P19细胞——利用P19细胞进行胚胎癌研究
P19是一种小鼠胚胎癌细胞系。它被广泛应用于生物医学研究，主要用于研究发育生物学、干细胞生物学、细胞分化以及药物筛选。 由于P19细胞具有分化能力，因此可用于研究组织形成和早期胚胎发育等复杂的生物过程。本文将探讨源自小鼠的P19细胞的基础知识。
- 培养基
- 含 5% 胎牛血清的 DMEM/Ham's F12 培养基， 3.1 g/L 葡萄糖、1.6 mM L-谷氨酰胺、1.0 mM 丙酮酸钠、15 mM HEPES 及 1.2 g/L NaHCO₃，用于培养 P19 细胞。
- 倍增时间
- 据报道，P19细胞系的倍增时间约为2至3天。
- 生长类型
- P19胚胎癌细胞系为贴壁型。
- 生物安全等级
- BSL-1
- 可从以下处获取
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P19细胞的一般特征与来源
在开始使用某条细胞系之前，了解其一般特征和来源至关重要。本节将涵盖以下内容：什么是 P19 细胞系？P19 细胞的大小是多少？P19 细胞的来源是什么？
- P19是一种多能性胚胎癌细胞，最初从C3H/He小鼠体内发生的畸胎癌中分离获得。该细胞系由McBurney和Rogers于1982年首次建立。
- P19细胞可在含血清的培养基中持续增殖。当暴露于维甲酸和二甲基亚砜（DMSO）等无毒药物时，它们可分化为其他细胞类型[1]。
- 这些小鼠癌细胞具有上皮样形态。
- P19细胞系具有正常二倍体雄性核型（n=40；XY）。
P19细胞培养信息
由于其独特的特性，P19细胞系在研究实验室中被广泛培养。其培养过程简单且易于管理。本节列出了维持和扩增P19细胞培养所需的所有关键信息。 我们将了解：P19细胞的倍增时间是多少？如何培养P19细胞系？P19是否属于贴壁细胞系？
P19细胞培养要点
倍增时间：
据报道，P19细胞系的倍增时间约为2至3天。
贴壁型还是悬浮型：
P19胚胎癌细胞系属于贴壁型。
传代比例：
P19细胞应每48小时传代一次，并保持1:10的分裂比例。贴壁细胞用1×磷酸盐缓冲盐水洗涤，并加入Accutase孵育直至细胞脱附。 向细胞中加入培养基，并通过离心收集细胞。将收集到的细胞小心重悬，并分装至新的培养瓶中。
生长培养基：
含5%胎牛血清的DMEM/Ham's F12培养基， 3.1 g/L 葡萄糖、1.6 mM L-谷氨酰胺、1.0 mM 丙酮酸钠、15 mM HEPES 及 1.2 g/L NaHCO₃，用于培养 P19 细胞。
培养条件：
培养P19胚胎癌细胞系必须使用设定为37°C、并供应5% CO₂的加湿培养箱。
储存：
冷冻的P19细胞小瓶应储存在温度低于-150°C的冷冻柜中或液氮气相中，以长期维持细胞的存活能力。
冷冻过程与培养基：
可使用CM-1或CM-ACF培养基，采用慢速冷冻法冷冻P19细胞，以保护细胞免受冷冻冲击并保持其存活率。
解冻过程：
冷冻的P19细胞可在37°C水浴中解冻，方法是将小瓶快速振荡40至60秒。向细胞中加入新鲜培养基，并进行离心以去除冷冻培养基中的成分。将细胞沉淀重新悬浮后，将其转移至新的培养瓶中进行培养。
生物安全等级：
P19细胞系需在1级生物安全实验室环境中操作。
P19细胞系：优点与缺点
本节将探讨P19细胞系的优缺点。
优点
- 分化潜能： P19细胞可分化为多种细胞类型，包括心肌细胞、神经元和小胶质细胞。其分化过程需要使用无毒药物，例如维甲酸和二甲基亚砜（DMSO）。 维甲酸可诱导神经元、小胶质细胞和星形胶质细胞的分化，而二甲基亚砜（DMSO）则能诱导搏动性心肌细胞和平滑肌细胞的分化。因此，P19细胞在研究细胞分化及发育过程方面具有重要价值。
- 模型系统： 多能性胚胎癌细胞系P19是研究早期胚胎发育的宝贵模型。研究人员利用P19细胞阐明细胞信号传导通路以及这些过程中涉及的细胞和分子机制。
缺点
- 小鼠来源： P19是一种小鼠胚胎癌细胞系。因此，利用这些细胞进行研究所得出的结果可能无法完全适用于人类生物学及生理过程。
P19细胞的研究应用
由于P19细胞具有分化能力，且与发育生物学及干细胞研究密切相关，因此具有多种研究应用。P19胚胎癌细胞的一些重要研究应用包括：
- 细胞分化研究：众所周知，P19细胞可分化为神经元、小胶质细胞、平滑肌细胞和心肌细胞；因此被广泛用于研究细胞分化过程。此外，它还有助于研究神经和心脏发育及其潜在机制。 2018年的一项研究发现，活性氧（ROS）会引导P19细胞分化为特定细胞类型，并阻止其向其他细胞类型的分化[3]。 另一项研究探讨了视黄酸介导的神经分化过程，并发现PI3K/Akt/GSK3β信号通路参与其中[4]。
- 发育生物学：P19细胞是研究早期胚胎发育的宝贵模型。它们有助于研究人员理解复杂的生物过程，例如胚胎发育过程中的组织形成。相关研究利用P19细胞，探讨了导致室间隔缺损（VSD）形成的分子因素。 研究结果表明，长非编码RNA SNHG6 通过负调控miRNA-101并激活Wnt/β-catenin通路，从而促进VSD的形成[5]。
- 药物筛选：P19小鼠胚胎癌细胞系还被用于筛选潜在的候选药物。 一项研究利用分化的P19细胞神经元，探究了合成L-多巴和刺叶豌豆种子水提取物对乙酰胆碱酯酶的神经保护性抑制作用。结果表明，与L-多巴相比，植物提取物表现出更有前景的效果 [6]。
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P19细胞：研究论文
本节将介绍几篇以P19细胞为研究对象的有趣论文。
垂体性激素调节胚胎干细胞和畸胎癌细胞迁移、粘附及增殖的新证据
该文章于2017年发表在《肿瘤学报告》（Oncology Reports）上。研究提出，垂体性激素驱动畸胎癌细胞系（包括P19细胞）的粘附、增殖和迁移。
这篇发表于《实验与分子医学》（2018年）的论文以P19细胞为研究对象，探讨了长非编码RNA uc.4的功能。研究结果表明，uc.4通过调节TGF-β信号通路影响细胞分化。
三维细胞培养与天然组织提取物对P19胚胎癌干细胞神经分化的协同效应
该研究论文于2018年发表在《组织工程与再生医学杂志》上。研究发现，天然脑组织提取物与三维细胞培养相结合，可加速P19胚胎癌细胞向神经细胞的分化。
菊苣（Cichorium intybus L.）叶提取物体外诱导胚胎癌干细胞分化为胰岛素分泌细胞
该研究于2020年发表在《民族药理学杂志》上。研究提出，菊苣（Cichorium intybus L.）叶提取物可诱导P19胚胎癌细胞分化为产生胰岛素的胰腺β细胞。
与合成L-多巴相比，Mucuna pruriens种子水提取物具有更佳的神经保护和乙酰胆碱酯酶抑制作用
该研究发表于《分子》（Molecules，2022年）。本研究探讨了Mucuna pruriens种子提取物对P19神经元的神经保护作用及乙酰胆碱酯酶抑制作用。
P19细胞系相关资源：实验方案、视频等
以下是关于P19细胞的若干资源。
- P19细胞神经元分化操作规程：本文包含P19细胞神经元分化操作规程以及关于P19细胞分化的其他有用信息。
- P19细胞转染：此链接将帮助您了解P19细胞转染操作规程。
以下链接包含 P19 细胞培养方案。
- P19细胞：该网站收录了关于P19细胞系的所有实用信息，包括其培养条件、P19细胞培养基、细胞传代等内容。
探索 P19 细胞系：常见问题
参考文献
- McBurney, M.W., P19胚胎癌细胞。《国际发育生物学杂志》，1993年，37(1)：第135-40页。
- Bressler, J. 等，P19胚胎癌细胞系：研究基因-环境相互作用的模型。《细胞培养技术》，2011：第223-240页。
- Pashkovskaia, N., U. Gey 和 G. Rödel，线粒体活性氧（ROS）引导小鼠多能 P19 细胞的分化。《干细胞研究》，2018，30：第 180-191 页。
- Fu, F. 等，全反式视黄酸通过PI3K/Akt/GSK3β信号通路诱导P19细胞分化为神经元。 《细胞生物化学杂志》，2020年，121(11)：第4386-4396页。
- Jiang, Y.等人，长非编码RNA SNHG6通过负调节miR-101和激活Wnt/β-catenin通路促进室间隔缺损的形成。《Die Pharmazie——国际药学杂志》，2019年。 74(1): 第 23-28 页。
- Kamkaen, N. 等，与合成 L-多巴相比，刺蒺藜种子水提取物具有更强的神经保护和乙酰胆碱酯酶抑制作用。《Molecules》，2022年。27(10)：第 3131 页。