B16细胞——肿瘤学研究中B16黑色素瘤细胞的基础指南
B16是一种源自小鼠的皮肤癌（黑色素瘤）细胞系。该细胞系是研究人类皮肤癌的有效体外模型，常用于探究实体瘤的形成及癌细胞的转移。
- 培养基
- B16细胞在含10%胎牛血清（FBS）的EMEM（Eagle's Minimum Essential Medium）培养基中培养。培养基应每周更换2-3次。
- 倍增时间
- B16细胞的平均细胞倍增时间估计为24小时。
- 生长类型
- B16细胞为贴壁细胞，呈单层生长。
- 生物安全等级
- BSL-1
本文将帮助您了解 B16 黑色素瘤细胞系的基础知识。具体而言，本文将涵盖以下内容：
B16细胞系的一般特征与来源
本文这一部分将介绍B16黑色素瘤细胞系的特征。您将了解到以下常见问题的答案，例如：什么是B16癌细胞系？B16细胞的来源是什么？B16细胞的大小是多少？
- B16细胞系建立于1954年。这些细胞源自缅因州杰克逊实验室（Jackson Laboratories）中自发出现皮肤肿瘤的C57BL/6J小鼠。
- 这些是具有黑色素生成能力的上皮细胞，能够转移至脾脏、肝脏和肺部。
- B16黑色素瘤细胞呈单层生长，具有上皮样和纺锤形的细胞形态。
- B16细胞系的大小约为15.4微米。
- B16 细胞有明显的亚克隆，包括 B16GMCSF、B164A5、B16FLT3 和 B16F10。这些亚系与亲本 B16 细胞不同，并保留了一些特定特征。 例如，它们在形态、细胞大小和其他特性方面存在差异。B16F10具有很强的肺转移能力，而与B16F10、B16-GMCSF和B16FLT3相比，B164A5是最具侵袭性的皮肤癌细胞系[1]。
B16细胞系的培养信息
在维持或培养细胞系之前，您可能需要了解倍增时间、细胞类型、培养基、培养条件等关键信息。本节包含培养 B16 细胞所需的所有必要信息。
B16细胞培养要点
细胞倍增时间：
B16细胞的平均倍增时间估计为24小时。
贴壁或悬浮培养：
B16细胞为贴壁细胞，呈单层生长。
接种密度：
建议B16细胞的接种密度为1至2×10⁴个细胞/cm²。将贴壁的B16细胞用1×PBS冲洗，并使用Accutase溶液使其从表面脱离。将细胞离心，并将细胞沉淀重新悬浮于培养基中。 随后将这些细胞分装至新的培养瓶中进行培养。
培养基：
B16细胞在含10%胎牛血清（FBS）的EMEM（Eagle's Minimum Essential Medium）培养基中培养。培养基应每周更换2-3次。
培养条件：
使用配备5%二氧化碳（CO₂）供应及37°C恒温的加湿培养箱培养B16细胞系。
储存：
为保持细胞活力，这些细胞应储存在-150 °C以下的温度下，或保存在液氮的蒸汽相中。
冷冻过程与培养基：
采用CM-1或CM-ACF冷冻培养基，通过慢速冷冻法对B16细胞进行冷冻。
解冻过程：
冷冻的 B16 细胞在含有抗菌剂的水浴中于 37 °C 进行解冻。解冻后的细胞可直接分装至含有生长培养基的培养瓶中进行培养。此外，也可将这些细胞离心以去除冷冻培养基成分，随后在新的培养基中进行培养。
生物安全等级：
B16细胞系应在生物安全一级实验室中进行操作或维护。
B16细胞系：优点与缺点
与其他细胞系一样，B16 细胞系也兼具独特的优缺点。本节列出了该黑色素瘤细胞系的一些显著优缺点。
优点
凭借其独特的优势，B16是首个被广泛应用于转移研究的有效小鼠模型。该皮肤癌细胞系的主要优势包括：
易于培养
B16细胞系在研究实验室中易于培养。它被广泛用于研究癌细胞生物学、信号传导通路等领域。
生长迅速
B16 黑色素瘤细胞系具有较高的增殖率，使其非常适合用于研究细胞分裂和生长过程。
致瘤性
B16是一种具有侵袭、迁移和增殖等肿瘤样特性的致瘤性细胞系。它对于研究肿瘤的形成、进展和转移具有重要价值。
缺点
B16细胞系的相关缺点包括：
缺乏与人类的相关性
由于 B16 属于小鼠黑色素瘤细胞系，可能无法准确反映人类皮肤癌的生物学特性，从而限制了研究成果的转化应用价值。
异质性
B16细胞具有异质性，在同一培养体系中表现出不同的遗传和表型特征。这可能影响结果的可靠性和可重复性。
B16细胞的应用
B16细胞系在研究中被广泛应用。该细胞系的一些有前景的应用包括：
- 肿瘤生物学：该小鼠皮肤癌细胞系具有致瘤性，被广泛用于研究肿瘤生物学。 已有多项研究利用 B16 细胞探索肿瘤细胞生长、增殖和转移背后的细胞机制。2020 年的一项研究利用 B16 细胞探究了长非编码 RNA（LncRNA MEG3）在黑色素瘤形成、生长和转移中的作用。 该研究发现，这种非编码RNA通过调节miRNA-21/E-Cadherin轴来促进这些细胞事件的发生[2]。类似地，还有研究利用B16细胞探讨了Notch1信号通路在肿瘤诱导的免疫抑制中的潜在作用[3]。
- 药物研发：B16细胞被用于验证和测试候选药物的潜在治疗效果。 一项研究利用B16细胞系评估了天然化合物新藜芦酸的抗肿瘤效应。研究结果表明，该化合物通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导癌细胞凋亡[4]。 另一项研究利用 B16 细胞系探究了皂苷人参皂苷 Rg3 的抗黑色素瘤效应。该研究提出，这种天然化合物通过下调 ERK 和 Akt 信号通路发挥抗肿瘤活性 [5]。
5. 以B16细胞为研究对象的学术论文
以下是一些以B16黑色素瘤细胞系为研究对象的重要论文。
长非编码RNA MEG3通过调节miR-21/E-钙粘蛋白轴促进黑色素瘤的生长、转移和形成
发表于《Cancer Cell International》期刊（2020年）的这项研究提出，长非编码RNA MEG3通过调节miR-21/E-钙粘蛋白轴，增强了B16黑色素瘤细胞的形成、生长和转移。
一种新型补骨脂素衍生物——MPFC通过激活B16细胞中的p38 MAPK和PKA信号通路增强黑色素生成
该论文发表于2018年的《国际分子医学杂志》。本研究探讨了补骨脂素衍生物——4-甲基-6-苯基-2H-呋喃[3,2-g]色原-2-酮（MPFC）在B16细胞中的黑色素生成效应及其机制。 研究提出，该衍生物通过刺激PKA和p38 MAPK细胞信号传导来促进黑色素生成。
黑色素瘤细胞中的Notch1信号传导通过上调TGF-β1促进肿瘤诱导的免疫抑制
该研究于2018年发表在《实验与临床癌症研究杂志》上。研究结果表明，B16细胞中Notch1信号通路的激活可能通过上调TGF-β1基因的表达来抑制抗肿瘤免疫。
新栀子酸通过PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导黑色素瘤B16细胞凋亡
该研究由吴春兰及其同事于2020年开展，并发表于《波兰生物化学杂志》。研究指出，天然化合物新栀子酸可通过调节PI3K/Akt/mTOR信号级联反应，导致B16黑色素瘤细胞凋亡。
一种作为强效抗癌剂的铱(III)配合物通过抑制AKT/mTOR通路诱导B16细胞凋亡和自噬
该研究论文于2018年发表于《欧洲药物化学杂志》。在这项研究中，研究人员利用B16黑色素瘤细胞，探究了铱(III)配合物这一化合物的抗癌活性。
阿兰酮可诱导黑色素瘤B16和A375细胞发生细胞周期阻滞和凋亡
该研究提出，植物活性成分阿兰酮（Ailanthone）具有抗癌潜力，因为它能诱导B16和A375黑色素瘤细胞发生凋亡和细胞周期阻滞。该论文于2019年发表在《生物分子》（Biomolecules）上。
B16细胞系资源：操作指南、视频及其他
关于B16细胞系的培养和转染方案，现有资源较为有限。
- 黑色素瘤细胞培养：本视频提供了培养黑色素瘤细胞系的宝贵建议。
- 细胞系的传代：本视频讲解了细胞系的一般传代操作流程。
- B16F10细胞系的转染：本视频详细说明了B16黑色素瘤细胞亚系的转染方案，可帮助您优化B16细胞的转染流程。
以下是针对 B16 细胞的一些细胞培养方案。
- B16细胞培养：本网站包含培养B16细胞所需的所有必要信息，包括生长培养基、传代、解冻和冷冻细胞。
参考文献
- Danciu, C. 等，四种不同小鼠黑色素瘤B16亚系的行为：C57 BL/6J皮肤。国际实验病理学杂志，2015. 96(2): 73-80页。
- Wu, L. 等，长链非编码RNA MEG3通过调节miR-21/E-钙粘蛋白轴促进黑色素瘤的生长、转移和形成。《国际癌症细胞》，2020年，第20卷：第1-14页。
- 杨，Z. 等，黑色素瘤细胞中的 Notch1 信号传导通过上调 TGF-β1 促进肿瘤诱导的免疫抑制。《实验与临床癌症研究杂志》，2018. 37(1): 1-13 页。
- 吴，C. 等，新甘草酸通过PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导黑色素瘤B16细胞凋亡。《波兰生物化学杂志》，2020年，67(2)：第197-202页。
- Meng, L. 等，人参皂苷Rg3通过下调ERK和Akt通路在黑色素瘤中的抗肿瘤活性。《国际肿瘤学杂志》，2019年，54(6)：第2069-2079页。