja kultiveerimine	Veenduge, et viaal jääb tarnimisel sügavkülmutatud, sest rakud transporditakse kuiva jääga, et säilitada optimaalne temperatuur transpordi ajal. Pärast kättesaamist säilitage krüoviaal kas kohe temperatuuril alla -150 °C, et tagada rakkude terviklikkuse säilimine, või jätkake sammuga 3, kui on vaja koheselt kultiveerida. Kohese kultiveerimise korral sulatage viaali kiiresti, kastes selle 37 °C veevanni puhta vee ja antimikroobse ainega, segades seda õrnalt 40-60 sekundit, kuni alles jääb väike jääklomp. Tehke kõik järgmised toimingud steriilsetes tingimustes vooluhoodis, desinfitseerides krüoviaal enne avamist 70% etanooliga. Avage desinfitseeritud viaali ettevaatlikult ja viige rakususpensioon ettevaatlikult segades 15 ml tsentrifuugitorusse, mis sisaldab 8 ml toatemperatuuril olevat kasvukeskkonda. Rakkude eraldamiseks tsentrifuugige segu 300 x g juures 3 minutit ja visake ülejäänud külmutusvedelikku sisaldav supernatant ettevaatlikult ära. Resuspendeerige rakupellet ettevaatlikult 10 ml värskes kasvukeskkonnas. Adhereeruvate rakkude puhul jagage suspensioon kahe T25 kultuurkolvi vahel; suspensioonikultuuride puhul kandke kogu söötmekeskkond ühte T25 kolbi, et soodustada rakkude tõhusat koostoimet ja kasvu. Järgige kehtestatud subkultuuriprotokolle rakuliini jätkuvaks kasvuks ja säilitamiseks, tagades usaldusväärsed katsetulemused.
Inkubatsiooni atmosfäär	37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.
Kolvi katmine	Puudub
Külmutamise protseduur	Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.
Veotingimused	Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.
Ladustamistingimused	Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Steriilsus	Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil. Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Partii number	Sertifikaadi tüüp	Kuupäev	Kataloogi number
300102-220524	Analüüsitunnistus	23. May. 2025	300102
300102-230623	Analüüsitunnistus	23. May. 2025	300102
300102-290125	Analüüsitunnistus	23. May. 2025	300102

Kui kavatsete Cytioni rakuliine kasutada ainult ühe uurimisasutuse sisemisteks uuringuteks, täitke ja allkirjastage meie materjalide üleandmise leping (MTA) ning saatke see koos tellimusega.

Kõigi kommertsrakenduste puhul – sealhulgas, kuid mitte ainult tasuliste teenuste osutamine, kvaliteedikontrolli testid, toote turuleviimine, diagnostiline kasutamine või regulatiivsed uuringud – täitke palun kavandatud kasutusvorm, et saaksime koostada teie projektile sobiva lepingu.

Pange tähele: MTA kehtib ainult teatud rakuliinide puhul. Kui see teade ja MTA dokument on toote lehel, kehtib leping. Rakuliinide puhul, mis ei ole MTAga hõlmatud, ei näidata viidet lepingule. MTA ei kehti Ameerika, Hiina ega Taiwani klientide puhul. Palun võtke ühendust meie Ameerika Ühendriikide üksusega, et saada sobiv leping.

HMC3 rakud

Üldine teave

Omadused

Regulatiivsed andmed

Biomolekulaarsed andmed

Töötlemine

Kvaliteedikontroll / Geneetiline profiil / HLA

Analüüsisertifikaat (CoA)

Materjali üleandmise leping