خلايا CHO-CXCR4 CHO-CXCR4

بعد الذوبان، قم بتقسيم الخلايا بنسبة 1:2 إلى 1:3 في قوارير T25 واترك الخلايا تتعافى من عملية التجميد وتلتصق (للمزارع الملتصقة) لمدة 24 ساعة على الأقل.

1. تأكد من بقاء القارورة مجمدة بعمق عند التسليم، حيث يتم شحن الخلايا على ثلج جاف للحفاظ على درجات الحرارة المثلى أثناء النقل.

2. عند الاستلام، إما تخزين القارورة المبردة على الفور في درجة حرارة أقل من -150 درجة مئوية لضمان الحفاظ على سلامة الخلايا، أو الانتقال إلى الخطوة 3 إذا كانت الزراعة الفورية مطلوبة.

3. للاستزراع الفوري، قم بإذابة القارورة بسرعة عن طريق غمرها في حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية بماء نظيف وعامل مضاد للميكروبات، مع التحريك برفق لمدة 40-60 ثانية حتى تبقى كتلة ثلج صغيرة.

4. إجراء جميع الخطوات اللاحقة في ظروف معقمة في غطاء تدفق، مع تطهير القارورة المبردة بنسبة 70% من الإيثانول قبل فتحها.

5. افتح القارورة المعقمة بعناية وانقل معلق الخلية إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل يحتوي على 8 مل من وسط المستنبت بدرجة حرارة الغرفة مع الخلط برفق.

6. اطرد الخليط بالطرد المركزي عند 300 × جم لمدة 3 دقائق لفصل الخلايا وتخلص بعناية من المادة الطافية التي تحتوي على وسط التجميد المتبقي.

7. يُعاد ترسيب كريات الخلية برفق في 10 مل من وسط مزرعة جديد. بالنسبة للخلايا الملتصقة، قم بتقسيم المعلق بين قارورتي مزرعة T25؛ أما بالنسبة لمزارع التعليق، انقل كل الوسط إلى قارورة T25 واحدة لتعزيز تفاعل الخلايا ونموها بشكل فعال.

8. الالتزام ببروتوكولات الاستزراع الفرعي المعمول بها لاستمرار نمو خط الخلية والحفاظ عليه، مما يضمن نتائج تجريبية موثوقة.

37°C, 5% CO₂, humidified atmosphere.

Cryopreserved cell lines are shipped on dry ice in validated, insulated packaging with sufficient refrigerant to maintain approximately −78 °C throughout transit. On receipt, inspect the container immediately and transfer vials without delay to appropriate storage.

For long-term preservation, place vials in vapor-phase liquid nitrogen at about −150 to −196 °C. Storage at −80 °C is acceptable only as a short interim step before transfer to liquid nitrogen.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على الإنارة.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.