HEK293T 细胞
有关 HEK293T 细胞的基本事实
| 说明 | HEK 293T 是亲代 HEK 293 细胞的一种高度可转染的衍生物,是生物技术领域生产重组蛋白和各种疫苗的多功能强大工具。 HEK-293T 细胞是用编码 SV40 大 T 抗原的质粒转染胚胎肾脏 293 细胞产生的。最初的 HEK293 细胞系是由人类胚胎肾组织的上皮细胞发展而来的,其转化发生在研究人员进行的第 293 次实验中。 在疫苗研发领域,293T 胚胎肾细胞是生产病毒载体(包括腺病毒载体)的关键。在特定的培养条件下,HEK293T 细胞会被携带腺病毒和逆转录病毒元件(包括 SV40 复制源)的载体转染,从而产生病毒样颗粒(VLPs)。 VLPs 没有病毒遗传物质,是亚单位疫苗和基于 VLP 的疫苗的关键基础。各种转染方法促进了 293T 细胞重组蛋白的生产,重点是产生 AP 融合蛋白和其他构成疫苗抗原成分的蛋白类型。 293T 细胞系的基因组工程能力允许定制表达构建体,进一步促进了病毒载体的生产。再加上在悬浮培养或粘附条件下生产蛋白质的能力,使 293T 细胞系成为现代疫苗开发的全套解决方案。 |
|---|---|
| 有机体 | 人类 |
| 组织 | 肾脏 |
| 应用 | 疫苗开发 |
| 同义词 | Hek293T、HEK-293T、HEK 293T、HEK-293-T、HEK 293 T、293-T、293 T、293T、人胚胎肾脏 293T、293tsA1609neo |
关于 HEK293 的详细信息
| 年龄 | 胎儿 |
|---|---|
| 性别 | 女性 |
| 形态学 | 上皮样 |
| 生长特性 | 附着物 |
文件
| 引用 | HEK293T(Cytion 目录号 300189) |
|---|---|
| 生物安全等级 | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_0063 |
| 转基因生物现状 | GMO-S1:该HEK293T细胞系含有SV40,可支持转染质粒的高水平表达及高效的病毒包装。该构建体已整合到人胚胎肾细胞中。此分类仅适用于德国境内,在其他地区可能有所不同 |
遗传特征
| 表达的受体 | Vitronectin |
|---|---|
| 蛋白质表达 | CEA 阴性,p53 阳性 |
| 致肿瘤性 | 裸鼠 |
处理 HEK 293T 细胞
| 培养基 | EMEM(MEM Eagle),w:2 mM L-谷氨酰胺,w:2.2 g/L NaHCO3,w:EBSS(Cytion 文章编号 820100a)。 |
|---|---|
| 补充剂 | 在培养基中添加 10% FBS 和 1% NEAA |
| 解离试剂 | Accutase |
| 加倍时间 | 30 小时 |
| 亚培养 | 去除粘附细胞上的旧培养基,用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS,T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞,T25 烧瓶用 1-2 毫升,T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟,使其分离。孵育后,用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬,然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液,用新鲜培养基重悬细胞,并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。 |
| 播种密度 | 1×10⁴个细胞/cm²将在约4天内形成融合细胞层 |
| 流体更新 | 每周 2 次 |
| 解冻后恢复 | 解冻后,将细胞以5×10⁴个细胞/平方厘米的密度接种于培养皿中,使细胞从冷冻过程中恢复并至少贴壁24小时。 |
| 冷冻介质 | 我们使用完全生长培养基(包括 FBS)+10% DMSO 或 CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)作为冷冻保存培养基,以获得足够的解冻后存活率,CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂,可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。 |
| 解冻和培养细胞 |
|
| 培养氛围 | 37°C, 5%CO2, 加湿环境。 |
| 烧瓶涂层 | 无 |
| 冷冻程序 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 运输条件 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 储存条件 | 如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。 |
HEK 细胞质量验证
| 无菌 | 使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。 为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染,每天都要对细胞培养物进行目视检查。 |
|---|
分析证书(CoA)
| 地段编号 | 证书类型 | 日期 | 目录编号 |
|---|---|---|---|
| 300189-050824 | 分析证书 | 23. May. 2025 | 300189 |
| 300189-160824 | 分析证书 | 26. May. 2025 | 300189 |
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